用于治疗癌症的组合物和方法技术

本发明专利技术提供了使用免疫毒素技术用于靶向SAS1B阳性癌细胞的组合物，并且公开了肾脏癌细胞和胰腺癌细胞为SAS1B阳性，而正常的肾脏细胞和胰腺细胞不是SAS1B阳性。本发明专利技术公开了尽管SAS1B只在雌性动物生长的卵母细胞的正常组织中表达，其却在男性和女性的癌症中表达。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用根据35U.S.C.119(e)，本申请权利要求2012年6月13日提交的美国临时申请序列号61/659,049的优先权，通过引用将其全文并入本文。关于联邦赞助的研究或研发的声明本专利技术部分地通过NIH的福格蒂国际中心资助的批准号D43TW/HD00654在美国政府的支持下进行。美国政府具有本专利技术的某些权利。专利技术背景在20世纪90年代，金属内肽酶的虾红素家族被认为是新的蛋白酶家族。虾红素为金属蛋白酶的甲硫氨酸锌蛋白超家族的亚家族。首个被表征的淡水螯虾酶虾红素。至今已在范围跨越细菌到人类的物种中鉴定了超过200个这一家族的成员。虾红素参与发育形态发生，基质组装，组织分化和消化。家族成员包括原胶原C蛋白酶(BMP1，骨形成蛋白1)，tolloid和哺乳动物tolloid样，HMP(普通水蛭金属蛋白酶)，海胆BP10(囊胚蛋白)和SPAN(紫海胆虾红素)，‘孵化’亚家族，‘孵化’亚家族包含alveolin、ovastacin、LCE、HCE(‘低’和‘高’卵壳裂解酶)、肾泌分解酶(nephrosin)(来自鲤鱼前肾)、来自青蛙的UVS.2、和穿膜肽酶(meprin)。在人和小鼠的基因组中，有6个虾红素家族基因(2个穿膜肽酶，3个BMP1/tolloid样，1个ovastacin)，但是在秀丽隐杆线虫中有40个。通过独特的18个氨基酸印迹序列表征虾红素家族成员，所述印迹r>序列以在大多数金属内肽酶中发现的5个氨基酸的锌结合基序开始(见Bond和Benyon1995年的综述)。印迹序列为大约200个氨基酸序列的一部分，所述200个氨基酸序列为完整的成熟淡水螯虾虾红素和所有该家族成员的催化或蛋白酶结构域。信号和前序列也是家族成员的共同特征，QuCAM-1可能除外；对这后者蛋白而言尚未发现这些NH2末端结构域。直到目前只研究了虾红素作为以蛋白酶结构域开始的成熟蛋白，现在已知虾红素包含49个残基的前原段。在生物合成期间瞬态信号肽指导蛋白进入内质网，这与迄今研究发现所有家族蛋白为分泌的或质膜结合的发现一致。前序列在大小方面变化很大，对果蝇tolloid相关的-1(DrT/r-1)而言包含多达519个氨基酸，很可能对调节蛋白酶的活性和或许蛋白酶的表达是重要的。关于后面这一点，例如，已显示DrT/r-1的大的前序列当细胞周期非常短时在胚胎形成的早期阻止这一基因产物的表达。穿膜肽酶为锌依赖的，膜结合的蛋白酶并且为金属蛋白酶的“虾红素家族”的成员(Bond和Beynon,1995,ProteinSci.4:1247-1261；Sterchi等,2008,MolecularAspectsofMedicine,29:309-328)。该酶为多结构域的寡聚蛋白。表达在转录和翻译水平上是高度调控的。通常，该蛋白靶向于极化上皮细胞的顶膜(Eldering等,Eur.J.Biochem.247:920-932,1997)。各种生长因子、细胞因子和细胞外基质蛋白为穿膜肽酶的底物。已在白细胞、癌细胞和肠及肾脏中鉴定到穿膜肽酶。穿膜肽酶α和β基因表达于各种癌细胞中。在结肠直肠肿瘤组织中检测到穿膜肽酶αmRNA、免疫反应性蛋白和酶活性。与正常的结肠相比，然而，穿膜肽酶α亚基被分泌到肿瘤的间质中，穿膜肽酶α亚基在间质中积累并且可以通过免疫组化方法检测。使用内源性表达穿膜肽酶α的结肠腺癌细胞系(Caco-2)显示这种异常的分泌的机制。当培养在侵袭小室漏斗架(transwellfiltersupport)上时，从顶端的和基侧膜区域同样地分泌穿膜肽酶。在上皮细胞层的基侧处，穿膜肽酶α可被纤溶酶激活，通过来自肠成纤维细胞的uPA催化的激活过程，纤溶酶产生于纤溶酶原(等,2002)。穿膜肽酶表达在肿瘤细胞侵袭和迁移中起作用并且在这种情况下可能参与肿瘤进展(Sterchi等,2008；Rosmann等,2002,J.Biol.Chem.,277:43:40650-40658)。Quesada等(2004,J.Biol.Chem.,279:25:26627-26634)从小鼠和人中分离出新的蛋白并且因为它在卵巢组织中主要表达和与虾红素明显的相似性，命名它为“ovastacin”。Quesada寻找参与胚胎孵化过程的候选金属蛋白酶并且使用BLAST算法来寻找新的虾红素金属蛋白酶。他们发现小鼠和人中新的蛋白并进行测序，在人中将该基因定位在人染色体2q11.1。计算机分析显示了N末端的信号肽，锌依赖的金属蛋白酶结构域和可能参与维持蛋白酶潜伏期的前结构域。然而，发现ovastacin具有在其他虾红素中没有发现的额外的150个氨基酸的C末端结构域。Quesada等也显示了该蛋白具有金属蛋白酶活性，并且除了卵巢之外不在正常的组织中表达。他们提示ovastacin的正常功能可能与低等物种的虾红素家族“孵化酶”相似。额外地，他们发现它在一些癌细胞中表达，包括淋巴瘤和白血病细胞系，但是仅测试了5个卵巢癌中的两个，并且仅使用RT-PCR可检测到。最近其他组更多地将ovastacin称为“虾红素样蛋白”(ASTL)。最近，Ovastacin，也称为ZEP、本文的SAS1R和SAS1B，通过作为在精卵融合时切割透明带糖蛋白ZP2的内切蛋白酶，参与阻止多精受精(Burkart等,2012,J.CellBiol.,197:37-44)。在Quesada发现“ovastacin”的大约同时，其他组将其分离并且起先将其称为锌肽链内切酶(ZEP)(Mandal等，公开于2006年8月31日，PCT专利公开WO2006/091535号)，稍后将其称为精子顶体SLLP1受体(“SAS1R”)，因为他们发现它与精子蛋白SLLP1相互作用的卵母细胞蛋白(Mandal等,2008,Biol.ofReproduction,78:69:72；Herr等，PCT专利公开WO2010/054187号，公开于2010年5月14日)。Mandal等(PCT专利公开WO2006/091535号)显示ZEP具有2个变体，指示预测的跨膜区，切割位点和锌结合印迹的序列。他们指出它与日本鳗鱼日本鳗鲡(Anguillajaponica)的孵化酶EHE7是同源的，并且假设它在小鼠胚胎发育中发挥相似的功能。Mandal的生物信息学分析显示该蛋白具有两个糖基化位点，磷酸化位点，和十四烷基化位点。他们注意到这些位点预示为膜蛋白，并且跨膜拓扑学本文档来自技高网...

