本发明专利技术涉及鉴定生物液体的蛋白质组以及其在确定母体／胎儿病症状态，包括来自胎儿的母体病症、染色体非整倍性、以及与胎儿生长和成熟有关的胎儿疾病中的用途。特别地，本发明专利技术涉及对人羊水（ＡＦ）和ＣＶＦ（ＣＶＦ）的全面的蛋白质组分析，以及将正常蛋白质组的特征性变化与各种病理性母体／胎儿状况相关，例如ＩＡＩ、过早阵痛、和／或染色体缺陷。本发明专利技术进一步涉及鉴定能被用于非侵入性诊断各种妊娠相关病症的生物标志物以及生物标志物的组，以及利用这样的生物标志物进行的诊断测定。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及鉴定生物液体的蛋白质组，及其在确定母体/胎儿病症状态，包括胎儿来源的母体病症、染色体非整倍性、以及与胎儿生长和成熟有关的胎儿疾病中的用途。特别地，本专利技术涉及对人羊水(amnioticfluid， AF) 和宫颈阴道液体(cervical vaginal fluid, CVF)的全面的蛋白质组分析，以及将 正常蛋白质组的特征性变化与各种病理性母体/胎儿状况相关联，例如IAI、 过早阵痛、和/或染色体缺陷。本专利技术进一步涉及鉴定能被用于非侵入性诊断标志物进行的诊断测定。相关领域的描述对蛋白质表达形式的大规模分析作为对目前DNA克隆和基因谱 分析方法的重要和必需的补充而出现(Pandey and Mann, Nature 405:837-46(2000))。 DNA序列信息在基于同源性方法推断一些结构上和潜在的蛋白质 修饰上是有用的，但是它不能提供通过翻译后修饰、蛋白酶解或区室化调节 蛋白质功能的信息。传统的基于凝胶的方法，例如一維和二维凝胶电泳对于小规模 蛋白质检测(<1,000个蛋白质)有用，但是这些需要大的样本量(Lilley KS, Razzaq A, Dupree P : Two-dimensional gel electrophoresis: recent advances in sample preparation, detection and quantitation. Curr Opin Chem Biol. 6(1):46- 50. 2002)。克服这一局限性的方法包括基质辅助的或表面增强的激光解吸附/电 离(matrix-assisted or surface-enhanced laser desorption/ionization， MALDI或SELDI)飞行时间质谱仪，其能够准确地生成显示样品中蛋白质质量的谱 (profile)。这些图形或谱可用于鉴定和监视各种疾病。第二个层次的鉴定来 自将肽作图与串联质谱分析法(tandem mass spectrometry)结合在一起，以从 肽片段生成氨基酸序列信息。这可例如通过将MALDI/SELDI或ESI与四极飞 行时间质谱(Qq-TOF MS)结合而达到。后者方法还可以用于定量特定的肽 (ICAT技术)。病理'^母#/^乂乙炎况的 ^*有多种病理性母体和胎儿状况能在妊娠期间发生并损害健康或 在有些情况下威胁母亲和/或胎儿或新生儿的生命，例如羊膜内感染 (intra-amniotic infection, IAI)、先兆子痫、早产和过早阵痛、和染色体非整 倍性。早期诊断这样的状况是很关键的，允许进行及时的治疗和介入。令人 遗憾的是，早期诊断对于大多数的这些状况而言是困难的，因为临床征象和 症状发生得晚，并且常常是非特异的和反复无常的。例如，IAI的临床症状 典型地包括母亲发烧和白细胞增多，但是这些症状常常出现较晚，并且既不 敏感也不特异。因此，Gravett et al., Am. J, Obstet. Gynecol. 171:1660-7(1994) 利用非人灵长类模型显示，在用B组链球菌进行实验性IAI后，在感染诱导的 过早阵痛发作的时间中只有50%出现发烧和白细胞增多，并且在实验性感染 后28至40小时后才出现。因此，为了避免延误诊断，批准使用了高怀疑指标 和适当运用辅助的实验室4全测。通常用来诊断IAI的临床标准包括母亲发烧 (>37.8。C)、以及以下中的两种或更多种指标母亲白细胞增多(^15,000/mm3)、 母亲或胎儿心搏过速、子宫触痛、羊水臭味。由于临床特征的不一致性，也已经使用其它辅助性实验室诊断来 帮助诊断IAI。这些包括测量母体C-反应蛋白、直接检查羊水白细胞或用 革兰氏染色检查细菌、羊水培养、测量羊水葡萄糖浓度、4企测羊水白细胞酯 酶、通过气液色谱法4企测细菌的有一几酸、测量各种羊水或阴道细胞因子(例 如白细胞介素2、 4、 6、粒细胞集落刺激因子、肺瘤坏死因子-a)、基质金属 蛋白酶-9、乳铁蛋白(lactoferrin)、和通过超声波探测术评定胎儿活力(生物物 理学语)。