女性不孕不育检测蛋白芯片及其试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种专门用于女性不孕不育检测的多指标蛋白芯片及其试剂盒。由基片和阵列式分布于基片上的蛋白检测指标以及对照检测指标涂层组成，所述的蛋白检测指标包括卵巢抗原（ＯＡｇ）、子宫内膜抗原（ＥＡｇ）、精子抗原（ＳＡｇ）、透明带抗原（ＺＡｇ）、人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）、滋养层细胞膜抗原（ＴＡｇ），和心磷脂抗原（ＣＡｇ）。解决目前市场上自身免疫学检测产品检测功能单一、检测指标滞后，并且没有集成化的缺点。除了添加专利申请号为２００５１０１０２４６６．３产品缺乏的ＡＣＡ指标外，也能够做到定量检测各个指标的浓度，并消除了指标间的交叉反应，不仅做到了高特异性和高灵敏度，也具有很高的准确度和精确度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及蛋白芯片疾病检测产品，具体地说，涉及一种女性不孕不育检测蛋白芯片及其试剂盒。
技术介绍
据世界卫生组织预测，在21世纪，不孕不育将成为仅次于肿瘤和心脑血管病的第三大疾病。权威的数据显示，在已婚夫妇中非意愿性不孕发生率为7％～46％。尽管不同地域存在差异，但一般被认为在8％～15％。目前国内不孕患者占已婚妇女总数的10％，国外要占15％，发病率都有逐年上升趋势。一般而言，不孕因素女方要占2/3，男方要占1/3。 女性的不孕不育症从时间顺序上讲有原发和继发之分。原发是指女性性成熟后从未怀孕或生育过，继发是指过去曾有过妊娠或分娩史而再次出现不孕不育。从病理上讲，女性不孕不育的原因归纳起来有器质性病变、内分泌因素、免疫因素与精神因素等。根据黄绍坤等人的文章(760例继发性不孕不育女性患者的免疫学检查结果分析，中国优生与遗传杂志，1006-9534(2003)01-0076-02)显示，免疫性因素造成的女性不孕不育是大部分不明原因不孕不育、继发性不孕不育和反复流产的主要原因，对继发性不孕不育患者进行一整套免疫因素的诊断和治疗是非常有必要的。 女性不孕不育的免疫学诊断是近年才开展的较新诊断方法。目前主要包括抗卵巢抗体(AOA，anti-ovarian antibody)、抗子宫内膜抗体(AEA，anti-endometrial antibody)、抗精子抗体(ASA，anti-spermatozoa antibody)、抗透明带抗体(AZP，anti-zona pellucidantibody)、抗心磷脂抗体(ACA，anti-cardiolipin antibody)、抗人绒毛膜促性腺激素抗体(HCG-ab，human chorionic gonadotropin antibody)、抗滋养细胞膜抗体(ATA，anti-trophoblast membrane antibody)等指标。 抗卵巢抗体(AOA)的产生是由于卵巢损伤、感染、炎症等原因造成卵巢抗原的外溢而导致的。其中约42％-52％的不孕及流产患者中有抗卵巢抗体(AOA)的高表达。AOA的表达会进一步加重卵巢的损伤，并导致子宫、胎盘的功能不健全，从而引起不孕和流产。 抗子宫内膜抗体(AEA)是由于子宫在病理状态下，如子宫内膜炎、子宫内膜异位症及子宫腺肌症等，可转化成抗原或半抗原，刺激机体而产生的抗体。此外，人工流产刮宫时，胚囊也可能作为抗原刺激机体产生抗体。一旦女性体内有抗子宫内膜抗体存在，便会导致不孕、停孕或发生流产。 