本发明专利技术涉及能导致针对Ｔｅ１效应物的Ｉ类－免疫的有效重新定向的新组合物，所述重新定向利用了通过ＩｇＧ主链内的肽与抗原呈递细胞的合适指令的组合出乎意料地加载ＭＨＣ Ｉ。上述组合物能够将看上去无效的治疗剂转变成高效的治疗剂，与Ｉ类－限制的细胞溶解性细胞和ＩＦＮ－γ，ＩＬ－２生产Ｔ细胞的产生相关，还与抗高毒力微生物的保护作用或从恶性肿瘤过程中恢复相关。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术总体上涉及产生免疫反应的方法和组合物。更具体地讲，本专利技术涉及加载抗原呈递细胞，以便以适合产生需要的T细胞反应的方式在I类MHC分子上展示送递的表位的方法和组合物。
技术介绍
还没有直接的证据证实通过Fcγ受体(“FcγR”)送递抗原，能够引发有效的抗肿瘤或抗感染反应。例如，以前业已证实了，在免疫球蛋白或IgG主链内送递病毒NP(核蛋白)衍生的表位不会导致可检测的细胞毒性免疫的诱导(Zaghouani等，Eur J Immunol.1993Nov；23(11)2746-50)。相反，在NP表达细胞(转染瘤)中送递相同的表位，产生了显著的细胞溶解活性。因此，那时得出的结论是“APC(抗原呈递细胞)不能够将流感核蛋白肽从相同的场合(1μMIg-NP)呈递到I类MHC-限制的T细胞”，因此，“内吞腔室在相同的载体蛋白上提供I-和II-类MHC限制的肽时，有利于通过II类呈递至少1000倍”。NP表位进入I类MHC呈递途径，取决于送递方法，并因此被认为随后严格局限于FcγR内化。最近，业已提出了抗原呈递细胞(“APC”)上的FcγR的交联或同时占据，可大大优化信号转导，并且导致交叉激发的刺激和APC刺激，导致了I类MHC分子的有效加载(Regnault等，J Exp Med.1999，Jan 18；189(2)371-80)。这一目的可以利用免疫复合物(多价抗原-抗体非共价复合物)实现；不过，由于C(“补体”)介导的疾病的可能，所述复合物只能够离体施用于APC(Naama等，J Clin Lab Immunol.1985 Jun；17(2)59-67；Rafiq等，J Clin Invest.2002 Jul；110(1)71-9)。另外，(Fab)2-抗原重组融合构建体将受体定向到APC上，可以导致受体交联内化，并且在II类MHC分子中呈递(Lunde等，Biochem Soc Trans 2002；30(4)500-6)。不过，所述抗原的插入修饰了免疫球蛋白(“Ig”)的恒定区(CH2和CH3)的Fc部分，这有可能导致对半衰期和药代动力学的严重的和不可预测的影响，这两种参数与该片段的完整性密切相关(Spiegelberg HL，J Clin Invest 1975 Sep；56(3)588-94)。最终，到目前为止还没有上述任一种方法在体内利用时能诱导预防性或治疗性抗-肿瘤或抗-微生物免疫的确切证据，所述免疫与能产生诸如IFN-γ的特异性细胞因子的最佳I类和II类MHC-限制的T细胞的产生相关。即使是离体使用，所述免疫复合物方法表现出有限的效力，这是由于ITAM+和ITIM+FcγR的活性的平衡所致(Kalergis和Ravetch，J Exp Med 2002 Jun 17；195(12)1653-9)。因此，尚有待确定通过Fcγ受体的单价连接进行的抗原到APC的体内送递是否可用于诱导有效的抗-肿瘤或抗病毒免疫。申请日为2002年3月14日的PCT申请流水号PCT/US03/07995和申请日为200年4月30日的美国专利申请流水号60/364,490被收作本文参考。可以从Geneva BioInformatics获得的记录在CD-ROM上的Swiss-Protein/Trembl Protein KnowledgebaseTM以它的全文形式收作本文参考。专利技术概述本专利技术证实了与预期相反，利用没有修饰Fc部分而与IgG主链共价连接的肽表位，通过FcγR的单价占据而体内和离体加载APC，导致所述表位进入MHC I加工和呈递途径，以及有效加载I类MHC分子。出乎预料的是，这导致了强Tc2反应的产生，它以识别IgG主链内的表位的、产生IL-4，而不是IL-2或IFN-γ的I类MHC限制的T细胞为特征。