本发明专利技术涉及病毒、组合物及其制备或纯化领域，具体涉及一种丙型肝炎病毒完整结构蛋白与GB病毒B的嵌合病毒，该嵌合病毒由GB病毒B的5’端非编码区序列、丙型肝炎病毒的完整结构蛋白基因序列和GB病毒B的非结构蛋白及3’端非编码区序列依次连接构成，其中丙型肝炎病毒的完整结构蛋白基因序列是1b基因型丙型肝炎病毒的完整结构蛋白基因序列。该病毒可以通过肝内注射和静脉注射含嵌合病毒的原代狨猴血清成功感染狨猴。该嵌合病毒模拟了丙型肝炎病毒在灵长类动物体内感染及免疫状态，提供了对丙型肝炎病毒完整结构蛋白免疫测定及评价的平台，可解决因缺少小型灵长类动物感染模型限制丙型肝炎免疫防治研究与疫苗评价等科学问题。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及病毒、组合物及其制备或纯化领域，特别涉及以引入外来基因材料修饰的病毒领域。
技术介绍
目前全世界范围内，大约有1.7亿人感染了丙型肝炎病毒Ofepatitis C Virus, HCV)。丙型肝炎病毒是经血液传播的、引起急/慢性肝炎的主要致病因子之一，全球各地 HCV感染流行状况差异较大，以发展中国家最为严重。丙型肝炎病毒感染者中50-85%发展成为慢性肝炎，其中10-20%进一步发展为诸如肝硬化等复合慢性肝病，1-5%的病人在二三十年后发展为肝癌。然而，目前对丙型肝炎病毒感染仍缺乏十分有效的治疗药物，更严峻的是，迄今全球还没有丙肝预防性疫苗。直到今天丙型肝炎的研究也还没有取得突破性的进展，关键因素是由于丙型肝炎病毒只能感染人类和黑猩猩，因此缺乏理想的丙型肝炎病毒感染小型灵长类动物模型，极大地限制了丙型肝炎病毒免疫防治的研究。丙型肝炎病毒是一种黄病毒科肝病毒属的病毒，其基因组由结构(核心，囊膜) 和非结构(蛋白酶，螺旋酶，酶辅助因子)蛋白及非编码区组成。丙型肝炎病毒核心蛋白 (Core)为病毒核衣壳的重要组成部分，与糖蛋白作用组装出完整的HCV病毒颗粒，可以通过与病毒RNA的结合来调节HCV基因组的翻译，具有基因调控作用，可以参与HCV感染后的免疫调控。囊膜蛋白(E) 二聚体(E1E2，含p7蛋白)直接介入与宿主细胞的相互作用，并诱导机体产生中和抗体和特异性细胞免疫，是主要的保护性抗原。然而，自然感染(野生)毒株尚不能细胞培养，特别是尚无有效的小型灵长类动物感染模型模拟真实的丙型肝炎病毒感染，极大地限制着丙型肝炎病毒免疫研究。现有技术中，利用嵌合病毒的研究已见于HCV/HIV、HCV/VSV、HCV/YFV、HCV/CSFV、 HCV/BVDV和HCV/PV。这些构建的HCV嵌合病毒或称伪病毒(pseudotype virus)主要用于丙型肝炎病毒蛋白与细胞的相互作用、中和抗体测定，以及基因调控等研究。由于这些骨架病毒均无嗜肝细胞性，故不能用于丙型肝炎疫苗免疫防治研究。GB病毒B(GBV-B)是一种最近似丙型肝炎病毒，同属黄病毒科肝病毒属的病毒。 与丙型肝炎病毒不同，GB病毒B可在小型灵长类动物狨猴common marmoset (CalIithrix jacchuejacchus)和小娟猴(Tamarin，Saguinus spp)体内复制并导致急或慢性肝炎。但是GB病毒B仍然与丙型肝炎病毒存在差异，不能完全模拟丙型肝炎病毒在灵长类动物体内的感染和免疫状态，因此，如果以GB病毒B基因组为骨架，以丙型肝炎病毒的功能基因取代GB病毒B的相应功能区，构建HCV/GBV-B嵌合病毒，则是利用感染模型研究丙型肝炎病毒免疫的理想方案。然而，由于将丙型肝炎病毒的完整功能蛋白基因替换到GB病毒B基因组中存在一定的困难，并且构建的含完整功能蛋白的嵌合病毒是否能够感染小型灵长类动物存在不确定性和风险性，因此，目前利用HCV/GBV-B嵌合病毒的研究仅见于将较小基因片段的丙型肝炎病毒的5’ -NCR，p7或HVRl替换到GB病毒B基因组中，这些只包含了丙型肝炎病毒很短基因片段的嵌合病毒只能用于研究这些特定基因片段的功能，无法表明丙型肝炎病毒与宿主之间的相互作用，不能完全模拟丙型肝炎病毒在灵长类动物体内的免疫反应。上述将丙型肝炎病毒的5’ -NCR，p7或HVRl替换到GB病毒B基因组中的方案，参见 Rijnbrand,R. et al. Achimeric GB virus B with 5' nontranslated RNA sequence from hepatitis C virus causeshepatitis in tamarins. Hepatology. 