精子作为一种独特的抗原，与机体免疫系统接触后可引起自身或同种免疫反应，产生抗精子抗体(ASA)，抗精子抗体所致不孕占不孕患者的10％～30％。男女体内都可能存在抗精子抗体。在男性抗精子抗体存在于血清或精浆中，在女性则存在于血清或宫颈粘液中。ASA与宫颈粘液蛋白结合，可干扰精子穿过排卵期宫颈粘液；ASA的调理作用可促进生殖道局部吞噬细胞对精子的吞噬；抗精子头部的抗体还能阻断精卵结合，引起补体介导的受精卵的融解，损害胚胎植入及前期胚胎发育导致早期流产。 抗透明带抗体(AZP)是由妇女自身免疫性反应产生的。透明带是披覆于卵子表面的糖蛋白)抗体。每一月经周期总有一些卵泡变为闭锁卵泡，其中的透明带如有活性，可成为抗原刺激而产生抗透明带抗体，或由于感染致使透明带变性，刺激机体产生抗透明带抗体。抗透明带抗体遮盖了位于透明带上的精子受体，使精子不能认识卵子，也就无从与卵子结合。同时抗体可以稳定透明带表面结构，因而能抵抗精子顶体酶对透明带的溶解作用，使精子穿透不了透明带。如已受精，因透明带结构的稳定，致胚胎被封固在透明带内，而无法着床。 抗心磷脂抗体(ACA)是一种以血小板和内皮细胞膜上带负电荷的心磷脂作为靶抗原的自身抗体。常见于系统性红斑狼疮(SLE)及其他自身免疫性疾病。该抗体与血栓形成、血小板、自然流产或宫内死胎关系密切。ACA阳性者死胎发生率为76％左右，反复的自然流产和宫内死胎与ACA呈显著正相关。ACA阳性率的孕妇在妊娠早期易反复流产，在妊娠中，后期易发生宫内胎儿死亡，特别是ACA-IgG水平中至高度升高者。Oshiro对检测过ACA且流产2次以上妇女进行回顾性研究发现，ACA阳性妇女发生宫内胎儿死亡是较发妊娠早期流产更具特点的类型。而Lockshin等的研究揭示ACA能更早更敏感地预测自发性流产。 人绒毛膜促性腺激素(HCG)是维持早期妊娠的主要激素。但是有自然流产史、人工流产史及生化妊娠史的女性，在流产过程中，绒毛组织中的HCG可能作为抗原刺激母体产生抗体。曾接受过HCG注射，以促进排卵的女性，体内的抗HCG抗体也有可能为阳性。此类患者可能在临床上表现为不孕或习惯性流产。另外，在不明原因流产的妇女血清中，抗滋养层细胞抗体(ATAb)比正常孕妇明显增高，这种抗体的增高与流产之间有着密切联系。其机制可能与封闭抗体的减少有关。 目前对女性不孕不育免疫学指标的检测方法主要集中在免疫荧光法或间接免疫荧光法。操作繁琐且费时。国外已有部分指标的ELISA检测试剂盒，但只能进行单指标检测，成本和时间代价都比较高。因此亟待一种能够高通量、快速而准确的检测方法。 生物芯片是近年发展起来的高效率检测方法，能够快速得到所要的检测结果，大大提高检测效率、节约成本。专利申请号为200510102466.3的一项能够检测6项不孕不育指标的生物芯片符合了快速、高通量、高特异性和灵敏度市场要求。但是仍有一定的缺陷，如①该试剂盒缺乏对目前应用广泛的ACA指标的检测②该试剂盒为定性试剂盒，仅能判断阴、阳性，不能做到定量检测。而定量检测对于病人疾病严重程度评价以及其相应治疗方法是十分有意义的。因此，现在的检测手段仍待改进。
技术实现思路
本专利技术要提供一种专门用于女性不孕不育检测的多指标蛋白芯片及其试剂盒。解决目前市场上自身免疫学检测产品检测功能单一、检测指标滞后，并且没有集成化的缺点。除了添加专利申请号为200510102466.3产品缺乏的ACA指标外，也能够做到定量检测各个指标的浓度，并消除了指标间的交叉反应，不仅做到了高特异性和高灵敏度，也具有很高的准确度和精确度。 