本发明专利技术包括用于表达、分泌及使用新组合物的组合物和方法，所述的新组合物用作例如疫苗和抗体递送载体，从而将抗原递送到抗原呈递细胞中。在一个实施方案中，所述的载体是抗‑CD40抗体或其片段，以及一种或多种连接到所述的抗‑CD40抗体或者其片段的抗原性肽，所述抗体包括人源化抗体。
【技术实现步骤摘要】
本申请是2010年3月4日申请的PCT国际申请PCT/US2010/026275于2011年11月10日进入中国国家阶段的、申请号为201080020548.2且专利技术名称为“靶向抗原呈递细胞的癌症疫苗”的专利技术专利申请的分案申请。专利技术
总地来说，本专利技术涉及免疫领域，以及更具体地，涉及新的基于抗-CD40的抗癌疫苗。
技术介绍
在不限制本专利技术的范围的前提下，本专利技术的背景与抗原呈递结合描述。授予Ledbetter等人的第7,118,751号美国专利中教导了抗原呈递的疫苗和方法的一个实例，其涉及DNA疫苗，该DNA疫苗编码氨基端抗原，所述的氨基端抗原连接到结合CD40的羧基端功能域。总地来说，教导了将一种或多种抗原靶向细胞表面受体，从而提高抗原特异性的体液及细胞免疫应答的疫苗。将连接到结合于细胞表面受体的功能域的抗原(或多种抗原)内在化，从而将抗原转移到细胞内结构(intracellular compartment)中，在所述的细胞内结构中，所述的抗原被分解成为肽，并加载到MHC分子上。对所述的肽抗原具有特异性的T细胞被活化，从而导致增强的免疫应答。所述的疫苗可以包括连接到结合至少一种受体的功能域的抗原，或者包括编码连接到结合于至少一种受体的功能域的抗原的DNA质粒。本专利技术优选的实施方案将HIV-1 env抗原靶向CD40受体，导致将抗原向CD40阳性细胞的递送，以及选择性地活化将HIV-1env抗原呈递到T细胞的细胞上的CD40受体。另一个实例见于Li等人递交的第20080254026号美国专利申请，其涉及抗-CD40单克隆抗体拮抗剂，及其应用的方法。总地来说，公开了用于治疗在表达CD40的细胞上通过激发CD40信号转导所介导的疾病的疗法的组合物和方法。所述的方法包括将治疗上有效量的抗-CD40抗体或其抗原结合片段拮抗剂给予对其有需要的患者。所述的抗-CD40抗体或其抗原结合片段 拮抗剂没有显著的激动剂活性，但是当该抗体结合于表达人类CD40的细胞上的CD40抗原时显示拮抗剂活性。所述的抗-CD40抗体或其抗原结合片段的拮抗剂活性有利地抑制表达人类CD40的细胞的增殖和/或分化，所述的表达人类CD40的细胞如B细胞。由Delucia递交的第20080241139号美国专利申请中教导了另一个实例，其涉及包含微生物TLR激动剂、CD40或者4-1BB激动剂以及可选地抗原的佐剂组合，及其在细胞免疫中诱导协同增强(synergistic enhancement)的用途。总地来说，本申请据称教导了包含至少一种微生物TLR激动剂如整个的病毒、细菌或者酵母或者其部分如膜、原生质球、胞质或者形骸细胞，CD40或者4-1BB激动剂，以及可选地抗原的佐剂组合，所述的抗原的所有三个部分可以为分开的，或者公开了包含同样的重组微生物或者病毒的佐剂组合。还提供了这些免疫佐剂在治疗不同的慢性疾病中的用途，所述的慢性疾病如癌症和HIV感染。由Bernett等人递交的第20080199471号美国专利申请涉及经优化的CD40抗体及使用其的方法。总地来说，该申请据称教导了靶向CD40的抗体，其中所述的抗体包括与亲代抗体相关的至少一种修饰，其中所述的修饰改变对FcγR的亲和性或者改变与亲代抗体相关的效应子作用。还公开了使用该专利技术的抗体的方法。最后，由Tripp等人递交的第20080181915号美国专利申请涉及用于呼吸道合胞体病毒的CD40配体佐剂。总地来说，该申请据称教导了用于增强对宿主中RSV的免疫应答的方法和佐剂，其中所述的方法和佐剂包括CD40结合蛋白的来源。优选地，所述的CD40结合蛋白质是CD40L，并且所述的来源是包括可操作地连接到CD40L编码区域的启动子的载体。由该专利技术的佐剂和方法产生的提高的免疫应答包括增加的Th1细胞因子表达和增加的抗体产生。
技术实现思路
在一个实施方案中，本专利技术是包括式：Ab-(PL-Ag)x、Ab-(Ag-PL)x、Ab-(PL-Ag-PL)x、Ab-(Ag-PL-Ag)x、Ab-(PL-Ag)x-PL或者Ab-(Ag-PL)x-Ag的融合蛋白；其中Ab是抗体或者其片段；其中PL是包含至少一个糖基化位点的至少一个肽接头；其中Ag是至少一个抗原；以及其中x是从1到20的整数，所述的融合蛋白在溶液中比没有糖基化位点的相同的融合蛋白具有更高的稳定性。在一个方面，Ag选自病毒抗原、肿瘤抗原、感染性疾病抗原、自身免疫抗原、毒素或者其组合。在另一个方面，所述的Ag是肽串联体(concatemer)。在另一个方面，所述的PL是肽串联体。在另一个方面，-(PL-Ag)x、-(Ag-PL)x、-(PL-Ag-PL)x或者-(Ag-PL-Ag)x位于Ab重链或其片段的羧基末端。在另一个方面，所述的Ag在宿主中引发体液免疫应答和/或细胞免疫应答。