本发明专利技术公开了一种嵌合蛋白质，是在人乳头瘤病毒HPV16型L1蛋白质的环部位即第140与141个氨基酸之间插入一个人乳头瘤病毒16型的E7表位得到的；其中，人乳头瘤病毒16型的E7表位具有编码如下蛋白质(a)的基因：(a)由MLDLQPETT简称12-20E7表位、RAHYNIVTF简称49-57E7表位、LLMGTLGIV简称82-90E7表位、或TLGIVCPI简称86-93E7表位所示的氨基酸序列组成的蛋白质。还公开了由上述嵌合蛋白质聚集而成的病毒样颗粒和由病毒样颗粒组成的混合物，及上述病毒样颗粒及病毒样颗粒混合物在制备人乳头瘤病毒HPV16型L1-病毒样颗粒疫苗中的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术具体涉及。
技术介绍
人乳头瘤病毒(HPV)(附图1所示)是小型DNA病毒，存在100个以上的基因型， 其中有 15 个基因型(高危型16、18、31、33、35、39、45、52、56、58、59、66、68、73 型)是子宫颈癌的原因。HPV16型在50-60%的子宫颈癌中被检出。在欧美以18型居多，在亚洲以16、 58型居多。HPV病毒壳体为正20面体骨架上具有12分子的L2蛋白质的结构，所述正20面体骨架由72个Ll蛋白质五聚体形成。L2蛋白质的两端位于病毒壳体的内部，而其N末端侧的一部分露出在壳体表面(附图2所示)。如果采用重组DNA技术仅使Ll蛋白质大量表达，则会产生病毒样颗粒(Virus-like particle ；VLP) 0如果将牛乳头瘤病毒、棉尾兔乳头瘤病毒的VLP或L2蛋白质接种于动物，则会对病毒侵染表现出抵抗性。具体参见附图2中 HPV和VLP的截面示意图。目前，尚没有可供HPV增殖的培养细胞系。为了监测HPV的感染，制作了假病毒。 在表达SV40T抗原的人293细胞中导入具有SV40复制起点的分泌性碱性磷酸酶(SEAP)表达质粒、以及Ll和E7蛋白质表达质粒，则复制的SEAP表达质粒组入L1/E7-病毒样颗粒， 从而形成了感染性假病毒(如附图3所示)。可以通过抑制假病毒的感染性的活性来测定中和抗体，具体参见非专利文献 1 (Rose, R. C.，Bonnez, W.，Reichman, R. C.，Garcea, R. L.， 1993.人乳头瘤病毒11型Ll蛋白质在昆虫细胞中的表达在体内和体外组装成病毒样颗粒 J. Virol. 67，1936-1944)。HPV的VLP接种于动物而得到的抗血清具有基因型特异性的中和活性。由此Merck 公司开发出HPV16、18型VLP的混合疫苗，具体参见非专利文献2 (Chen，X. S.，Garcea，R. L.， Goldberg, I.，Casini，G.，Harrison, S. C. ,2000.来自人乳头瘤病毒 16 型 Ll 蛋白质的小病毒样颗粒的结构.Mol. Cell 5，557-567.)和非专利文献3 (Harper，D. Μ.，et al.由一项随机对照实验得出的结果表明一种二价Ll病毒样颗粒疫苗抗人乳头瘤病毒16型和18型的效果持续达 4. 5 年.Lancet 367 (9518)，1247-1255.)。这些疫苗在大规模临床实验中显示出基因型特异性的感染预防效果，Merck公司的疫苗于2006年取得了 FDA和欧洲委员会的认证并上市销售。如上述，如果用HPV的Ll-病毒壳体免疫动物，则会诱导出极其基因特异性的免疫应答。使用16型Ll-病毒壳体疫苗进行的临床实验的中间成绩显示对16型的感染的预防有效性，但也显示对于其它基因型基本没有预防效果。因此，为了用疫苗阻止子宫颈癌的发病，至少必须开发出能够抵抗所有高危型的疫苗抗原。在15个高危HPV群体中，现在销售的HPV疫苗仅对16型和18型有效。因为VLP 诱导基因型特异性的中和抗体，为了针对全部高危HPV群，必须使用15种VLP的鸡尾酒，以此作为实用性疫苗抗原是困难的。因此，希望开发诱导交叉反应性中和抗体的疫苗抗原。专利文献1 (W02007/018049)记载的抗原是至少能够抗全部高危型的抗原，而且是基因型共有性更高的抗原。但是，其存在以下问题专利文献1的研究中使用的感染性假病毒仅为16、18型，相对于这些感染性假病毒，专利文献1记载的抗原显示了良好的中和活性。但是，随后，本专利技术人针对专利文献1中的抗原对新开发的31、53、58型的感染性假病毒进行的中和实验表明，专利文献1记载的抗原抗31、52、和58型的中和活性不高。