本发明专利技术辨识出在受到黄病毒（诸如，登革热病毒（Ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ）或日本脑脊髓炎病毒（Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｍｙｅｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ））感染时会诱发细胞渗漏及其它副作用之细胞受体。使用本发明专利技术所揭示之融合蛋白，其判定出病原体（诸如，黄病毒）会经由糖苷键结而结合之受体。一旦判定出该等受体，即可判定结合特定受体之作用，其中可藉由能阻断病原体与受体结合之试剂，找出目标为造成特定症状之受体。因此，就登革热病毒及日本脑脊髓炎病毒而言，ＴＮＦ－α会在病原体结合ＤＬＶＲ１／ＣＬＥＣ５Ａ受体时释出。以单株抗体阻断ＤＬＶＲ１／ＣＬＥＣ５Ａ受体可减少ＴＮＦ－α之分泌，且同时不会影响负责进行病毒清除之细胞激素的分泌，因而使经感染小鼠之存活率由零增加至约５０％。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请案本申请案主张美国专利申请案第12/079，576号(2008年3月27日申请)及美国 专利申请案第11/469，270号(2006年8月31日申请)之巴黎公约优先权，其主张美国临 时申请案第60/713，463号(2005年8月31日申请)之巴黎公约优先权，上述各申请案之 揭示内容全文皆以参考数据方式纳入本说明书中。本专利技术由台湾国家科学委员会94F008-5、NSC 95-2320-B-010010及NSC 95-3112-B-010-017之计划所支持。本专利技术亦由台湾中央研究院94M002-1与国立阳明大学 95A-CT8G02之计划所支持。
技术介绍
在本说明书中所参照之任何先前技术皆不或不应被视做承认或以任何形式暗示 该先前技术在任何国家构成通识之一部分。本文所引用之所有文献，其全文皆以参考数据 方式具体纳入本说明书中。免疫系统能使宿主生物区辨本身及非本身抗原，以及识别及清除侵入之病原体。 后天性免疫系统(adaptive immunity system)依存于高度多形(highly polymorphic) 分子，诸如主要组织兼容性复合体(MHC)之第I类及第II类抗原、T细胞受体及B细胞受 体，以向T细胞及B细胞呈递抗原，因而导致免疫系统之活化。先天免疫系统识别此等多样 性抗原之机制未明，直到Janeway提出模式识别受体(pattern recognition receptors, PRRs)之观念(Janeway，1989，Cold Spring Harb Symp Quant Biol 54Pt 1，1-13)。该假说 后来藉由鉴定出由下列受体识别之病原体相关性分子模式(PAMPs)而证明为正确，该等受 体为类铎受体(TOLL-like receptors) (Aderem and Ulevitch, 2000Nature 406，782-7 ； Akira and Takeda,2004, Nat Rev Immunol 4,499-511 ；Athman and Philpott,2004,Curr Opin Microbiol 7，25-32)、凝集素(lectin)受体(Cambi and Figdor，2003，Curr Opin Cell Biol 15，539-46)、类免疫球蛋白(类 Ig)受体(Daws et al. ,2003, J Immunol 171， 594-9)、及NOD蛋白(Athman and Philpott, 2004, Curr Opin Microbiol 7，25_32)、以及其 它(Liu et al.，2001，J Biol Chem 276,34686-94 ；McDonald et al.，2005，J Biol Chem 280,20177-80)。除了由类铎受体所识别且经充分鉴定特征之PAMPs(Akira and Takeda, 2004, Nat Rev Immunol 4,499-511)之外，新近之研究显示宿主免疫系统可经由特异性碳水化合 物抗原而识别侵入之病原体。举例言之，甘露糖受体可识别在病原体表面表现之具高甘露 糖分子部分(Stahl and Ezekowitz, 1998, Curr Opin Immunol 10，50-5)，同时树状细胞 凝集素-I(Dectin-I)受体可特异性地与β-葡聚糖结合，该β _葡聚糖为真菌壁表面之 多醣体之主要骨架(Brown and Gordon, 2001, Nature 413，36-7 ；Herre et al.