【技术保护点】
免疫毒素分子，其包含与细胞毒性剂偶联的对SAS1R抗原特异的抗体或其结合片段。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.06.13 US 61/659,0491.免疫毒素分子，其包含与细胞毒性剂偶联的对SAS1R抗原特
异的抗体或其结合片段。
2.如权利要求1所述的免疫毒素分子，其中所述细胞毒性剂为I
型核糖体失活蛋白。
3.如权利要求2所述的免疫毒素分子，其中所述I型核糖体失活
蛋白为皂草素。
4.如权利要求1所述的免疫毒素分子，其中所述抗体为单克隆的，
多克隆的，嵌合的，人的，或人源化的。
5.如权利要求1所述的免疫毒素分子，其中所述抗体结合片段为
F(ab')2、F(ab)2、Fab'或Fab。
6.组合物，其包含权利要求1所述的免疫毒素和生理学上可接受
的载体。
7.杀死、抑制或除掉癌细胞的方法，其包括向有需要的个体给予
至少一种权利要求1所述的免疫毒素分子。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述癌症选自恶性上皮肿瘤(例
如头颈鳞状细胞癌)、肉瘤、子宫癌、卵巢癌、肺癌、腺癌、肺腺癌、
鳞状细胞癌、肺的鳞状细胞癌、恶性中胚叶混合癌、白血病、淋巴瘤、
成神经细胞瘤、黑素瘤、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肾癌、膀胱癌
和子宫内膜样癌。
9.治疗癌症的方法，包括向有需要的个体给予治疗有效量的免疫

\t毒素偶联物，其中所述免疫毒素偶联物包含与细胞毒性剂偶联的抗体
或其结合片段，其中所述免疫毒素偶联物的所述抗体结合癌细胞上的
SAS1R，并且其中所述免疫毒素分子与细胞上的SAS1R分子的结合导
致杀死、除掉表达SAS1R的细胞或抑制表达SAS1R的细胞的增殖。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述细胞毒性剂为I型核糖
体失活蛋白。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述I型核糖体失活蛋白为
皂草素。
12.如权利要求9所述的方法，其中所述抗体为单克隆的、多克
隆的、嵌合的、人的或人源化的。
13.如权利要求9所述的方法，其中所述抗体结合片段为F(ab')2、
F(ab)2、Fab'或Fab。
14.如权利要求9所述的方法，其中所述癌症选自恶性上皮肿瘤
(例如头颈鳞状细胞癌)、肉瘤、子宫癌、卵巢癌、肺癌、腺癌、肺腺

【专利技术属性】
技术研发人员：约翰·C·赫尔，欧塞比奥·S·皮雷，奥斯丁·赫尔，
申请(专利权)人：以弗吉尼亚大学许可和投资集团名义经营的弗吉尼亚大学专利基金会，
类型：发明
国别省市：美国;US