41,986-994 (2005)> Takikawa, S. et al.Functionalanalyses of GB virus B pl3 protein-Development of a recombinant GB virus B hepatitisvirus with a ρ7 protein. Proc Natl Acad Sci USA. 103, 3345-3350 (2006) > Haqshenas, G. , Dong, X. , Netter, H. , Torresi, J. &Gowans, E. J. A chimeric GB virus B encodingthe hepatitis C virus hypervariable region 1 is infectious in vivo. J. Gen. Virol. 88,895-902(2007) ·禾口Griffin,S. et al. Chimeric GB virus B genomes containinghepatitis C virus ρ7 are infectious in vivo. J. Hepatol. 49，908-915 (2008)等文献的报导。
技术实现思路
本专利技术要求解决的技术问题是提供一种丙型肝炎病毒完整结构蛋白与GB病毒B 的嵌合病毒。该病毒可感染狨猴，模拟丙型肝炎病毒在灵长类动物体内感染及免疫状态，进行丙型肝炎病毒免疫防治研究与疫苗评价。一种丙型肝炎病毒完整结构蛋白与GB病毒B的嵌合病毒，该嵌合病毒由GB病毒B 的5’端非编码区序列、丙型肝炎病毒的完整结构蛋白基因和GB病毒B的非结构蛋白及3’ 端非编码区序列依次连接构成。本专利技术所述的丙型肝炎病毒完整结构蛋白与GB病毒B的嵌合病毒的基因结构和构建模式见图1。其中GB病毒B全基因组由5’端非编码区(5’-NCR)、核心蛋白基因(core)、 完整囊膜蛋白基因(Ε1Ε2ρ13)、非结构蛋白2到5B(NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B)基因和3’端非编码区(3，-NCR)组成。核心蛋白基因(core)和完整囊膜蛋白基因(Ε1Ε2ρ13) 共同构成完整结构蛋白基因(CoreElE2pl3)。虚线代表用丙型肝炎病毒完整结构蛋白 (coreElE2p7)基因(图中阴影部分表示)替换GB病毒B相应区域，得到的丙型肝炎病毒完整结构蛋白与GB病毒B的嵌合病毒全基因组由GB病毒B 5’端非编码区(5’ -NCR)、丙型肝炎病毒核心蛋白基因(core)及完整囊膜蛋白基因(ElE2p7)、GB病毒B非结构蛋白2到 5B(NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B)基因和 3，端非编码区(3，-NCR)组成。本专利技术上述的丙型肝炎病毒的完整结构蛋白基因序列可以是不同基因型丙型肝炎病毒的完整结构蛋白基因序列，还可以是同一基因型不同独立来源的丙型肝炎病毒的完整结构蛋白基因序列。本专利技术上述的丙型肝炎病毒的完整结构蛋白基因序列最好是Ib基因型丙型肝炎病毒的完整结构蛋白基因序列。Ib基因型丙型肝炎病毒的完整结构蛋白基因序列与现有基因型la、lb、2a、2b、3、4、5和6型丙型肝炎病毒之间的核苷酸序列同源性为 69. 1%，可以代表全部基因型丙型肝炎病毒的完整结构蛋白。当所述的丙型肝炎病毒的完整结构蛋白基因序列是Ib基因型丙型肝炎病毒本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种丙型肝炎病毒完整结构蛋白与ＧＢ病毒Ｂ的嵌合病毒，该嵌合病毒由ＧＢ病毒Ｂ的５’端非编码区序列、丙型肝炎病毒的完整结构蛋白基因序列和ＧＢ病毒Ｂ的非结构蛋白及３’端非编码区序列依次连接构成。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黎诚耀，李婷婷，帅丽芳，王文敬，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：81
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