嗜热菌蛋白酶及其变体的生产和在液体洗涤剂中的用途制造技术

本发明专利技术提供包含至少一种具有提高的贮存稳定性和／或催化活性的嗜热菌蛋白酶样中性蛋白酶的方法和组合物。在一些实施方案中，嗜热菌蛋白酶用于包括洗涤剂的清洁和其他用途。在一些特别优选实施方案中，本发明专利技术提供包含经配制和／或工程改造而抵抗洗涤剂诱导的失活的嗜热菌蛋白酶的方法和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术提供包括至少一种具有改善的贮存稳定性和/或催化活性的嗜热菌蛋白 酶样中性蛋白酶的方法和组合物。在一些实施方案中，该嗜热菌蛋白酶用于包括洗涤剂的 清洁和其他应用中。在一些特别优选实施方案中，本专利技术提供包含嗜热菌蛋白酶的方法和 组合物，其中该嗜热菌蛋白酶经配制和/或工程改造而抵抗洗涤剂诱导的失活。
技术介绍
芽胞杆菌(Bacilli)是分泌许多工业上有用酶的革兰氏阳性细菌，所述酶可通 过发酵廉价地大体积生产。分泌性芽胞杆菌酶的实例是枯草杆菌蛋白酶丝氨酸蛋白酶、 含锋中性蛋白醇(zinc containing neutralproteases)、 α -淀粉醇禾口纤维素醇。芽胞 杆菌蛋白酶被广泛用于纺织、洗衣和家居工业(Galante，Current Organic Chemistry, 7:1399-1422,2003;禾口 Showel1， Handbook of Detergents, Part D =Formulation, Hubbard (ed.), NY =Taylor and Francis Group，2006)。从洗涤的衣服上高效地去除污渍和 颜色需要蛋白酶。然而，清洁剂和洗涤剂的液体制剂通常含有对大多数蛋白酶具有去稳定 化作用的助洗剂、表面活性剂和金属螯合剂。洗涤剂和其他清洁组合物通常包含复杂的活性成分组合。例如，大多数清洁 产品包含表面活性剂系统、用于清洁的酶、漂白剂、助洗剂、抑泡剂、悬污剂、污垢释放剂 (soil-release agent)、荧光增白剂、柔软剂、分散剂、染料转移抑制化合物、磨料、杀细菌 剂和香料。尽管当前的洗涤剂很复杂，但仍然有许多难以完全去除的污渍。此外，通常有残 留物积累，这导致由于不完全清洁而引起的褪色(例如，发黄)和减损的美感。这些问题可 以因低清洗温度(例如，冷水)和较短的清洗周期的增加使用而增加。此外，许多污渍由复 杂的纤维材料混合物组成，主要包括碳水化合物和碳水化合物衍生物、纤维和细胞壁成分 (例如，植物材料、木材、基于泥/粘土的污物和水果)。此类污渍对清洁组合物的配制和使 用提出了难以应对的挑战。此外，有色衣服易于磨损和显示外观的丧失。这种颜色丢失有一部分是由于洗衣 过程中，特别是在自动化清洗和干燥机中的磨损造成的。此外，织物的抗张强度的丧失看起 来是使用、穿戴和/或清洗以及干燥中的机械和化学作用的不可避免的结果。因此，需要有 效率和有效力地清洗有色衣服以最小化这些外观丧失的手段。总而言之，尽管清洁组合物的能力已得到提高，但在本领域仍然存在需要能 够去除污渍、保持织物颜色和外观以及防止染料转移的洗涤剂。此外，仍然需要可以 向织物提供和/或恢复抗张强度、以及提供抗皱、抗起球(anti-bobbling)和/或防 缩(anti-shrinkage)性质、以及提供静电控制(staticcontrol)、织物柔软性(fabric softness)、保持期望的颜色外观和织物抗磨损性质和益处的洗涤剂和/或织物护理组合 物。尤其是，仍然需要包含能够去除常常保持附着在所洗涤 织物上的污渍有色成分的组合 物。此外，仍然需要适用于纺织品漂白的改进的方法和组合物。专利技术概述本专利技术提供包括至少一种具有提高的贮存稳定性和/或催化活性的嗜热菌蛋白酶样中性蛋白酶的方法和组合物。在一些实施方案中，该嗜热菌蛋白酶用于包括洗涤剂的 清洁及其他应用中。在一些特别优选实施方案中，本专利技术提供包括嗜热菌蛋白酶的方法和 组合物，其中该嗜热菌蛋白酶经配制和/或工程改造而抵抗洗涤剂诱导的失活。本专利技术提供包含分离的嗜热菌蛋白酶和中性金属蛋白酶抑制剂的组合物，其中嗜 热菌蛋白酶是地芽孢杆菌(Geobacillus)嗜热菌蛋白酶或芽孢杆菌嗜热菌蛋白酶。在一些 实施方案中，本专利技术的组合物包含分离的嗜热菌蛋白酶和选自膦酰二肽(phosphoramidon) 和galardin的中性金属蛋白酶抑制剂。