基于靶向抗原至抗原呈递细胞上表达的ＤＣＩＲ的疫苗制造技术

本发明专利技术包括用于使用ＤＣＩＲ特异性抗体或其片段（抗原与其结合形成抗体－抗原复合物，其中该抗原通过与该抗体－抗原复合物接触的树突细胞加工和呈递）增加抗原呈递效力的组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
一般而言，本专利技术涉及疫苗接种领域，更具体地，本专利技术涉及与基于乾 向抗原至抗原呈递细胞上表达的DCIR的疫苗。相关申请的交叉引用本申请要求2007年2月2日提交的美国临时申请系列号60/888,032的 优先权，其内容以其整体引入作为参考。联邦政府资助研究的声明根据NIH给予的合同号为1U19AI0572340100003的美国政府资助作出 本专利技术。在本专利技术中政府具有某些权利。
技术介绍
不限制本专利技术的范围，描述与抗原呈递相关的本专利技术的背景。基于靶向树突细胞(DC)的人疫苗是建立在小鼠模型中引人注目的研 究上的新构思。这里，由针对某些DC受体的抗体运送至DC的小剂量的相 对弱的抗原可以引起有效且广泛的免疫反应。为开发用于人的此类疫苗，需 要对确切哪种DC受体应该用于该抗原靶向应用有更好的理解。这是因为在 小鼠和人免疫系统之间不总是精确的一致，以及还因为不是所有可能的DC 受体都已经仔细地进行了针对该疫苗应用的检验。因此，已经启动了体外测试多种抗人DC受体标靶的研究，例如，在 HLA I类和II类分子的情况下用与针对甘露糖受体活化T细胞的人mAb融 合的黑色素瘤抗原pmell7靶向的DC ( Ramakrishna, Treml等，2004)。此 外，通过人源化的抗DC-SIGN mAb使模式抗原KLH耙向DC有效地诱导了 抗原特异性的初次反应以及剂量节约的记忆T细胞反应(Tacken， de Vries 等，2005 )。除甘露糖受体和DC-SIGN之外，人DC表达已知与抗原捕获 有关的其它受体。这些中许多是C型凝集素受体(CLR),包括LOX-l、 DEC205、 DC-ASGPR、 Langerin、 DCIR、 BDCA-2、 DECTIN-1和CLEC-6。 这些CLR由不同的DC亚型不同地表达，并且它们的表达可以随DC成熟状 态而变化(Figdor, vanKooyk等，2002; Geijtenbeek, vanVliet等，2004)。DC亚型刺激不同的免疫反应，因此，通过差异表达的受体耙向抗原至这些亚型应该引起不同的免疫反应(Shortman和Liu 2002)。此外，在相同 DC亚型上的不同受体可以指导抗原到单独的加工途径(Trombetta和 Mellman 2005 )。最后，这些受体中一些不是固有活化的(例如，DEC205 (Bonifaz， Bonnyay等，2004))，而其它的可能是活化的(例如，LOX-1 (Delneste, Magistrelli等，2002))或还没有被彻底研究。伴随抗原摄取的 DC活化的重要性还未知。但是如果这是有益的，通过靼向性mAb的DC活 化可能使靶向性疫苗的制剂简单化。专利技术概述在这些考虑的情况下，本专利技术的专利技术人已意识到对通过体外详细研究 CD4+和CD8+ T细胞初次及记忆反应确定对于需要的免疫结果最合适的人 DC靶向性受体的系统比较的迫切需要。本申请描述特定的DC受体-树突 细胞抑制性受体(DCIR)-特殊且出乎意料的特性，其显示它是对于靶向 抗原至人DC以用于预防性和治疗性疫苗接种目的来说的理想的受体。本专利技术包括用于制备和使用为引起针对抗原的有效且广泛的免疫反应 的目的而特异性靶向(递送)该抗原至抗原呈递细胞的疫苗的组合物和方法。 该目的主要是引起针对抗原衍生于其的活性剂(agent)(病原体或癌)的保护 性或治疗性免疫反应。更特别地，本专利技术包括组合物、方法以及用于设计和制备以受控的模块 结构载有一个或多个抗原的靶特异性单一重组抗体(mAb)、活化蛋白或其 它抗体的方法。可以使用本专利技术的模块式rAb载体例如(通过针对内在化的 人树突细胞受体的一个原发重组抗体)靶向多个抗原和/或抗原与活化的细胞 因子至树突细胞(DC)。