使用ＮＯＴＣＨ途径抑制剂治疗癌症的方法技术

本发明专利技术基于Ｎｏｔｃｈ信号转导途径与癌症相关的发现。相应地，本发明专利技术提供了治疗癌症的方法和组合物。还提供了用于对受试者诊断和治疗癌症的调节Ｎｏｔｃｈ信号转导途径中的蛋白的表达和／或活性的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用NOTCH途径抑制剂治疗癌症的方法专利技术背景 专利
本专利技术总体上涉及癌症，更具体地，涉及影响Notch途径的试剂。专利技术背景 Notch基因编码进化上保守的、大的、单次跨膜蛋白，该蛋白调节细胞命运决定。在 果蝇属(Drosophila)、线虫(Caenorhabditis elegans)和哺乳动物细胞培养的工作中显 示，Notch通过2个下游途径担任DSL( δ、Serrate, Lag-2)家族配体的受体和信号。一个 下游途径是通过转录因子CSL(CBF1、Hairless的抑制子、Lag-I)家族，另一个是通过胞浆 衔接蛋白Deltex。在哺乳动物中，Notch信号转导途径诱导4个受体(Notch 1-4)和5个 配体(δ-样1、3和4&Jagged 1和2)。在这些基因中的突变导致人类的显著的发育影响， 提示Notch信号转导存在于多种遗传性疾病(例如带有皮质下梗死和白质脑病的脑常染色 体显性动脉病(CADASIL)、Alagille综合征和脊椎肋骨发育不全(SOTO))和癌症(例如白 血病、皮肤癌、宫颈癌、肺癌、前列腺癌、神经母细胞瘤和乳腺癌)中。Notch信号转导的负调控物包括Numb、SEL-IO和Su (dx)。相比之下，Sanpodo, Neuralized, Mind bomb、LNX、Siahl 和 Mdm2 是 Notch 信号转导途径的正调节物。Numb 是 含有PTB结构域的胞浆衔接蛋白，它通过与胞内结构域的相互作用担任Notch的负调节物。 Numb-Notch联合促进Notchl的泛素化。研究表明，Numb与E3连接酶Itch的细胞溶质的 HECT结构域相互作用，以及Numb和Itch协同作用促进Notchl的泛素化。另一方面，Numb 可通过改变Sanpodo的功能来抑制Notch信号转导，Sanpodo是途径的正调节物。Sandopo 编码4次跨膜蛋白，它与细胞表面上的全长Notch受体物理上相互作用。Numb与Sanpodo 物理上相互作用，抑制Sanpodo的膜定位，从而阻止其与Notch联合。哺乳动物的肌动蛋白 相关蛋白原肌球调节蛋白控制肌动蛋白丝的长度，它是Sanpodo的同源物。Numb和Sanpodo 是发育过程中Notch途径的关键调节物。Deltex(Su(dx))的抑制物是另一个最初在果蝇属中鉴定的蛋白，它担任Notch信 号转导途径的负调节物。Su(dx)的过表达能阻断内源性Notch信号转导，导致异位的静脉 分化，失去翼边缘。相比之下，Su(dx)的下调显示翼的静脉缝隙与Notch过表达的表型相 似。Itch是Su(dx)的小鼠同源物，之所以这样命名，是因为小鼠突变体显示出随同免疫缺 陷一起的瘙痒行为。与SEL-IO不同，Itch含有磷脂结合基序，基序将Itch对准胞浆膜，4 个Wff基序和HECT结构域，其起到E3泛素连接酶的作用。Itch通过其Wff基序结合到NI⑶ 的N-末端部分，并通过其HECT结构域促进OTCD泛素化。在哺乳动物细胞中，这种相互作 用下调Notch信号转导。Notch信号转导途径可在乳腺的肿瘤发展中发挥作用的首次指征来自Czech II 小鼠中小鼠乳房肿瘤病毒(MMTV)Notch4基因的共有插入位点。这种插入导致截短的转录 物的表达，该转录物编码Notch4的细胞内结构域，该蛋白的表达活化信号转导途径。特异 地在乳腺中表达该蛋白的转基因小鼠显示了 Notch信号转导在肿瘤发展中的因果作用。这些转基因小鼠在12个月内发生了乳腺肿瘤。而且，细胞培养实验显示Notchl或Notch4胞 内结构域的过表达转化小鼠乳房上皮细胞系，从而导致软琼脂中无贴壁依赖的生长。Notch信号转导在宽范围的人乳腺癌中被异常地活化。这通过Numb的丧失和 Notchl胞内结构域(Ni⑶)的积聚以及靶基因Hesl和Heyl的上调最清楚地得到了证明， NI⑶由在Notch信号转导期间全长蛋白的切割产生并转换Notch信号。而且，途径成分的 改变可证明是有用的预兆标记物。例如，Notchl和配体Jaggedl的升高的转录水平与不良 预后相关，Numb的蛋白体降解主要在高等级的肿瘤中见到。最后，由于抑制Notch信号转 导途径可逆转乳腺癌细胞系转化的表型，阻止原发肿瘤细胞的生长，所以Notch信号转导 的增加在乳腺癌的病因学中发挥重要的作用。尽管改变的Notch信号转导与包括癌症在内的人类疾病相关，但是尚未发现 Notch实质上参与人类肿瘤的证据。在机制上，Numb起到肿瘤抑制因子的作用，因为它在 Numb-阴性肿瘤而非Numb-阳性肿瘤细胞中的异位表达抑制增殖。在Numb-阴性的肿瘤中 观察到增加的Notch信号转导，但是在实施Numb的表达后，Notch信号恢复到基态水平。 相反地，Numb沉默增加正常的乳腺细胞和Numb-阳性乳腺肿瘤中Notch信号转导。Numb/ Notch的生物学拮抗作用与正常的乳腺实质的稳态相关。因此，就需要一种诊断和治疗由 Notch途径的异常信号转导引起的癌症的方法。专利技术摘要本专利技术基于有创意的发现，即一些人类乳腺癌包含Notch途径的上调。