在一些实施方案中，本专利技术组合物的嗜热菌蛋 白酶是G. caldoproteolyticus或嗜热脂肪地芽孢杆菌(G. stearothermophilus)的嗜 热菌蛋白酶，在其他实施方案中，本专利技术组合物的嗜热菌蛋白酶是嗜热溶蛋白芽孢杆菌 (B. thermoproteolyticus)的嗜热菌蛋白酶。在一些特定的实施方案中，本专利技术的组合物包 含嗜热菌蛋白酶，其与包含SEQ ID NO :3中所示氨基酸序列的嗜热菌蛋白酶具有至少50% (50 至 100%，优选至少 55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、 98%或99%)的氨基酸同一性。在一些其他实施方案中，本专利技术的组合物包含含有SEQ ID NO 3中所示的氨基酸序列的嗜热菌蛋白酶。在其他实施方案中，本专利技术的组合物包含SEQ ID NO 3的嗜热菌蛋白酶。 此外，本专利技术还提供具有提高的稳定性和/或性能的分离的嗜热菌蛋白酶变体。 在一些优选实施方案中，嗜热菌蛋白酶变体是地芽胞杆菌(Geobacillus)嗜热菌蛋白酶变 体，其具有在如下位置包含一个或多个置换的氨基酸序列，所述位置选自与SEQ ID NO 3 所示氨基酸序列的位置 6、7、49、56、58、61、63、65、75、128、151、156、196、273、278 和 280 等 同的位置。在此类实施方案的一个亚组中，该一个或多个置换包括1、2、3、4、或5个在选自 与 SEQ ID NO 3 所示氨基酸序列的位置 6、7、49、56、58、61、63、65、75、128、151、156、196、 273,278和280等同的位置的位置上的置换。在另外的实施方案中，本专利技术提供分离的地 芽胞杆菌嗜热菌蛋白酶变体，其具有在选自与如SEQ ID N0:3所示氨基酸序列的位置4、6、 7、36、49、53、56、58、61、63、65、75、85、108、128、129、151、156、194、195、196、261、265、273、 278,280和297等同的位置的位置上包含一个或多个置换的氨基酸序列，并且具有提高的 稳定性和/或性能。在此类实施方案的一个亚组中，该一个或多个置换包括1、2、3、4或5个 在选自与 SEQ ID NO :3 所示氨基酸序列的位置 4、6、7、36、49、53、56、58、61、63、65、75、85、 108、128、129、151、156、194、195、196、261、265、273、278、280 和 297 等同的位置的位置上的 置换。在一些其他实施方案中，本专利技术提供嗜热菌蛋白酶变体，其包含一个或多个选自 如下的置换表7-1、表8-1和表8-2中所列的置换T006G、T006H、T006I、T006K、T006M、 T006N、T006P、T006Q, T006R、T006V, T006W, T006Y、V007F, V007H, V007K, V007L, V007M、 V007P、V007Q、V007R、V007T、V007Y、T049G、T049H、T049I、T049K、T049L、T049N、T049P、 T049Q、T049W、A058I、A058P、A058R、F063I、F0本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含分离的嗜热菌蛋白酶和中性金属蛋白酶抑制剂的组合物，其中所述嗜热菌蛋白酶是地芽胞杆菌嗜热菌蛋白酶或芽胞杆菌嗜热菌蛋白酶。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2007-11-1 60/984,664包含分离的嗜热菌蛋白酶和中性金属蛋白酶抑制剂的组合物，其中所述嗜热菌蛋白酶是地芽胞杆菌嗜热菌蛋白酶或芽胞杆菌嗜热菌蛋白酶。2.权利要求1的组合物，其中所述中性金属蛋白酶抑制剂是膦酰二肽或galardin。3.权利要求1的组合物，其中所述地芽胞杆菌是G.caldoproteolyticus或嗜热脂肪泥 地芽孢杆菌。4.权利要求1的组合物，其中所述芽胞杆菌是嗜热溶蛋白芽孢杆菌。5.权利要求1的组合物，其中所述嗜热菌蛋白酶具有与SEQID NO :3所示的氨基酸序 列至少50%的氨基酸同一性。6.权利要求1的组合物，其中所述嗜热菌蛋白酶包含SEQID NO :3中所示的氨基酸序列。7.具有提高的稳定性和/或性能的分离的嗜热菌蛋白酶变体。8.