一种黑木耳多糖的酶法提取方法技术

本发明专利技术公开了一种黑木耳多糖的酶法提取方法，包括如下步骤：取干燥黑木耳机械粗粉碎，过筛，然后按照１∶５０～２００的料水比混合，在几丁质酶作用下于３５～５０℃、ｐＨ　５．０～９．０及几丁质酶添加量为１００～６００Ｕ／ｇ的条件下提取６０～１８０ｍｉｎ；再将提取温度提高到８０～９５℃提取６０～１８０ｍｉｎ，所得提取液离心后得到上清液与沉淀物；取上清液加入乙醇沉淀多糖，离心分离得到沉淀物，沉淀物用水溶解，浓缩除去残留的乙醇，然后在浓缩液中加入硅藻土与活性炭的混合物，混合充分搅拌后，过滤，取滤液用３０～１００ｋＤ的聚砜膜进行膜过滤，收集未滤过膜的大分子浓缩液，将大分子浓缩液进行干燥得到黑木耳多糖。本发明专利技术制得产品纯度高，其中多糖含量可高达４０％以上，生物活性高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种酶法制备黑木耳多糖的方法。
技术介绍
HH Auri CU Iari ει auricula (L. exHook.) Underwood,S 耳，是一种大型真菌，属于担子菌纲，木耳目、木耳科、木耳属。大量的医学和药理学研究表 明，黑木耳多糖具有抗血小板聚集、抗肿瘤、抗衰老、抑菌、降血糖、调节免疫功能、抗溃疡、 抗肝炎和抗突变、降血脂和促进血清蛋白生物合成等功效，并提出黑木耳具有润肺、清涤 胃肠、减肥、利于体内有毒物质的及时清除和排出等功能均与其含有的丰富的非淀粉多糖 有关。如李文宁在专利“黑木耳多糖保健品的制备方法”中，提出一种快速的黑木 耳多糖保健品的制备方法，将黑木耳放入3-10%的草酸或3-10%的氢氧化钠溶液中浸泡 后，在70°C下干燥10-30分钟，利用粉碎设备将干燥后的黑木耳粉碎制成口服剂；Muraki Shigeru等(1988)在日本专利“黑木耳多糖的制备”中，采用热水抽提、超滤膜过滤、酒精 沉淀等方法制备的分子量在10万 20万之间的黑木耳多糖，对机体免疫有调节作用；Chan 等000 在美国专利“黑木耳多糖的制备及其在动物中应用”中，提出黑木耳多糖有降动 物血清总胆固醇的作用；Byim Yu Ryang等Q004)在欧洲专利“黑木耳多糖提取物对作用 于胃壁细胞的heliccAacter pylori有抑制作用，可作为功能性添加剂”，提出了黑木耳多 糖的制备方法，并提出黑木耳多糖对由helicobacter pylori引起的胃病有良好的治疗效 果，且没有任何毒副作用。因此，黑木耳多糖制成的药品和保健品深受人们喜爱，开发前景 广阔。尽管黑木耳多糖的多种生物活性已被证实，但至今还没有开发出象香菇多糖、灵 芝多糖等能够应用的产品。因此，在黑木耳多糖提取与应用过程中如何确保其活性最大程 度的保留已是当务之急。由于黑木耳细胞壁的关键组分几丁质和β-葡聚糖，质地异常坚韧，故破壁处理 是提取多糖首要考虑的问题。破壁方法中酶法操作是重要手段之一。选用适当的酶(系)， 可以使细胞壁与间质中的关键组分降解，减小传质屏障对多糖扩散的传质阻力，有效地使 目标物溶出，并控制非目标物的溶出，为后续精制创造有利条件。细胞壁溶解酶是几种酶的复合物，同其他酶一样具有高度专一性，蛋白酶只能水 解蛋白质，葡聚糖酶只对葡聚糖起作用，因此利用溶酶系统处理细胞必须根据细胞的结构 和化学组成选择适当的酶，并确定相应的使用次序。Asenjo等人对酵母细胞的酶溶进行 了研究，分析了溶解机理，建立了数学模型，设计了反应器。Asenjo提出了酵母细胞结构 模式，细胞壁由甘露糖-蛋白质层和葡聚糖层组成，加入溶酶后，蛋白酶打开了外层上的蛋 白质-甘露糖结构，使二者溶解，裸露出的内层受到葡聚糖酶攻击，最后只剩下原生质体， 这时若缓冲液的渗透压变化，则细胞膜破裂，释放出胞内质。国内在酶法破碎真菌细胞壁 方面，蹇华丽000 以环状芽饱杆菌Al. 383为出发菌株，对其进行诱变后，获得了一株稳 定高产胞壁溶解酶的突变株Al. 383-2，其胞壁溶解酶产量比亲株提高了 116.9%。通过对3B. circulars Al. 383-2发酵产酶条件的优化，得出其高产胞壁溶解酶的适宜条件为碳源 采用10g/L的酵母葡聚糖、氮源采用总浓度为4g/L的蛋白胨与(NH4)2SO4混合液、接种量 6% 10% (ν/ν)、摇瓶装液量250mL、三角瓶装液40mL、发酵温度30°C 35°C，培养基初始 PH 6. 5 7.0。并通过单因素及均勻实验设计，确定了将B. circulars Al. 383-2胞壁溶解 酶用于红法夫酵母破壁提取虾青素的最佳酶作用条件。国内外酶解破壁的专利检索情况如下，国内相关专利如卢挺O002)在专利“油菜 蜂花粉生物破壁技术”中，将曲酶属、酵母属和丹麦强力复合酶Vi scozymeL加入花粉溶液酶 解破壁0. 