苦碟子总黄酮及其制备方法和含它的冻干粉针与检测方法技术

本发明专利技术公开了一种苦碟子总黄酮及其制备方法，该苦碟子总黄酮含木犀草素－７－Ｏ－β－Ｄ－吡喃葡萄糖醛酸苷（Ｃ↓［２１］Ｈ↓［１８］Ｏ↓［１２］）不少于８．００％。本发明专利技术还公开了含该苦碟子总黄酮的注射用冻干粉针，组分为苦碟子总黄酮２０ｇ，甘露醇６０ｇ加注射用水至２０００ｍｌ，每支含精制苦碟子总黄酮２０ｍｇ。本发明专利技术也公开了该注射用冻干粉针的制备方法和质量控制方法。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种苦碟子总黄酮及其制备方法，本专利技术还涉及含该苦碟子总黄酮的苦碟子冻干粉针，属于药学领域。本专利技术也涉及该冻干粉针的制备方法和质量控制方法。
技术介绍
苦碟子为1-2年生草本(Ixeris sonchifolia(Bge)Hance)干燥全草，具有清热解毒，消肿止痛之功效，主要含有黄酮、腺苷、有机酸、香豆素、氨基酸、植物甾醇、糖类等成分。现代医学研究表明，苦碟子中黄酮类化合物具有扩张心、脑血管，增加冠脉流量，抑制血小板聚集，抑制体内血栓形成等作用。目前市场已有药品碟脉灵注射液，但是由于活性成分不明确，所以很难控制其质量。本专利技术人从精制苦碟子总黄酮中分离出2种新黄酮苷化合物(木犀草素7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷)，经药理活性实验证明两种新黄酮苷对大鼠急性心肌缺血有明显保护作用。据此，可以确定有效部位，提高有效部位的含量，从而制得苦碟子冻干粉针，使其达到中药注射剂的要求，确保安全有效，疗效好于碟脉灵注射液。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种苦碟子总黄酮。本专利技术的另外一个目的是提供该苦碟子总黄酮的制备方法。本专利技术的又一个目的是提供一种含该苦碟子总黄酮的冻干粉针。本专利技术的另外一个目的是提供该苦碟子冻干粉针的制备方法。本专利技术的又一个目的是提供该苦碟子冻干粉针的质量控制方法。本专利技术所述的苦碟子总黄酮由下列方法制备得到取苦碟子药材加水煎煮，将煎液，浓缩至每1ml相当于原生药1g，放冷，搅拌下加乙醇，使含醇量达80％，静置，滤过，滤液搅拌下加碱调节pH值至11，静置，离心，沉淀物加10倍量水，搅拌，离心，沉淀物加乙醇使含醇量达90％，搅拌下加酸，调节pH值至5，离心，离心液搅拌下加碱溶液，调节pH值至6.5，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水溶解，冷冻，室温融化，减压滤过，滤液冷冻干燥，即得苦碟子总黄酮，本品为淡黄棕色无定形粉末或疏松固体状物，其中含木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(C21H18O12)不少于8.00％。优选由下列方法制备得到取苦碟子药材，加水煎煮二次，第一次加12倍量水，煎煮1小时，第二次加10倍量水，煎煮1小时；合并煎液，浓缩至每1ml相当于原生药1g，放冷，搅拌下加乙醇，使含醇量达80％，静置12小时，减压滤过，滤液搅拌下加10％氧化钙乳，调节pH值至11.0，静置0.5小时，离心，沉淀物加10倍量水，搅拌10分钟，离心，沉淀物加乙醇使含醇量达90％，搅拌下加50％硫酸溶液，调节pH值至5.0，离心，离心液搅拌下加40％氢氧化钠溶液，调节pH值至6.5，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加注射用水溶解至100ml，冷冻24小时，室温融化，减压滤过，滤液冷冻干燥，得苦碟子总黄酮。本专利技术所述的含上述苦碟子总黄酮的注射用冻干粉针，含苦碟子总黄酮不少于80.0％。该注射用苦碟子冻干粉针的制备方法包括下列步骤 取苦碟子总黄酮20g、甘露醇60g，加注射用水适量使溶解，100℃蒸汽灭菌30分钟，加注射用水定容至2000ml，减压滤过，滤液无菌分装于西林瓶中，冷冻干燥，密塞，压盖，制成1000支。