，2004，Mol Immunol 40，869-76)。此等结果暗示与病原体相关之碳水化合物结构为由免疫细胞之先天 性免疫受体所识别之标靶之一。灵芝类(Ganoderma)及冬虫夏草类(Cordyc印s)真菌为在中国为最盛行服用之草药。自灵芝(Ganoderma lucidum，亦称为Ling zhi、Reishi)萃取出之多醣体曾被用于传 统中药而作为抗肿瘤剂及免疫调节剂(Lien, 1990, Prog Drug Res 34,395-420 ；Wang et al.，2002，Bioorg Med Chem 10，1057-62 ；Shiao，2003，Chem Rec 3，172-80)，而从冬虫夏 草(Cordyceps sinensis) (Cordyceps> Caterpillar fungus)萃取出者贝Ijll示会改变细 胞凋亡自稳态(apoptotic homeostasis)，并会改善呼吸、肾脏、及心血管功能(Buenz et al. ,2005, J Ethnopharmacol 96,19-29 ；Zhu et al. , 1998, J Altern Complement Med 4, 289-303 ；Zhu et al.，1998，J Altern Complement Med 4，429-57)，以及增加全身对于胰岛 素之敏感性(Balon et al. ,2002, J Altern Complement Med8，315-23)。不过，萃取物之 多醣体组成于多醣体系萃取自不同来源、不同菌株、及于不同生长条件下培养时皆会发生 变化。仰赖高效液相层析(HPLC)及质子-核磁共振之分析方法曾被用于研究单离自 (Ganoderma lucidum) H&l胃(Cordyceps sinensis)(He andSeleen，2004，Int. J. Med. Mushrooms 6，253)。不过，高效液相层析图系基于与灵芝酸 (ganoderic acid) A及C(灵芝之二种主要三萜化合物)或腺苷之比较。依据质谱仍难以知 道萃取物是否含有多醣体之活性成分。本专利技术辨识出在受到黄病毒(诸如，登革热病毒(Dengue virus)或日本脑脊髓炎 病毒(Japanese encephamyelitis virus))感染时会诱发细胞渗漏及其它负作用之细胞受 体。使用本专利技术所揭露之融合蛋白，其判定出病原体(诸如，黄病毒)会经由糖苷键结而结 合之受体。一旦判定出该等受体，即可判定结合特定受体之作用，其中对于造成特定症状之 受体的寻靶可由能够阻断病原体与受体结合之试剂靶向。因此，就登革热病毒及日本脑脊 髓炎病毒而言，TNF-α会在病原体结合DLVR1/CLEC5A受体时释出。以单株抗体阻断DLVRl/ CLEC5A受体可减少TNF- α之分泌，且同时不会影响负责进行病毒清除之细胞激素的分泌， 因而使经感染小鼠之存活率由零增加至约50%。
技术实现思路
根据本说明书揭示之特征，本专利技术提供一种方法，其包含取得融合蛋白质族 群(complement)(其中各融合蛋白质包含受体的结合区域(domain)以及提供受质 (substrate)固定之区域)，使融合蛋白质与病原体接触以确认该病原体是否可与该融合 蛋白质族群中至少一融合蛋白质上之结合区域结合，及检测该病原体是否与该融合蛋白质 结合。「融合蛋白质族群」乙辞代表至少一受体的许多不同结合区域。根据本说明书揭示之特征，本专利技术提供一种方法，其包含取得易受病原体感染之 细胞，剔本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种方法，其包含： 取得融合蛋白质族群（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ），其中各融合蛋白质包含受体的结合区域（ｄｏｍａｉｎ）以及提供受质（ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）固定之区域； 使融合蛋白质与病原体接触以确认该病原体是否可与该融合蛋白质族群中至少一融合蛋白质上之结合区域结合； 检测该病原体是否与该融合蛋白质结合； 其中该融合蛋白质族群代表至少一受体的许多不同结合区域。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢世良，翁启惠，徐翠玲，陈斯婷，
申请(专利权)人：中央研究院，
类型：发明
国别省市：71[]
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