细胞因子或其它生物化学因子的测量是昂贵的，通常在临床上不 能得到，主要是研究工具。此外，这些试验的检测效率并不总是比更容易利 用的传统检测(例如羊水革兰氏染色和培养，羊水葡萄糖浓度、和检测羊水白细胞酯酶)更高。这些检测的效率先前已经被广泛评论。(Ohlsson,A. andWang, E.: An analysis of antenatal tests to detect infection at preterm rupture of the membranes. American Journal of Obstetrics and Gynecology 162:809， 1990》虽然所有这些都具有一定程度的敏感性、特异性和预测价值，没有一种能敏 感或特异到能在IAI诊断中不依赖临床特征而被使用的程度。因此，非常需要新的方法，来早期和精确诊断IAI及其他病理性母 体/胎儿状况，特别是过早阵痛和早产。特别需要开发新的、有效和可靠的非侵入性方法，来诊断染色体 非整倍性。目前，确诊染色体非整倍性需要在进行母体血清筛选和超声后进 行怀孕中期遗传学羊膜穿刺术。这是侵入性过程，与0.5%的妊娠丧失风险有 关。此外，羊水细胞的染色体分析是劳动强度大和耗时的过程，耗时2周。 因此需要可靠的检测法来改善从母体血清或其它生物液体检测染色体非整 倍性、降低母体筛选令人无法接受的高假阳性率、和提高羊膜穿刺术后羊水 诊断的速度和效率。用超声波探测术或传统的母体血清筛选可能全然遗漏其 它病理性非整倍体状况，例如Klinefelter综合症和Tumer综合症。本专利技术提供非侵入的和敏感的方法，用于通过生物液体的蛋白质 组分析早期诊断、预后、和监视病理性胎儿/母体状况。本专利技术进一步提供生物液体(例如羊水和母体血清)的蛋白质组 谱，使得能诊断、预后、和监视各种病理性胎儿/母体状况、包括但不限于 IAI(IAI)、染色体非整倍性、和与胎儿生长和成熟有关的胎儿疾病。特别地， 本专利技术提供IAI和染色体非整倍性的正常和病理性蛋白质组语。正常蛋白质 组i普的确定是非常重要的，因为它能够排除可怀疑的胎儿/母体状况(负诊 断)，从而无需患者接受不必要和可能危险的治疗或介入。本专利技术进一步提供IAI和染色体非整倍性存在和状态的特异生物 标志物，当这样的病理情况存在时，该生物标记物在生物液体例如羊水或母 体血清中被有区别地表达。在一方面，本专利技术涉及确定母体或胎儿状况状态的方法，包括比 较从哺乳动物受试者获得的生物液体检测样品的蛋白质组语与正常样品的专利技术概述蛋白质组谱，或与包含至少一种表征这种状况的独特表达信号的参比蛋白质 组谱进行比较。在本方法的具体实施方式中，所述哺乳动物受试者是怀孕的雌性 生物，优选灵长类或人。在另一具体实施方式中，所述母体状况选自由子宫内感染、先兆 子痫和过早阵痛组成的组。在进一步的具体实施方式中，所述胎儿状况选自由染色体非整倍 性、先天畸形、胎龄和胎儿成熟度组成的组，其中染色体非整倍性可例如是 唐氏综合症、13三体型、18本文档来自技高网...
【技术保护点】
在怀孕雌性哺乳动物受试者中确定子宫内感染的存在的方法，包含： （ａ）检测两种或更多种选自下组的蛋白质在来自该受试者的ＣＶＦ样品中的丰度相对于正常宫颈液体中或已知指示子宫内感染的宫颈液体中的丰度：触珠蛋白前体（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ登录号 Ｐ００７３８）、α－１－酸性糖蛋白（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ登录号Ｐ０２７６３）、表皮型脂肪酸结合蛋白（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ登录号Ｑ０１４６９）和胰岛素样生长因子结合蛋白（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ登录号Ｐ０８８３３）；和 （ｂ）当受试者ＣＶＦ 样品中的丰度与所述正常宫颈液体中的丰度相比有统计学显著差异，或者与所述已知指示子宫内感染的宫颈液体的丰度相比无统计学显著差异，则得出存在子宫内感染的结论。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗恩罗森菲尔德，斯里尼瓦萨纳加拉，迈克格雷维特，
申请(专利权)人：普罗特奥格尼克斯公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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