因而， 开发出一种提供能够诱导抗高危型人乳头瘤病毒的交叉反应性中和抗体的疫苗抗原是目前研究的方向。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供一种嵌合蛋白质，该嵌 合蛋白质通过在在人乳头瘤病毒HPV16型Ll蛋白质的环部位即第140与141个氨基酸之间插入一个人乳头瘤病毒16型的E7表位而得到的。其能够制作出诱导力更强的基因型共有中和抗体的疫苗抗原，该疫苗抗原是至少能够抵抗所有高危型的抗原，而且是基因型共有性更高的抗原。本专利技术的第二个目的在于提供一种由上述嵌合蛋白质聚集制成的病毒样颗粒及其制备方法。本专利技术的第三个目的在于提供上述病毒样颗粒在制备人乳头瘤病毒HPV16型 Ll-病毒样颗粒疫苗中的应用。本专利技术的第四个目的在于提供一种病毒样颗粒的混合物，该病毒样颗粒混合物含有上述由嵌合蛋白质聚集制成的病毒样颗粒中的两种、三种或全部。本专利技术的第五个目的在于提供上述病毒样颗粒混合物在制备人乳头瘤病毒HPV16 型Ll-病毒样颗粒疫苗中的应用，其中所述的人乳头瘤病毒HPV16型Ll-病毒样颗粒疫苗能够诱导出至少抗16型、18型、31型、52型和58型人乳头瘤病毒的中和抗体。本专利技术的第六个目的在于提供一种蛋白质复合体，该复合体为上述具有编码(a) 或(b)蛋白质基因的人乳头瘤病毒16型的E7表位与匙孔血蓝蛋白经连接形成的复合体。本专利技术的第一个目的是通过如下技术方案来实现的一种嵌合蛋白质，该嵌合蛋白质是在人乳头瘤病毒HPV16型Ll蛋白质的环部位即第140与141个氨基酸之间插入一个人乳头瘤病毒16型的E7表位而得到的；其中，所述的人乳头瘤病毒16型的E7表位具有编码如下蛋白质(a)的基因(a)具有 MLDLQPETT 简称 12-20E7 表位、RAHYNIVTF 简称 49_57E7 表位、LLMGTLGIV 简称 82-90E7 表位、或TLGIVCPI简称86-93E7表位所示的氨基酸序列。所述的E7表位还可以是具有编码如下蛋白质(b)的基因将(a)限定的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有与原人乳头瘤病毒16型E7表位的VLP 的交叉反应性相同的交叉反应性的由(a)衍生的蛋白质。12-20E7表位由HPV16型的E7蛋白质的氨基酸12-20区域的9个氨基酸构成。 49-57E7表位由HPV16型的E7蛋白质的氨基酸49-57区域的9个氨基酸构成。82-90E7表位由HPV16型的E7蛋白质的氨基酸82-90区域的9个氨基酸构成。86-93E7表位由HPV16 型的E7蛋白质的氨基酸86-93区域的8个氨基酸构成。而且，在本专利技术中，从蛋白质的氨基末端起依次对氨基酸残基进行编号，例如第50 号位的氨基酸记作氨基酸50。本专利技术的第二个目的是通过如下技术方案来实现的一种嵌合病毒样颗粒，采用上述的嵌合蛋白质聚集制成。即本专利技术所述的病毒样颗粒是在人乳头瘤病毒HPV16型Ll蛋白的环部位即第140 与141个氨基酸之间插入1个人乳头瘤病毒16型的E7表位而得到的嵌合蛋白质的聚集体， 其中，所述的人乳头瘤病毒16型的E7表位具有编码如下蛋白质(a)或(b)的基因(a)具有 MLDLQPETT 简称 12-20E7 表位、RAHYNIVTF 简称 49-57E7 表位、LMGTLGIV 简称 82-90E7 表位、或TLGIVCPI简称86-93E7表位所示的氨基酸序列。上述的E7表位还可以是具有编码如下蛋白质(b)的基因将(a)限本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种嵌合蛋白质，其特征是：该嵌合蛋白质是在人乳头瘤病毒ＨＰＶ１６型Ｌ１蛋白质的环部位即第１４０与１４１个氨基酸之间插入一个人乳头瘤病毒１６型的Ｅ７表位而得到的。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：尹海滨，安鸿，
申请(专利权)人：广州市元通医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：81
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