饱和分析方法技术

本发明专利技术提供了修改形式的饱和分析方法，该分析方法是基于对游离的或未结合的标记试剂级份的测定（使得在存在被分析物的情况下信号增加），并使用了捕获区来浓缩该未结合的或游离的标记级份，以避免损失灵敏性。优选情况下，该分析方法是膜分析方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于在样品中检测被分析物的改进的分析方法。具体 来说，本专利技术涉及分析装置，含有用于执行这样的分析的工具的试剂 盒以及，在被分析物与被分析物类似物之间对被分析物结合试剂上的 结合位点的结合竞争性的基础上，用于在样品中检测被分析物的分析 方法。
技术介绍
结合分析是用于在样品中检测和定量被分析物的已被确立的技 术。它们对于在生物学样品中检测和/或测量物质，以作为疾病诊断和 预后的辅助工具、以及用于预测患者对疗法的反应，是特别有用的。它们通常采取各种不同格样(format)的免疫分析的形式，其中被分析 物结合试剂是抗体或其功能片段。大部分这样的分析方法是基于双位点的或"三明治"格样，它对 于能够同时结合两种或两种以上抗体或受体的被分析物是非常有用 的，但是不适合用于半抗原(半抗原由于其大小，通常在一个时候只 能结合一个抗原)。对于半抗原分析来说，通常需要使用典型情况下 用于抗原-抗体分析的饱和类型的分析方法。在这些分析方法中，样品 被分析物与固定量的试剂被分析物(或被分析物类似物，它已经被化 学修饰，使得它是例如可检测的或固定化的)竞争被分析物结合试剂 (例如抗体)上有限数量的结合位点。在中，被分析物 和被分析物类似物的总数量大于被分析物结合试剂上结合位点的总数量o这些分析方法可以是直接竞争格样(其中样品被分析物、类似物和被分析物结合试剂同时进行反应)，也可以是间接竞争格样(其中 允许样品被分析物和被分析物结合试剂首先在一起相互作用，然后再 与被分析物类似物反应)。后一种格样也被称为顺序分析法或返滴定 分析法。竞争分析一般使用带有可检测的信号基团的被分析物类似物 和未标记的抗体(通常连接到固相上)。密切相关的1-位点免疫测定 格样通常使用用可检测基团标记的抗体和固定化在固相上的被分析物 类似物。因此，与被分析物结合试剂结合的被分析物类似物的量将与样品 中被分析物的量成反比，通过检测结合的被分析物类似物的量(对于 竞争分析来说)或结合的被分析物结合试剂的量(对于1-位点免疫测 量分析来说)，可以确定样品中被分析物的存在和/或量。检测信号的 降低比来自与阴性背景的检测信号的增加更困难，通常会导致损失灵 敏性，特别是如果检测是通过目测的话。测量游离的或未结合的信号 克服了这个问题，但是通常情况下游离的级份存在于较大体积中并且 是扩散的，这又会导致损失灵敏性。对于靠近患者进行的分析方法存在着不断增长的需求，这主要是 为了缩短提供结果所需的时间。这样的分析方法被称为床旁分析(Point-of-Care assays)， 一般要求执行起来简单耐用，因为它们是在 非实验室的背景下，通常由非专业人员来进行的。理想情况下，它们 应该是完全自足的，不需要辅助的设备(读数装置可能例外)。如果 要有任何临床用途，床旁分析必需与基于实验室的分析方法具有相似 的灵敏度。但是，常规的免疫分析方法通常包含了复杂的方案和检测 系统，意味着它们通常不适合于床旁类型的应用。己经开发了特定的床旁分析方法。最常用的是侧向流分析。通常， 这些方法是基于标记的流动成分(例如有色颗粒标记的抗体)、固定 化的成分(例如抗体条或点)以及膜，通过毛细作用使样品通过膜移 动。在存在被分析物的情况下，在固定化的抗体捕获区形成了 "三明治"，导致发展出有色的线或点。常规的侧向流分析方法示例在例如美国专利5，656，503中(联合利华专利控股B.V)。这些分析方法规定 了固定化的抗体捕获区，尽管它在侧向流格样中与Geigd等(1982， Clin Chem28:1894)中教导的径向格样不同。对基本的侧向流格样进行了修改，以便能够进行竞争类型的分析。 