权利要求7的分离的嗜热菌蛋白酶变体，其中所述嗜热菌蛋白酶变体是地芽胞杆菌 嗜热菌蛋白酶变体，其具有在选自如下位置的位置上包含一个或多个置换的氨基酸序列 与 SEQ ID NO 3 所示氨基酸序列的位置 6，7，49，56，58，61，63，65，75，128，151，156，196， 273，278和280等同的位置。9.权利要求8的分离的嗜热菌蛋白酶变体，其中所述一个或多个置换包括1、2、3、4或 5个在选自与SEQ ID NO :3所示氨基酸序列的位置6，7，49，56，58，61，63，65，75，128，151， 156，196，273，278和280等同的位置的位置上的置换。10.权利要求7的分离的嗜热菌蛋白酶变体，其中所述嗜热菌蛋白酶变体是地芽胞杆 菌嗜热菌蛋白酶变体，其具有在选自与SEQ ID N0:3所示氨基酸序列的位置4、6、7、36、49、 53、56、58、61、63、65、75、85、108、128、129、151、156、194、195、196、261、265、273、278、280 和 297等同的位置的位置上包含一个或多个置换的氨基酸序列。11.权利要求10的分离的嗜热菌蛋白酶变体，其中所述一个或多个置换包括1、2、3、4 或5个在选自与SEQ ID NO :3所示氨基酸序列的位置4、6、7、36、49、53、56、58、61、63、65、 75、85、108、128、129、151、156、194、195、196、261、265、273、278、280 和 297 等同的位置的位 置上的置换。12.权利要求7的分离的嗜热菌蛋白酶变体，其中所述嗜热菌蛋白酶变体包含选自 如下的一个或多个置换置换 T006G、T006H、T006I、T006K、T006M、T006N、T006P、T006Q、 T006R、T006V、T006W、T006Y、V007F、V007H、V007K、V007L、V007M、V007P、V007Q、V007R、 V007T、V007Y、T049G、T049H、T049I、T049K、T049L、T049N、T049P、T049Q、T049W、A058I、 A058P、A058R、F063I、F063L、F063P、S065K、S065Y、Y075G、Y075M、Y075T、Q128H、Q128I、 Q128L、Q128M、Q128V、Q128Y、Y151D、Y151E、Y151H、Y151K、Y151M、Y151N、Y151Q、Y151R、 Y151T、Y151V、Y151W、I156M、I156R、I156T、I156W、G196R、Q273I、Q273P、Q273Y、T278K、 T278M、T278P、N280K、N280R、T006A、T006C、T049D、T049I、T049L、T049M、T049N、T049S、 A056C、A056R、A056Y、A058S、S065C、S065E、S065I、S065T、S065V、S065Y、Q128C, Q128I, Q128M、Q128T、Q128V、Q128Y、Y151A、Y151C、Y151D、Y151E、Y151H、Y151M、Y151N、Y151Q、 Y151R、 Y151S、 Y151T、 Y151V、 Y151W、 I156E、 I156H、 I156K、 I156M、 I156R、 I156T、 I156W、 G196D、G196H、Q273A、Q273N、Q273T、Q273W、Q273Y、T278C、T278H、T278M、T278N、T278S、 T278Y、N280E、N280I、N280L、N280M、N280S、T006C、T049D、T049N、T049Q、T049S、A056C、A056E、A058C、A058E、Q061E, Q061M, S065C、S065D、S065E、S065P、S065V、S065W, S065Y、 Q128C、Q128I、Q128M、Q128T、Q128V、Q128Y、Y151A、Y151C、Y151N、Y151S、Y151T 和 I156E。13.权利要求12的分离的嗜热菌蛋白酶变体，其中所述一个或多个置换包括1、2、3、 4 或 5 个选自如下的置换置换 T006G、T006H、T006I、T006K、T006M、T006N、T006P、T006Q、 T0...

【专利技术属性】
技术研发人员：DA埃斯特尔，RWJ奥姆斯，AD刘，A肖，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]