特别地，这 些癌症特征在于具有增加的Notch信号转导和降低的Numb表达，Numb为Notch途径的负 调节物。 在一个实施方式中，本专利技术提供一种治疗癌症的方法，包括用图3A或3B中显示的 构建物接触癌细胞。本专利技术的方法还包括用化学治疗剂接触癌细胞。在另一个实施方式中，本专利技术提供一种测定癌细胞对Notch途径抑制剂的治疗是 否有反应的方法，该方法包括测定细胞中Notch 1的水平，其中，与正常细胞中的Notch 1 水平相比，Notch 1的较高水平表示细胞对Notch途径抑制剂的治疗有反应。图3A或3B显 示了例证性的Notch途径抑制剂。一方面，该方法包括进一步地测定细胞中Numb表达的水平，其中，与正常细胞中 的Numb水平相比，Numb表达的低水平表示细胞对Notch途径抑制剂或增加细胞中Numb表 达的药剂的治疗有反应。本专利技术还提供图3A和图3B所示的特异的构建物。在另一个实施方式中，本专利技术提供一种治疗癌症的方法，包括用含有显性负性 Mastermind同种型的构建物接触癌细胞。一方面，癌症是例如乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、前 列腺癌、肺癌、血癌或胰腺癌。在一个另外的实施方式中，还可以用化学治疗剂接触癌细胞。 在另一个实施方式中，可以用触角核酸或蛋白接触细胞。(触角同源结构域是来自黑腹果蝇 生物体的序列特异的转录因子。该蛋白由触角(antp)基因编码。Antp是调节系统的成员， 它在生物体的前-后轴上给予细胞特异性位置。这样，Antp辅助果蝇属中胸节段的细胞发 育的控制。)(参见例子 Y.-Q. Qian 等，The Structure ofthe Antennapedia Homeodomain Determined by NMR Spectroscopy in Solution !Comparison With ProkaryoticRepressors, Cell 59:573(1989))。在另一个实施方式中，本专利技术提供治疗癌症的方法，包括用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗癌症的方法，包括用图３Ａ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１）或３Ｂ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２）中显示的构建物接触癌细胞足够的时间，使得所述构建物得到表达，从而治疗所述癌症。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2007-10-5 60/978,039;US 2008-4-11 61/044,215一种治疗癌症的方法，包括用图3A(SEQ ID NO1)或3B(SEQ ID NO2)中显示的构建物接触癌细胞足够的时间，使得所述构建物得到表达，从而治疗所述癌症。2.权利要求1所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌。3.权利要求1所述的方法，还包括用化学治疗剂接触所述癌细胞。4.一种测定癌细胞对Notch途径抑制剂治疗的反应性的方法，包括测定细胞中的 Notch 1水平，其中，与正常细胞中的Notch 1水平相比，Notch 1的较高水平表示细胞对 Notch途径抑制剂治疗有反应。5.权利要求4所述的方法，其中图3A或3B显示了Notch途径抑制剂。6.权利要求4所述的方法，还包括测定细胞中Numb表达的水平，其中与正常细胞中的 Numb水平相比，Numb表达的低水平表示细胞对Notch途径抑制剂治疗有反应。7.权利要求4所述的方法，其中所述癌细胞是乳腺癌细胞。8.构建物，如图3A或SEQID NO :1中所显示。9.构建物，如图3B或SEQID NO :2中所显示。10.一种治疗癌症的方法，包括用显性负Mastermind同种型或Numb同种型接触癌细胞。11.权利要求10所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、肺癌、前列腺 癌、血癌或胰腺癌。12.权利要求10所述的方法，还包括用化学治疗剂接触所述癌细胞。13.权利要求10所述的方法，还包括用触角足接触所述细胞。14.一种测定癌细胞对Notch途径抑制剂的治疗是否有反应的方法，该方法包括测定 细胞中的Notch 1水平，其中，与正常细胞中的Notch 1水平相比，Notch 1的较高水平表 示细胞对Notch途径抑制剂的治疗有反应。15.权利要求14所述的方法，其中所述Notch途径抑制剂包括显性负Mastermind同种 型或Numb同种型。16.权利要求14所述的方法，还包括测定细胞中Numb表达的水平，其中，与正常细胞中 的Numb表达水平相比，Numb表达的低水平表示细胞对Notch途径抑制剂的治疗有反应。17.权利要求14所述的方法，其中所述癌细胞是乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、结肠癌细 胞、肺癌细胞、前列腺癌细胞、造血细胞或胰腺癌细胞。18.—种监测治疗患有癌症或处于患有癌症危...

【专利技术属性】
技术研发人员：S斯蒂利亚诺，
申请(专利权)人：特洛伊科技有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]