特异性抗幽门螺杆菌免疫牛初乳的制备方法及其应用技术

一种含有抗幽门螺杆菌（ＨＰ）特有蛋白质抗原的复合抗体的免疫牛初乳，其特征是，所述免疫牛初乳是用ＨＰ复合抗原免疫产犊牛所分泌的牛初乳。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种免疫牛初乳抗体及其应用，特别是涉及一种含抗幽门螺杆菌特有抗原的复合抗体的免疫牛初乳制备及其在食品、保健食品和医药上的应用。
技术介绍
1982年，Warren和Marshall从一名十二指肠溃疡患者的胃活检组织中分离到一种新的细菌，现称之为幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，简称HP)，并提出它就是消化性溃疡的致病因子。经过十四年的研究证实了这个假说。1994年2月，在美国国立卫生研究院(NIH)主持的一次专题会议上，一个独立的专家小组宣布消化性溃疡是一个感染性疾病，建议用抗菌素治疗替代以往的制酸治疗。幽门螺杆菌感染遍及全球，经济不发达地区感染率高，并随年龄增长而递增。感染持续时间也很长，甚至终生。发展中国家的感染率高于发达国家，中国的感染率约为70％。幽门螺杆菌感染后常导致持续数周至数月的急性胃炎，然后发展为慢性活动性胃炎，它常持续终生。在感染后的数年至数十年里，慢性胃炎可以无症状，也可发展为消化性溃疡、萎缩性胃炎甚至胃癌。研究表明90％以上的十二指肠溃疡，70％以上的胃溃疡是由幽门螺杆菌感染所致，胃癌的发生也与幽门螺杆菌感染有关。目前幽门螺杆菌感染一般采用抗菌素治疗，常规是三联疗法，疗程不超过14天。但抗菌素治疗存在许多缺点，如疗程长毒副作用大，因耐药的幽门螺杆菌的产生感染易反复。因此，医药界都在寻求更彻底更有效的解决方法，如疫苗和抗体等生物治疗手段。根据免疫学观点，哺乳动物乳汁是机体免疫作用的产物。经自然接触或通过接种，人和动物机体受到各种抗原(例如各种细菌、病毒、毒素等)刺激会产生相应的抗体，它们与抗原结构上具有互补性，两者结合后抗原丧失活力。所谓免疫乳是通过有意识地给牛、山羊等哺乳动物接种一些能够引起人或动物疾病的细菌、病毒、毒素等抗原，刺激动物机体发生免疫应答，向乳汁分泌特异性抗体(Ig)而制得的含特异性抗体的乳汁。对于动物而言，这种多次注射加强剂量的抗原使之产生较高自动获得性免疫的过程，称之为“超免疫作用”。对于普通免疫乳，通过超免疫过程，乳牛机体的免疫系统不断被刺激发生免疫应答，持续不断地向乳汁中分泌高浓度抗体，这就是免疫乳生产的基本原理。生产免疫牛初乳，唯一不同之处在于超免疫对象为妊娠期乳牛。免疫接种能够大幅度增加牛初乳中相应抗体的免疫原性或效价，用失活菌体免疫，牛初乳内各种抗体(IgG、IgA和IgM)对免疫菌体抗原的中和滴度均得到显著提高，一般在50~100倍。选择适当抗原和免疫方法，还可以大幅度提高免疫乳中一些其他非特异性免疫因子的水平。专利技术的内容本专利技术所要解决的技术问题之一是克服了现有技术中存在的不足，提供了一种特异性抗幽门螺杆菌免疫牛初乳的制备方法。本专利技术所要解决的技术问题之二是提供上述免疫牛初乳在食品、食品添加剂、医药、保健食品和诊断中的应用。本专利技术解决上述技术问题之一的技术方案是一种特异性抗幽门螺杆菌免疫牛初乳，所述免疫牛初乳是用HP复合抗原免疫产犊牛所分泌的牛初乳。它的生产是按如下步骤完成(1)制备基因工程重组方法制备HP特有的蛋白质抗原；(2)免疫产犊牛；(3)收集免疫牛初乳。所述HP特有的蛋白质抗原包括尿素酶B亚单位(urease β-subunit，UreB)、热休克蛋白60(heat-shock protein 60，Hsp60)、细胞毒素相关蛋白A(Cytotoxin associated gene A，CagA)、细胞空泡毒素A蛋白(vacuolating cytotoxin A，VacA)。本专利技术所提供的上述特异性抗幽门螺杆菌免疫牛初乳可广泛应用于食品、食品添加剂、医药和保健食品中，对防治幽门螺杆菌感染引起的相关疾病具有良好的效果。由于免疫所用的抗原是采用基因工程重组方法获得的，而且是HP特有的，与现有技术相比，本专利技术的优点是特异性好，即所述牛初乳中的抗体只与HP起抗原抗体反应，从而起到杀灭HP或阻止HP感染的作用，而不会对人体肠道的正常菌群起破坏作用。另外本专利技术采用牛初乳为载体，安全无毒，易于产业化，成本低。具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术的作进一步的说明实施例1特异性抗幽门螺杆菌免疫牛初乳可以通过以下步骤获得(1)制备基因工程重组HP特有的蛋白质抗原；(2)免疫产犊牛；(3)收集免疫牛初乳。实施例2用基因工程重组方法制备HP特有的蛋白质抗原用胃镜从HP感染阳性的胃溃疡患者夹取胃粘膜组织，涂布于HP选择培养布氏琼脂平皿上，37℃微需氧培养5天，收集菌落，常规方法抽提HP的DNA，PCR扩增HP的UreB、Hsp60、CagA、VacA基因，将上述4条基因克隆到大肠杆菌表达质粒中，重组质粒转化大肠杆菌，发酵重组大肠杆菌，用色谱法纯化大肠杆菌中的UreB、Hsp60、CagA、VacA蛋白。实施例3免疫产犊牛选产犊前60-100天的乳牛，进行皮下注射，免疫用抗原浓度为1mg/ml，并加等量福氏佐剂，每只乳牛每次免疫剂量为5mg抗原，首次免疫后，每两周加强免疫一次，直至产犊；实施例4收集乳牛分娩后10天内的初乳，冷冻喷雾干燥得免疫牛初乳粉。实施例5取实施例1、4中任何一种产品进行抗体效价测定采用单向免疫扩散法进行抗体效价测定，抗体效价为1∶512-1∶16384。实施例6每100克奶粉中加入10克免疫牛初乳粉，所得产品可用于婴幼儿和成人预防HP感染，或已感染HP的患者的辅助治疗。实施例7每100ml鲜奶中加入2克免疫牛初乳粉，所得产品可用于婴幼儿和成人预防HP感染，或已感染HP的患者的辅助治疗。实施例8免疫牛初乳粉与猴头菇多糖按1∶5的比例混合，灌装胶囊，可用于保护胃粘膜的保健食品。实施例9免疫牛初乳粉加制剂辅料，灌装胶囊，可用于治疗HP感染的药物。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种含有抗幽门螺杆菌(HP)特有蛋白质抗原的复合抗体的免疫牛初乳，其特征是，所述免疫牛初乳是用HP复合抗原免疫产犊牛所分泌的牛初乳。2.根据权利要求1所述的免疫牛初乳，其特征是，它的生产方法包括如下步骤(1)采用基因工程重组方法制备HP特有的蛋白质抗原；(2)免疫产犊牛；(3)收集免疫牛初乳。3.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述HP特有的蛋白质抗原包括尿素酶B亚单位(urease β-subunit，U...

【专利技术属性】
技术研发人员：许春娣，徐帆洪，
申请(专利权)人：上海立泰哲田生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：