其剂型选择的依据与预试验结果如下(一)基于国内已有药品“碟脉灵注射液”多年临床应用的确切疗效，现将水针剂改为冻干粉针剂，提高了产品质量及其稳定性，确保安全可靠，有利于储存运输。(二)对注射用苦碟子静脉给药的安全性试验，参照部颁《中药注射剂研制指导原则(试行)》的安全试验进行了急性安全性、异常毒性、过敏及溶血等预试验，结果表明，注射用苦碟子静脉给药后的各项安全性试验均为阴性，保证安全可靠。综合上述结果，苦碟子药材经提取、分离、纯化后所制得的注射用苦碟子，静脉给药具备其时效及疗效优势。长期储存可确保制剂的稳定性，并显示出安全可靠。故该制剂选择冻干粉针，静脉途径给药为最理想的剂型。(一)提取工艺的研究苦碟子药材中含黄酮类、腺苷、有机酸等成分，其中以黄酮类化合物作为有效成分。黄酮类化合物一般易溶于水、甲醇、稀乙醇等溶媒中。因此，提取溶媒确定为水。工艺研究中考察了加水量、提取次数、提取时间对收率的影响，经正交试验确定优选条件为提取2次，每次1小时，第一次加水12倍量，第二次加水10倍量，此条件即可保证80％以上黄酮类成分被提取出来，节省时间，能源及成本。(二)分离工艺的研究提取液中除黄酮类成分外，还含有多糖、蛋白质、鞣质等水溶性成份，实验中我们选用了两种分离方法，进行了对比实验。结果表明，澄清剂除杂质方法比较繁琐，而且对多糖类成分没有吸附作用，除杂质不完全，工业生产未采用。选用醇沉淀法除杂质，操作简便，乙醇可回收后反复使用，降低成本，并且除杂质效果要好于澄清剂。为此，本工艺选用了乙醇沉淀除杂质的方法，药液浓缩至每1ml含1g药材，加入乙醇至含醇量为80％最佳。(三)纯化工艺的研究将制剂中黄酮类化合物作为有效成分，根据分离纯化黄酮类成分的经验，选用大孔吸附树脂法和氧化钙乳法进行了纯化对比实验。结果表明，大孔树脂法操作比较简便，适用于从大体积的水溶液中收集黄酮类化合物，但经纯化的样品其总黄酮含量仅为50％左右。而碱酸法纯化所得的样品其总黄酮含量可达到75％左右，相比，采用大孔树脂的方法纯化在生产中不仅要对使用过的树脂反复再生或更新，而且收率低。而碱酸法所得样品纯度很容易达到注射剂要求，为了提高样品的纯度，对氧化钙乳调pH值，水洗涤络合物的条件及硫酸溶液调pH值等条件进行了考察，确定最佳纯化条件为提取液经乙醇沉淀至80％，离心液加10％氧化钙乳调pH至10，离心，沉淀水洗涤一次后，转移至90％乙醇中，加50％硫酸调pH为5，离心，离心液加40％氢氧化钠调pH为6.5，为纯化的最佳条件。研制中，将市场已有药品碟脉灵注射液的制备工艺进行了考察和完善，新工艺的创新点为1.增加了乙醇沉淀除杂质，避免了原工艺中采用活性炭除杂质的不利因素。2.增加了水洗涤氧化钙络合物是确保有效部位含量达到注射剂要求的关键一步。经试制的精制苦碟子总黄酮含量可达到80％以上，各项检查指标符合注射剂静脉给药的要求，并与碟脉灵注射液同等量药材提取物进行了药效学对比实验，结果表明，精制苦碟子总黄酮的活性明显高于碟脉灵注射液。该工艺设计合理，具有创新性和生产实用性。(四)成型工艺的研究中药成分复杂，在水溶液中易降解，而且微生物容易在水溶液中滋生，所以，中药注射剂的稳定性是注射剂中比较难以控制的问题，它可直接影响产品的质量和疗效，故选用合适的剂型可避免这些问题的出现，确保产品的安全可靠及其稳定性。(一)冻干粉针剂型的选择由于本品装量在20mg/瓶时，就达到有效剂量，所以如果选择粉针剂型，在安瓶的装量上有一定困难，不便于直接制成粉针剂，故选定冻干粉针剂型。(二)处方选择试验注射用苦碟子的拟临床用量为每次40mg，为便于临床应用，确定每支装药20mg，将注射用苦碟子分别配成0.5、1.0、2.0％的浓度，选用不同种类和不同用量的支持剂，分别分装到10ml西林瓶中，应用冷冻干燥机冷冻干燥，工艺条件为在-40℃预冻2-3小时，使充分冻结，在约11Pa真空下按每小时2℃升温至-20℃；升华约12小时后，在8小时内升温至30℃，结果见表1。表1 处方筛选结果 结果表明，0.5％和2％的药液浓度本文档来自技高网...

