一种红斑狼疮检测蛋白芯片及其试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种红斑狼疮检测蛋白芯片及其试剂盒，该芯片包括基 片和阵列式分布的蛋白标志物与对照的点涂层，所述的标志物与对照的点涂层 是指在基片上均匀分布的，点阵于基片上的dsDNA、ssDNA、Histon、SS-A(Ro60)、 SS-B(La)、Sm和RNP/Sm七个抗原标志物及阳性对照、阴性对照。本实用新型专利技术 提供的试剂盒方便实用，涉及的检测指标全面且恰当，应用反应条件一致，可 以一次性检测多个指标，方便快捷，大大提高了检测的效率，降低了检测成本。 本实用新型专利技术可以适用于疑似红斑狼疮病患人群的辅助诊断。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及蛋白芯片疾病检测产品，具体地说，涉及一种红斑狼疮检测蛋白芯片及其试剂盒。技术背景系统性红斑狼疮(Systemic Lupus erythrematodes ，SLE)是一种多因素参与的可累及全身多系统、 多器官的自身免疫性疾病，伴有多种免疫学异常，严重时可以引起肾功能衰竭、感染、中枢神经系统损伤 而导致死亡。如果出现多系统的损害，诊断并不困难，但此时大多已是疾病的中晚期，患者已有重要器官 的受累，预后较差。在SLE的早期可能仅表现为一个或两个系统受累，容易误诊为其他疾病。因此，SLE 的早期诊断对改善其预后、防止重要器官受累尤为重要。目前应用最广的美国风湿病学会1982年修订的系统性红斑狼疫诊断标准中明确提出将狼疮细胞(LE) 阳性，抗双链DNA抗体(dsDNA)阳性，抗Sra抗体阳性，或梅毒血清试验假阳性作为SLE的免疫学诊断标 准。我国于1986年在中华医学会风湿病学专题会议上也规定LE细胞阳性，抗dsDNA抗体阳性，抗Sm抗 体阳性作为SLE的诊断标准之一。由于SLE早期的临床表现复杂，不易与其它疾病区分，因此越来越多的 研究显示红斑狼疮标志物检测成为SLE早期发现的重要工具之一，同时也可提示预后或监测病程，而且 血清SLE标志物联合检测可以提高SLE检测的敏感性和特异性。虽然对SLE的免疫学诊断标准中主要只明确规定了抗dsDNA抗体和抗Sm抗体这两项指标，而实际在 临床诊断过程中，往往是对整个抗核抗体(antinuclear antibodies: ANA)谱进行检测，医生也是通过 ANA的综合指标来判断病人所患的是何种疾病(抗dsDNA抗体属于ANA的一种，抗Sni抗体则为一种抗可提 取的核抗原抗体，同属ANA族抗体)。随着人们对SLE的了解日益加 深，近年国外对SLE标志物的检测己不仅仅局限于传统的ANA (包括ENA)检测，而是更加有针对性地进 行监测，同时也修正了以往的错误看法如曾经人们将抗SS-A(Ro)作为干燥综合症(Sjogren's syndrome, SS)的特异性标志，但近期的研究则发现抗SS-A(Ro)有两种不同的蛋白——52KDa Ro蛋白(Ro52)和60KDa Ro蛋白(Ro60)，两者可分别用于辨别SS和SLE。又如人们曾认为ssDNA虽然敏感性高，但在很多自身免 疫疾病中都有阳性，因此没有SLE特异性，不具有检测意义，从而将ss咖A排除于ANA检测项目之外。但 根据S. S. Badakere等人在印度的研究成果表明，抗ANA抗体阴性的SLE患者体内能够检出抗ssDNA阳性， 从而建议将ssDNA也列入SLE的检测项目之一 (/to"/ 〃c7ear力/ f/力^/7-/ e卵"ra 5y对棚ic Z〃/ws ￡ryt/7e鹏tosiAS _z'" /"Wa 7'fA /toti-ss/W4 y4/3"6o力'es， Rheumatology, Dec 1987; 26: 476 - 477.)。鉴于人们对SLE血清标志物理解的加深，医生在临床诊断过程中可选择使用这些更有效、更有针对性 的指标，来帮助他们判断病人所患的疾病。而目前国内市场上对SLE血清标志物的检测处于ANA和ENA广 谱检査水平，医院中比较主流的检测方式仍为自动化免疫分析仪和ELISA。自动化免疫分析仪虽然可以同 时检测多种ANA和ENA标志物，但检测结果中有很多指标并不是医生所需要参考的，浪费了时间和成本； 甚至还有个别指标是无法通过此种方式检测的。ELISA检测方式要么只能是对ANA和ENA的整体普査，无 法显示具体指标的检测值；要么进行有针对的单指标检测，但每次只能检测一种指标。若想通过ELISA方 法査看与SLE相关的所有标志物表达水平，必须进行多次检测，耗时巨大且需要病人提供大量的血清样本。 由此可见国内市场上的这些检测明显缺乏有效性和针对性，并且缺少专门针对这些最新研究成果迸行检测 的多指标蛋白检测产品。