另外，这种“偏离的”反应的发生不能有效控制与肿瘤生长相关的病理学过程，并且与细胞溶解性T细胞的显著激发不相关。这在很大程度上解释了以前在类似的场合不能检测免疫的诱导，并且出乎预料的证实了APC上的FcγR的交联或多价占据(如对于免疫复合物或Fab2-抗原化合物来说)不是将所述肽有效加载到I类MHC分子上的先决条件。这一点是重要的，因为所述概念可体内使用(与免疫复合物不同)，并且可以保留Fc部分的完整性，并因此保留PK特征(与Fab2-抗原重组分子相反)。尽管有效加载了I类MHC分子，在通过IgG主链内的肽表位进行体内加载时，APC不能引发保护性抗-肿瘤和抗-微生物免疫。另外，本申请披露了能导致I类-免疫向Tc1效应物有效重新定向的新组合物，所述重新定向利用了通过IgG主链内的肽对MHC I的出乎预料的加载。这种组合物能够将看上去无效的II类和I类MHC-限制的肽转变成高效肽。FcγR-介导的APC的加载与通过新的合成多核苷酸对APC的刺激相关，导致了I类-限制的细胞溶解性细胞和产生IFN-γ，IL-2的T细胞的产生，还与抗高毒力微生物的保护作用或从恶性肿瘤过程中恢复相关。还证实了所述技术的变化形式，不正确的使用或正如以前所推荐的用法，在产生抗病毒或肿瘤的免疫保护，特别是I类MHC-限制的免疫方面不是最佳的。本申请证实了过去失败的原因，并且教导了如何获得并且应用所述技术的不同成分，以便获得最佳效果。本专利技术的各种实施方案包括1.一种加载抗原呈递细胞，并且产生针对抗原或肽表位的T细胞反应的方法，包括使用与Ig，Ig主链主链或其部分连接的至少一个肽表位，以便形成Ig-肽分子/复合物或其部分，其中，在给患者体内或离体施用时，可以通过所述所述抗原呈递细胞的MHC I途径有效加工并且呈递所述表位，导致I类MHC分子在抗原呈递细胞上的有效加载，以便产生I类MHC-肽复合物。2.如段落1的方法，其中，所述Ig-肽分子/复合物或其部分是与RNA链一起施用的。3.如段落2的方法，其中，所述RNA是dsRNA链，并且是pApU。4.如段落3的方法，其中，所述dsRNA是pApU，并且所述dsRNA的大小大约为20-100个碱基对。5.如段落1，2，3或4的方法，其中，所述Ig主链来自人Ig。6.如段落1，2，3或4的方法，其中，所述Ig主链来自人IgG。7.如段落1，2，3或4的方法，其中，所述Ig主链是人源化Ig。8.如段落1的方法，其中，所述抗原呈递细胞是通过FcγR的单价占据加载的。9.如段落1的方法，其中，所述抗原呈递细胞可以在体内或离体加载。10.如段落1的方法，其中，所述肽表位共价连接于所述Ig主链。11.如段落1的方法，其中，所述肽表位连接于Ig主链，而不修饰所述Ig的Fc部分。12.如段落1的方法，其中，所述肽表位被插入所述免疫球蛋白分子的CDR区。13.如段落1，2，3或4的方法，其中，所述肽表位通过插入或者缺失而插入所述免疫球蛋白分子的CDR区。14.如段落1，2，3或4的方法，其中，所述I类MHC-肽复合物导致了强Tc2反应的产生，该反应以IL-4，而不是IL-2或IFN-γ的产生为特征。15.如段落1的方法，其中，所述肽表位选自下组流感病毒M1或M2；丙型肝炎病毒NS3；乙型肝炎病毒核心抗原；人乳头瘤病毒HPV18-E7，HPV 16-E7，HPV 18 E6，HPV 16 E6；黑素瘤-g本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种在患者体内产生针对患者体内的抗原的免疫反应的方法，包括：给所述患者施用免疫球蛋白或其部分，其中，所述免疫球蛋白具有连接于所述免疫球蛋白或其部分的所述抗原的至少一个肽表位，以及与ＲＮＡ片段组合施用所述免疫球蛋白或其部分。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：A博特，王立林，D史密斯，B菲利普斯，
申请(专利权)人：阿斯特拉尔公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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