本专利技术的技术方案如下提供一种不孕不育检测蛋白芯片，由基片和阵列式分布于基片上的蛋白检测指标以及对照检测指标涂层组成，所述的蛋白检测指标包括卵巢抗原(OvarinAntigen，OAg)、子宫内膜抗原(Endometrial Antigen，EAg)、精子抗原(Spermatozoa Antigen，SAg)、透明带抗原(Zona pellucid Antigen，ZAg)、人绒毛膜促性腺激素(Human chorionicgonadotropin，HCG)、滋养层细胞膜抗原(Trophoblast membrane Antigen，TAg)，以共价键或非共价键固定在基片上面；所述的蛋白检测指标还包括心磷脂抗原(CardiolipinAntigen，CAg)。 所述的基片是塑料、尼龙膜或硝酸纤维素膜。 上述的对照检测指标涂层包括阳性对照和阴性对照；阳性对照为兔IgG抗体，阴性对照为抗体点样所用的稀释液。 上述涂层上的每个阵列中蛋白检测指标每个有2-10个重复，对照指标本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种女性不孕不育检测蛋白芯片，由基片和阵列式分布于基片上的蛋白检测指标以及对照检测指标涂层组成，所述的蛋白检测指标包括卵巢抗原（ＯｖａｒｉｎＡｎｔｉｇｅｎ，ＯＡｇ）、子宫内膜抗原（（ＥｎｄｏｍｅｔｒｉａｌＡｎｔｉｇｅｎ，ＥＡｇ）、精子抗原（ＳｐｅｒｍａｔｏｚｏａＡｎｔｉｇｅｎ，ＳＡｇ）、透明带抗原（ＺｏｎａｐｅｌｌｕｃｉｄＡｎｔｉｇｅｎ，ＺＡｇ）、人绒毛膜促性腺激素（Ｈｕｍａｎｃｈｏｒｉｏｎｉｃｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ，ＨＣＧ）、滋养层细胞膜抗原（ＴｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｍｅｍｂｒａｎｅＡｎｔｉｇｅｎ，ＴＡｇ），以共价键或非共价键固定在基片上面；其特征在于，所述的蛋白检测指标还包括心磷脂抗原（ＣａｒｄｉｏｌｉｐｉｎＡｎｔｉｇｅｎ，ＣＡｇ）。

【技术特征摘要】
1.一种女性不孕不育检测蛋白芯片，由基片和阵列式分布于基片上的蛋白检测指标以及对照检测指标涂层组成，所述的蛋白检测指标包括卵巢抗原(Ovarin Antigen，OAg)、子宫内膜抗原((Endometrial Antigen，EAg)、精子抗原(Spermatozoa Antigen，SAg)、透明带抗原(Zona pellucid Antigen，ZAg)、人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotropin，HCG)、滋养层细胞膜抗原(Trophoblast membrane Antigen，TAg)，以共价键或非共价键固定在基片上面；其特征在于，所述的蛋白检测指标还包括心磷脂抗原(CardiolipinAntigen，CAg)。2.如权利要求1所述的女性不孕不育检测蛋白芯片，其特征在于，所述的基片是塑料、尼龙膜或硝酸纤维素膜。3.如权利要求1或2所述的女性不孕不育检测蛋白芯片，其特征在于，所述的对照指标包括1个阳性对照和1个阴性对照；阳性对照为兔IgG抗体，阴性对照为抗原点样所用的稀释液。4.如权利要求3所述的女性不孕不育检测蛋白芯片，其特征在于，所述的涂层上每个检测指标有2-10个重复，对照指标有1-5个重复。5.一种女性不孕不育检测蛋白芯片试剂盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：穆海东，汪宁梅，穆宇豪，刘纲，顾蓉，
申请(专利权)人：上海裕隆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]