【技术保护点】
苦碟子总黄酮，它由下列方法制备得到：取苦碟子药材加水煎煮，将煎液，浓缩至每１ｍｌ相当于原生药１ｇ，放冷，搅拌下加乙醇，使含醇量达８０％，静置，滤过，滤液搅拌下加碱调节ｐＨ值至１１，静置，离心，沉淀物加１０倍量水，搅拌，离心，沉淀物加乙醇使含醇量达９０％，搅拌下加酸，调节ｐＨ值至５，离心，离心液搅拌下加碱溶液，调节ｐＨ值至６．５，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水溶解，冷冻，室温融化，减压滤过，滤液冷冻干燥，即得苦碟子总黄酮，其中含木犀草素－７－Ｏ－β－Ｄ吡喃葡萄糖醛酸苷不少于８．００％。

【技术特征摘要】
1.苦碟子总黄酮，它由下列方法制备得到取苦碟子药材加水煎煮，将煎液，浓缩至每1ml相当于原生药1g，放冷，搅拌下加乙醇，使含醇量达80％，静置，滤过，滤液搅拌下加碱调节pH值至11，静置，离心，沉淀物加10倍量水，搅拌，离心，沉淀物加乙醇使含醇量达90％，搅拌下加酸，调节pH值至5，离心，离心液搅拌下加碱溶液，调节pH值至6.5，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水溶解，冷冻，室温融化，减压滤过，滤液冷冻干燥，即得苦碟子总黄酮，其中含木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷不少于8.00％。2.权利要求1所述苦碟子总黄酮，它由下列方法制备得到取苦碟子药材，加水煎煮二次，第一次加12倍量水，煎煮1小时，第二次加10倍量水，煎煮1小时；合并煎液，浓缩至每1ml相当于原生药1g，放冷，搅拌下加乙醇，使含醇量达80％，静置12小时，减压滤过，滤液搅拌下加10％氧化钙乳，调节pH值至11.0，静置0.5小时，离心，沉淀物加10倍量水，搅拌10分钟，离心，沉淀物加乙醇使含醇量达90％，搅拌下加50％硫酸溶液，调节pH值至5.0，离心，离心液搅拌下加40％氢氧化钠溶液，调节pH值至6.5，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加注射用水溶解至100ml，冷冻24小时，室温融化，减压滤过，滤液冷冻干燥，得苦碟子总黄酮。3.权利要求1所述苦碟子总黄酮的制备方法，它包括下列步骤取苦碟子药材加水煎煮，将煎液，浓缩至每1ml相当于原生药1g，放冷，搅拌下加乙醇，使含醇量达80％，静置，滤过，滤液搅拌下加碱调节pH值至11，静置，离心，沉淀物加10倍量水，搅拌，离心，沉淀物加乙醇使含醇量达90％，搅拌下加酸，调节pH值至5，离心，离心液搅拌下加碱溶液，调节pH值至6.5，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水溶解，冷冻，室温融化，减压滤过，滤液冷冻干燥，即得苦碟子总黄酮。4.权利要求3所述苦碟子总黄酮制备方法，它包括下列步骤取苦碟子药材，加水煎煮二次，第一次加12倍量水，煎煮1小时，第二次加10倍量水，煎煮1小时；合并煎液，浓缩至每1ml相当于原生药1g，放冷，搅拌下加乙醇，使含醇量达80％，静置12小时，减压滤过，滤液搅拌下加10％氧化钙乳，调节pH值至11.0，静置0.5小时，离心，沉淀物加10倍量水，搅拌10分钟，离心，沉淀物加乙醇使含醇量达90％，搅拌下加50％硫酸溶液，调节pH值至5.0，离心，离心液搅拌下加40％氢氧化钠溶液，调节pH值至6.5，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加注射用水溶解至100ml，冷冻24小时，室温融化，减压滤过，滤液冷冻干燥，得苦碟子总黄酮。5.含权利要求1或2所述苦碟子总黄酮的注射用冻干粉针，含苦碟子总黄酮不少于80.0％。6.权利要求5所述的注射用苦碟子冻干粉针的制备方法，它包括下列步骤取苦碟子总黄酮20g、甘露醇60g，加注射用水适量使溶解，100℃蒸汽灭菌30分钟，加注射用水定容至2000ml，减压滤过，滤液无菌分装于西林瓶中，冷冻干燥，密塞，压盖，制成1000支。7.权利要求5所述注射用苦碟子冻干粉针的鉴别方法，它包括a.参照物溶液的制备精密称取木犀草素-7-O-β-D...

【专利技术属性】
技术研发人员：华玉强，
申请(专利权)人：华玉强，
类型：发明
国别省市：22[中国|吉林]