此外，本专利技术还提供以受控且确定的方式首尾相 连地连接两种不同的重组mAb的方法。本专利技术包括用于通过分离和纯化DCIR特异性抗体或其片段增加表达 DCIR的抗原呈递细胞的抗原呈递效力的组合物和方法，其中耙试剂(targeted agent)与所述DCIR特异性抗体或其片段结合形成抗体-抗原复合物，其中 该活性剂通过已与该抗体-活性剂复合物接触的例如树突细胞加工并呈递。 在一个实施方案中，抗原呈递细胞是树突细胞并且DCIR特异性抗体或其片 段与Coherin/Dockerin (协调素/锚定素)对的一半结合。DCIR特异性抗体或 其片段还可与Coherin/Dockerin对的一半结合而抗原与该Coherin/Dockerin 对的互补性一半(complementary half)结合，形成复合物。非限制的实例活性 剂包括一种或多种肽、蛋白质、脂质、碳水化合物、核酸及其组合。活性剂可以是一种或多种细胞因子，所述细胞因子选自白细胞介素，转 化生长因子(TGF),成纤维细胞生长因子(FGF),血小板衍生生长因子6(PDGF),表皮生长因子(EGF),结締组织活性肽(CTAP)，成骨因子， 以及这些生长因子的生物活性类似物、片段和衍生物，B/T细胞分化因子， B/T细胞生长因子，促有丝分裂细胞因子，趋化细胞因子，集落刺激因子， 血管生成因子，IFN-a, IFN-P, IFN-y, IL1, IL2， IL3, IL4, IL5， IL6， IL7， IL8, IL9， IL10, ILll， IL12， IL13, IL14, IL15， IL16, IL17， IL18等， 瘦素(leptin),肌肉生长抑制素(myostatin)，巨噬细胞刺激蛋白，血小板 衍生生长因子，TNF-a， TNF-卩，NGF， CD40L, CD137L/4-1BBL,人淋巴 毒素-卩，G-CSF, M-CSF， GM-CSF， PDGF, IL-la, ILl-卩，IP-IO， PF4， GRO, 9E3,促红细胞生成素，内皮抑素(endostatin),血管抑素(angiostatin), VEGF,包括卩转化生长因子(例如TGF-卩1、 TGF-卩2、 TGF-(33)在内的转 化生长因子(TGF) M因家族；骨形态发生蛋白(例如BMP-1、 BMP-2、 BMP-3、 BMP-4、 BMP-5、 BMP-6、 BMP-7、 BMP-8、 BMP-9);肝素结合 生长因子(成纤维细胞生长因子(FGF),表皮生长因子(EGF),血小板 衍生生长因子(PDGF),胰岛素样生长因子(IGF));抑制素(例如抑制 素A、抑制素B);生长分化因子(例如GDF-1);以及活化素(例如活化 素A、活化素B、活化素AB)。在另一个实施方案中，活性剂包括抗原， 该抗原为细菌蛋白、病毒蛋白、真菌蛋白、原生动物蛋白或癌蛋白。本专利技术还包括用于增加树突细胞的抗原呈递效力的组合物和方法，包括 结合DCIR特异性抗体或其片段，其中抗原与该DCIR特异性抗体或其片段 结合形成抗体-抗原复合物，其中该抗原通过已与该抗体-抗原复合物接触的 树突细胞加工并呈递。另 一个实施方案是针对DCIR的抗体或其它特异性结途。对DCIR特异^抗原輩巴向性试剂用、于经皮肤的i苗接种的^途；DCIR 特异的抗原靶向性试剂与共给药或连接的佐剂相结合用于疫苗接种或者能 够作为重组本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于增加表达ＤＣＩＲ的抗原呈递细胞的抗原呈递效力的方法，包括分离和纯化ＤＣＩＲ特异性抗体或其片段的步骤，其中靶试剂与所述ＤＣＩＲ特异性抗体或其片段结合形成抗体－试剂复合物，其中已与所述抗体－试剂复合物接触的抗原呈递细胞使该分子内在化。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：G祖拉夫斯基，JF班彻罗，
申请(专利权)人：贝勒研究院，
类型：发明
国别省市：US[美国]