5 72小时，酶解破壁温度为25V 60°C ；林陆山000 在专利“一种动植物 和微生物细胞壁溶解酶反应液及其应用”中描述了一种酶解技术，采用细胞壁溶解酶(以枯 草杆菌 Bacillus SubtilisK-77 或枯草杆菌 Bacillus Subtilis YT-25，赌状芽孢杆菌 BM CirlulansAL. 1为菌种制备的溶解酶)进行破壁处理，提取细胞内的小分子蛋白、游离氨基 酸、亚麻酸和多肽等生物活性物质；齐崴等O006)在专利“复合酶水解丹参强化提取丹参 多酚酸的方法”中，将纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶、淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶中 的两种或多种复合酶配制成复合酶系进行有效破壁，制得具有多种缩酚酸类功效物质的丹 参水溶性提取物干粉；李森柱等O006)在专利“全灵芝孢子油的制备方法”中，利用菌丝生 长过程中不断分泌的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶等多种复合酶来酶解孢子壁制备三萜类化 合物。国外关于酶法破壁方面的专利，Schroder Glad等^00 在美国专利“不同的细胞 壁溶解酶”中，对来源不同的细胞壁溶解酶的分子结构及理化性质进行了描述。酶法破壁由于作用条件温和，无残留，是一种非常有前景的细胞破壁技术。传统 的黑木耳多糖提取采用水提醇沉，多糖难以从胞内扩散出来；而酸、碱法容易破坏多糖的结 构，降低其生物利用率。为黑木耳保健食品的开发提取一条新的工艺路线和方法，这对于黑 木耳的综合开发及提高其经济价值具有实际意义。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题在于提供一种以黑木耳为原料，利用特定酶结合热水浸 提工艺，并结合超滤膜处理，进一步提纯多糖的方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案，包括如下步骤取干燥黑木耳机械粗粉碎，过 40 100目筛，然后按照1 50 200的料水比混合，在几丁质酶作用下于35 50°C、pH 5. 0 9. 0及几丁质酶添加量为100 600U/g的条件下提取60 180min ；再将提取温度 提高到80 95°C提取60 180min，所得提取液离心后得到上清液与沉淀物；取上清液加 入乙醇沉淀多糖，离心分离得到沉淀物，沉淀物用水溶解，浓缩除去残留的乙醇，然后在浓 缩液中加入硅藻土与活性炭的混合物，所述混合物加入的量为浓缩液质量的2 8wt%，所 述混合物中硅藻土与活性炭的质量比为1 1 4，混合充分搅拌后，过滤，取滤液用30 IOOkD的聚砜膜进行膜过滤，收集未滤过膜的大分子浓缩液，将大分子浓缩液进行干燥得到 黑木耳多糖。进一步，本专利技术优选料水比为1 98。进一步，本专利技术在几丁质酶作用下于42°C的条件下提取，提取时间优选为99min。进一步，在上述技术方案中，优选将提取温度提高到85°C，提取120min。进一步，本专利技术优选几丁质酶添加量为200 400U/g。本专利技术优选所述的黑木耳多糖的酶法提取方法为取干燥黑木耳机械粗粉碎，过 60目筛，然后按照1 98的料水比混合，在几丁质酶作用下于温度42°C、pH为8.0及几丁 质酶添加量为400U/g的条件下提取99min，再将提取温度提高到85°C，提取120min，提取液 离心后得到上清液与沉淀物，取上清液加入乙醇沉淀多糖，离心分离得到沉淀物，沉淀物用 水溶解，浓缩除去残留的乙醇，然后本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种黑木耳多糖的酶法提取方法，包括如下步骤：取干燥黑木耳机械粗粉碎，过４０～１００目筛，然后按照１∶５０～２００的料水比混合，在几丁质酶作用下于３５～５０℃、ｐＨ　５．０～９．０及几丁质酶添加量为１００～６００Ｕ／ｇ的条件下提取６０～１８０ｍｉｎ；再将提取温度提高到８０～９５℃提取６０～１８０ｍｉｎ，所得提取液离心后得到上清液与沉淀物；取上清液加入乙醇沉淀多糖，离心分离得到沉淀物，沉淀物用水溶解，浓缩除去残留的乙醇，然后在浓缩液中加入硅藻土与活性炭的混合物，所述混合物加入的量为浓缩液质量的２～８ｗｔ％，所述混合物中硅藻土与活性炭的质量比为１∶１～４，混合充分搅拌后，过滤，取滤液用３０～１００ｋＤ的聚砜膜进行膜过滤，收集未滤过膜的大分子浓缩液，将大分子浓缩液进行干燥得到黑木耳多糖。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张拥军，鲜乔，何杰民，李佳，朱丽云，
申请(专利权)人：中国计量学院，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]