这样修改过的侧向流分析方法可以基于标记的流动成分(例如有色颗 粒标记的抗体)、固定化的成分(例如条或点形式的被分析物类似物) 以及膜，通过毛细作用使样品通过膜移动。在不存在被分析物的情况 下，抗体标记的颗粒将与固定化的被分析物类似物结合，导致显出有 色的线或点，在存在被分析物的情况下，抗体上的结合位点将被占据， 使得颗粒标记的抗体的结合被减少或完全破坏，同时伴随着颜色减少 或完全消失。这样的分析方法由例如Biosite (US 5,143,852)教导。但 是，如上所述，检测颜色的减少可能是有问题的。侧向流分析方法提供了许多优点，包括速度、方便性和相对低的 成本。但是，它们有几个缺点。捕获成分(例如抗体)通常通过吸附 在膜上进行固定，因此膜和/或抗体批次的变化可能导致被固定的抗体 的量的变化。此外，某些抗体可能仅仅是松散地结合，当流体前沿通 过时可能变得流动，导致信号的丧失。此外，因为只固定了一种抗体， 它与被分析物只有在样品流过的时候才能够反应，所以由于短的温育 时间，灵敏度可能降低。此外，必需为每种被分析物生产特异性包被 的膜，因此增加了制造成本。为了应对这些缺点，通过避免使用固定化的捕获抗体进行了尝试。 例如，EP 297292 (Miles) 、 EP 310872 (Hygeia Sciences)和EP 0962771 (Mizuho)描述了含有带有捕获区的膜和两种抗体包被的颗粒的系统， 一种抗体未标记但较大，使得它被捕获区捕获，另一种较小并且是标 记的，可以通过捕获区。在存在被分析物的情况下，小珠子变得与被 捕获的大珠子结合，导致形成了有色的线。尽管这些方法避免了使用预先固定的捕获抗体，但它们需要两种抗体包被的颗粒的群体以及捕 获区。 一般来说，这样的颗粒在本质上是疏水的，因此在存在生物学 流体的情况下以非特异性的方式引起聚集。其它人尝试了更简单的格样，通过这种格样，能够自由运动通过 膜的抗体包被的颗粒在存在被分析物的情况下可以引起凝集，使得它 们的运动被停止。这种基于凝集的免疫分析方法在本
中是已 知的，并且依赖于抗原或抗体所结合的颗粒的凝集来表明样品中相应 抗体或抗原的存在。在一种更简单形式的凝集分析中，针对特定被分 析物的抗体被结合到珠子或其它见的材料上。具体来说，US4，666，863 (Amersham)公开了通过层析方法分离 游离的和结合的标记物的方法。在一种变化形式中，它们教导了使用 沿着膜的流动来分离凝集的和未凝集的抗体包被的有色颗粒。在分离 之前，将反应混合物与交联试剂反应，使凝集物稳定。EP 293779(Daiichi)也公开了有色乳胶凝集反应，其中凝集的和未凝集的颗粒， 通过允许未凝集乳胶通过但捕获凝集物的毛细管进行分离。EP 280559(Kodak)描述了用于多价被分析物的分析方法，在不存在被分析物的 情况下，标记物可以通过滤器，但是在存在被分析物的情况下，形成 了凝集物并被捕获。US 6,472,226 (Genosis)描述了用于非常大的被分 析物的不使用固定化抗体的侧向流分析方法。它们描述了双区系统， 一个具有大的孔，另一个具有小的孔，使得被分析物可以通过大的孔， 但是在到达小孔区时被捕获。这与能够通过两个区的小标记物(例如 连接有抗体的金溶胶)结合使用。在存在被分析物的情况下， 一部分 抗体标记的金溶胶与被分析物结合，并捕获在小孔捕获区上。总的来说，基于凝集的分析方法限于检测具有多个表位、能够形 成大的、稳定的凝集物的大的被分析物。它们本文档来自技高网...

【技术保护点】
进行饱和分析，以在样品中检测被分析物的方法，其特征为该方法包括将竞争性结合事件产生的标记的试剂的游离的或未结合的级份浓缩在指定的的捕获区上的步骤。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：道格拉斯罗伯特艾文斯，杰拉德约翰阿兰，卡罗林珍妮弗拉德，
申请(专利权)人：平台诊断有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]