防治小麦根部病害的解淀粉芽孢杆菌ＥＡ１９及其制剂制造技术

本发明专利技术提供一种解淀粉芽孢杆菌ＥＡ１９，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为ＣＣＴＣＣ?ＮＯ：Ｍ?２０９３１６，该ＥＡ１９菌株是从中国科学院武汉植物园采摘的植物“一年蓬”植物的健康叶片中，采用平板筛选分离法分离纯化获得，为一种植物内生细菌。该解淀粉芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ?ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＥＡ１９菌株对小麦根腐病菌、小麦根腐叶枯病菌、小麦全蚀病菌、小麦白绢病菌和小麦纹枯病菌均具有明显的抑菌活性，其制备的颗粒菌剂、可湿性粉菌剂和水菌剂，可用于小麦根腐病、根腐叶枯病、全蚀病、白绢病和纹枯病害的防治。与采用化学药剂相比，其使用简单、污染小、成本低，具有良好的农业应用前景和生物开发价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)以及利用该解淀粉芽孢杆菌生产的菌剂和防治小麦根部病害的应用。该菌株已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO M 209316，菌株名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens) EA19,属生物

技术介绍
随着全球对资源和环境的广泛关注，利用植物内生菌或植物内生菌分泌的次生物质来拮抗或杀灭植物的有害病原物，是当前生物农药开发领域的一个新方向。小麦根腐病、全蚀病、白絹病和纹枯病，在河南、河北、山东、江苏、湖北及其他小麦主产区都有大面积发生，是危害我国小麦生产最主要的土传根部病害，其可导致一般田块减产10% 30%,重病田块减产50%以上，甚至颗粒无收。近年提倡的保护性耕作制度进一步加重了小麦土传根部病害的危害，这已成为一些麦区生产上的突出问题。种植抗病品种是一种防治这些病害最经济有效的方法，然而目前尚无防治小麦根部病害的抗病品种。因此，当前施用化学农药仍是防治这些病害的最主要方法，但其存在污染严重，与环境相容性差，病原菌容易产生抗药性等诸多问题，且这些问题日益突出。开发新型的无公害农药是解决小麦土传病害的迫切需要。芽孢杆菌属细菌，其分布广泛，好氧或兼性厌氧，能形成芽孢(内生孢子)，是土壤或植物体表及内部一类重要的微生物种群，一般为革兰氏阳性。芽孢杆菌形成的芽孢对热、紫外线、放射线和化学物质等都有很强的抵抗力，因此极有利于芽孢生防制剂的生产、剂型加工和芽孢杆菌在环境中的存活、定殖与繁殖。同时，芽孢杆菌作为自然界广泛存在的一种植物内生非致病细菌，对人畜无害、对环境无污染、易于繁殖和发酵、适应环境能力强，且其生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等多种活性物质对植物的致病菌或内源性感染的致病菌有明显的抑制作用，因此，芽孢杆菌在生物防治植物病害中具有重要开发价植。目前，生产上登记的用于防治植物病害的芽孢杆菌主要有枯草芽孢杆菌(B. subtilis)、腊样芽孢杆菌(B. cereus)、短小芽孢杆菌(B. pumillus)和多粘芽孢杆菌(B. po Iymyma)等。解淀粉芽孢杆菌是芽孢杆菌的一个种。在酶工业中，该菌是用于生产a-淀粉酶的主要菌种；在食品工业中，芽孢杆菌能很好地抑制引起多种食品腐烂的镰刀菌、曲霉、青霉和毛霉等致病菌的生长，亦具有广阔的应用前景。在农业中，尽管已有解淀粉芽孢杆菌对多种病原真菌具有活性的报道，但目前为止，解淀粉芽孢杆菌制成生防制剂用于防治植物病害的报道较少。李红玉等(专利公开号CN1952116A)公开了一种从土壤中分离的解淀粉芽孢杆菌17及其在桃炭疽病菌、梨黑斑病菌、苹果褐腐病菌、锐顶镰刀菌、尖孢镰刀菌、半裸镰刀菌、辣椒黑腐病菌、黄瓜枯萎病菌、番茄早疫病菌、茄子早疫病菌、立枯丝核菌、小麦根腐病菌、马铃薯丝核菌、马铃薯早疫病菌、马铃薯晚疫病菌、西瓜霜霉病等病害防治中的应用。姬广海等(专利公开号CN1792167A)公开了一种解淀粉芽孢杆菌(保藏号CGMCCNO. 1553)及其在防治魔芋细菌性软腐病中的应用。美国专利US 6960342中公开了一种从台湾百合地土壤中分离得到的解淀粉芽孢杆菌，其制成的生物制剂可用于椭圆葡萄孢引起的葡萄灰霉病的防治。关于用解淀粉芽孢杆菌防治小麦根部具体病害的研究，国内外尚无报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)EA19及其制备方法，以及利用解淀粉芽孢杆菌EA19制成的菌剂,解淀粉芽孢杆菌EA19在小麦根部病害防治中的应用。