技术实现思路
本技术要提供一种专门用于红斑狼疮检测，可以一次性进行多个相关指标检测，并且指标选择恰 当的多种蛋白标志物检测芯片，以及包含该芯片的试剂盒。本技术目的是这样实现的，专利技术人根据己报道的红斑狼疮标志物的临床应用情况以及中国红斑狼 疮的流行病学特点，选取dsDNA、 ss腿、Histon、 SS-A(Ro60)、 SS-B(La)、 Sm和RNP/Sm 7个标志物，与 阳性指标，阴性指标构成阵列式点样涂层，同时点阵于一张基片上，每个阵列可有多次重复。本发技术涉及的用于红斑狼疮检测蛋白芯片，由基片和阵列式分布于基片上的红斑狼疮抗原检测 指标以及对照检测指标涂层组成，所述的红斑狼疮抗原检测指标包括dsDNA、 ssDNA、 Histon、 SS-A(Ro60)、 SS-B(U)、 Sm和RNP/Sm共7个红斑狼疮标志物，以共价键盘或非共价键固定在基片上面。所述的基片可 以是玻璃片基，硝酸纤维素膜或尼龙膜。上述基片的一个优选例是醛基化玻片。上述的对照检测指标涂层包括阳性对照和阴性对照；阳性对照为兔IgG抗体，阴性对照为抗原点样所 用的稀释液。上述涂层上的每个阵列中的检测指标，每个有2-IO个重复，对照指标有l-5个重复。阵列的多少和 大小与待检样品的数目，基片大小，以及点样直径有关。上述检测指标与检测阵列的优选例是当检测指标点样直径为0. lmm时，点间距0.6nnn，阵列大小为 6mraX5nun,可在硝酸纤维素膜蛋白芯片上设置24个阵列。本技术还提供了包含上述红斑狼疮检测蛋白芯片的试剂盒，还包括标准品和质控品；标准品与质 控品为瓶装，用纸质模板固定于包装盒内。所述的试剂盒，还包括样本稀释液，酶标工作液，浓縮洗涤液，检测液；各液体为瓶装，与标准品和 质控品一起用纸质模板固定于包装盒内。各部分由纸质模具固定于一包装盒内，不限放置方式，检测时配 套使用。所述的标准品由5-10个不同浓度梯度的蛋白混合液组成，每个蛋白混合液装入一个容器，蛋白混合 液由7个SLE标志物的蛋白检测指标按不同浓度混合而成。标准品用于在每次标本检测结束后做标准曲线， 可以定量测定样品中的检测指标的蛋白浓度。所述的质控品由3-6个不同浓度的蛋白混合液组成，每个蛋白混合液装入一个容器，蛋白混合液由7 个SLE标志物的蛋白检测指标按不同浓度混合而成。质控品可以监测整个检测系统的CV值，保证每次检 测结果的有效性。所述的样本稀释液是一种蛋白稳定剂；可以是由3% BSA和0.05%防腐剂(Proclin 300)的磷酸盐 缓冲液(pH 7.4)配制而成；所述的酶标工作液由含有冊P标记的、所述的7个抗SLE标志物的相应'*+_抗体，以及检测抗体冊P-羊抗兔IgG的前述样本稀释液组成；所述的浓縮洗涤液是一种中性缓冲液；可以是磷酸盐缓冲液；所述的检测液指配套使用的两种试剂， 一种含有鲁米诺和化学发光增强剂，另一种含有过氧化氢。本技术提供的试剂盒成本低，使用方便，涉及的检测指标全面且恰当，应用反应条件一致，可以 一次性检测多个指标，方便快捷，大大提高了检测的效率，降低了检测成本。本技术可以适用于疑似 红斑狼疮病患人群的普査。可同时筛査的指标包括抗dsDNA、抗ssDNA、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种红斑狼疮检测蛋白芯片，其特征在于，由基片和阵列式分布于基片上的红斑狼疮抗原检测指标以及对照检测指标涂层组成，所述的抗原检测指标包括ｄｓＤＮＡ、ｓｓＤＮＡ、Ｈｉｓｔｏｎ、ＳＳ－Ａ（Ｒｏ６０）、ＳＳ－Ｂ（Ｌａ）、Ｓｍ和ＲＮＰ／Ｓｍ共７个标志物，以共价键或非共价键固定在基片上面。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：穆海东，汪宁梅，穆宇豪，刘纲，王通，
申请(专利权)人：穆海东，汪宁梅，穆宇豪，刘纲，王通，
类型：实用新型
国别省市：31