在一个方面，所述的Ab至少包括抗-CD40_12E12.3F3(保藏编号为ATCCPTA-9854，保藏日期为2009年2月26日，保藏单位：美国典型培养物保藏中心(ATCC)，美国弗吉尼亚州马纳萨斯(Manasas,Virginal,USA))、抗-CD40_12B4.2C10(ATCC提交号为HS446，保藏编号为ATCC PTA-10653，保藏日期为2010年2月17日，保藏单位：美国典型培养物保藏中心(ATCC)，美国弗吉尼亚州马纳萨斯(Manasas,Virginal,USA))和抗-CD40_11B6.1C3(ATCC提交号为HS440，保藏编号为ATCC PTA-10652，保藏日期为2010年2月17日，保藏单位：美国典型培养物保藏中心(ATCC)，美国弗吉尼亚州马纳萨斯(Manasas,Virginal,USA))的可变区。在一个方面，所述的Ag选自自身免疫疾病中涉及的，与自身免疫疾病或者障碍相关的抗原，所述的抗原选自谷氨酸脱羧酶65(GAD65)、天然的DNA、髓磷脂碱性蛋白、髓磷脂蛋白脂质蛋白、乙酰胆碱受体组分、甲状腺球蛋白及促甲状腺激素(TSH)受体。在另一个方面，所述的Ag选自感染性疾病抗原，所述的感染性疾病抗原选自细菌抗原、病毒抗原、寄生虫抗原和真菌抗原。在另一个方面，x包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或者19。在另一个方面，所述的融合蛋白包括两个或者更多个来自不同抗原，并由至少一个肽接头(PL)隔开的Ag。在另一个方面，所述的融合蛋白包括两个或多个由至少一个PL隔开的Ag，所述的PL包括丙氨酸和丝氨酸。在另一个方面，所述的Ab是抗体片段，其选自Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fc或者ScFv。在一个方面，所述的Ab特异性地结合于第I类MHC、第II类MHC、CD1、CD2、CD3、CD4、CD8、CD11b、CD14、CD15、CD16、CD19、CD20、CD29、CD31、CD40、CD43、CD44、CD45、CD54、CD56、CD57、CD58、CD83、CD86、CMRF-44、CMRF-56、DCIR、DC-ASPGR、CLEC-6、CD40、BDCA-2、MACRO、DEC-205、甘露糖受体、胰岛蛋白、DECTIN-1、B7-1、B7-2、IFN-本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种融合蛋白，其包括抗‑CD40抗体或其抗原结合片段，包含至少一个糖基化位点的至少一个肽接头和一个或多个位于抗‑CD40抗体的羧基末端的癌症肽，所述癌症肽选自存活素、人乳头瘤病毒(human papilloma virus)(HPV)E6和E7、通过T 1细胞识别的黑色素瘤抗原(MART‑1)、Pme117(gp100)、细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白B1，其中当存在两个或更多个癌症肽时，所述癌症肽由一个或多个肽接头隔开。
【技术特征摘要】
2009.03.10 US 61/159059;2009.03.10 US 61/159055;201.一种融合蛋白，其包括抗-CD40抗体或其抗原结合片段，包含至少一个糖基化位点的至少一个肽接头和一个或多个位于抗-CD40抗体的羧基末端的癌症肽，所述癌症肽选自存活素、人乳头瘤病毒(human papilloma virus)(HPV)E6和E7、通过T 1细胞识别的黑色素瘤抗原(MART-1)、Pme117(gp100)、细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白B1，其中当存在两个或更多个癌症肽时，所述癌症肽由一个或多个肽接头隔开。2.权利要求1所述的融合蛋白，其中所述抗体至少包含抗体抗-CD40_12E12.3F3(ATCC登录编号ATCC PTA-9854)、抗-CD40_12B4.2C10(ATCC提交号HS446，保藏编号为ATCC PTA-10653)或抗-CD40_11B6.1C3(ATCC提交编号HS440，保藏编号为ATCC PTA-10652)的可变区。3.权利要求1所述的融合蛋白，其中所述抗-CD4抗体包含：至少一个与选自SEQ ID NO.:148、150和153的重链可变区具有90％、95％、99％或100％的序列同一性的重链可变区，或者至少一个与选自SEQ ID NO.:149、151、152或154的轻链可变区具有90％、95％、99％或100％的序列同一性的轻链可变区，或者两者。4.权利要求1所述的融合蛋白，其中所述癌抗原选自或者为SEQ ID NO.:87-92、93-95、113-117、122-130、132-133和141-144的抗原肽。5.权利要求1所述的融合蛋白，其中至少一个肽接头选自：SSVSPTTSVHPTPTSVPPTPTKSSP(SEQ ID NO.:11)；PTSTPADSSTITPTATPTATPTIKG(SEQ ID NO.:12)；TVTPTATATPSAIVTTITPTATTKP(SEQ ID NO.:l3)；或TNGSIT...
【专利技术属性】
技术研发人员：G·祖拉夫斯基，J·F·班彻罗，AL·弗拉玛，M·蒙特斯，P·克鲁卡尔，赤川桂子，
申请(专利权)人：贝勒研究院，
类型：发明
国别省市：美国;US
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