已由中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NO. M 209316，该菌株为一种植物内生菌。 为解决本专利技术的技术问题，所提供的技术方案为提供一种解淀粉芽孢杆菌EA19，已于2009年12月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是湖北省武汉市武汉大学，保藏号为CCTCC NO M 209316。所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)EA19系从中国科学院武汉植物园采得的“一年蓬”(Erigeron annuus (L.) Pers)植物健康叶片中，采用组织研磨平板筛选分离法分离得到的，为一种植物的内生细菌。解淀粉芽孢杆菌EA19菌株的制备过程如下(I)制备植物组织稀释液称取采摘的“一年蓬”植物健康叶片I克，用70% (重量百分数)的酒精表面消毒30-45S、次氯酸钠消毒60-90S，然后将其剪碎后放入已灭菌的研钵中，加入5毫升的无菌水，在超净工作台上充分研磨，再将研磨液转移入EP管中，以8000转/分钟的离心速率离心5-10分钟，吸取出上清液，用无菌水将上清液分别稀释为10'10_2、10' 10_4、10_5 和 10_6 等浓度梯度液；(2)涂菌吸取各浓度稀释液I毫升，加入NA培养基平板中，用灭菌棉签涂匀，在30°C恒温箱内培养24-36小时。所述的NA培养基平板组成为牛肉浸膏3克，蛋白胨5克，葡萄糖10克，酵母浸膏I克、琼脂15克，蒸馏水1000毫升，PH 7. 0 ；(3)挑菌待NA培养基平板长出菌落后，根据形态挑取单菌落于12毫升NA液体培养基中，180转/分钟，30°C恒温振荡24-36小时；(4)纯化在NA固体平板上，采用平板划线法对培养液进行反复划线，直至获得纯培养，菌株命名为EA19 ；(5)菌株保存将纯化得到的菌株加入灭菌的盛有甘油的试管中-20°C保存，甘油的终浓度为15%。解淀粉芽孢杆菌EA19菌株的特征(I)形态学特征将EA19菌株接种于NA液体培养基上，振荡培养48h后，用亚甲基兰染色法、革兰氏染色法(结晶紫酸胺染色法)和芽孢染色法进行染色。观察得EA19菌株为短杆状，革兰氏阳性，周生鞭毛，内生产芽孢，在NA培养基上形成椭圆形、不透明乳白色菌落，表面粗糙，略凹陷。(2)生理生化特征经VITEK 2 Systems Version :03. 01全自动微生物鉴定系统分析，得生理生化测定结果，见表I。经初步生理生化鉴定EA19菌株为一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)或枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis subsp. subtilis)。表1EA19的生理生化测定结果权利要求1.一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)EA19,已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO. M 209316。2.一种根据权利要求I所述的解淀粉芽孢杆菌EA19制成的菌剂。3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于所述的菌剂为颗粒菌剂型、可湿性粉菌剂型或水菌剂型。4.一种根据权利要求I所述的解淀粉芽孢杆菌EA19在小麦病害防治中的应用，其特征在于所述的小麦病害为小麦根部病害，所述的小麦根部病害为小麦根腐病害、小麦根腐叶枯病害、小麦全蚀病害、小麦白絹病害或小麦纹枯病害。专利摘要本专利技术提供一种解淀粉芽孢杆菌EA19，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M209316，该EA19菌株是从中国科学院武汉植物园采摘的植物“一年蓬”植本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种解淀粉芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＥＡ１９，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为ＣＣＴＣＣ　ＮＯ．Ｍ　２０９３１６。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：喻大昭，曾凡松，杨立军，向礼波，汪华，龚双军，史文琦，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院植保土肥研究所，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]