粘膜脑膜炎球菌疫苗制造技术

本发明专利技术提供了用于粘膜给药的免疫原性的组合物，包含来自脑膜炎奈瑟氏球菌（Ｎ．Ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清组Ａ、Ｃ、Ｗ１３５和Ｙ中至少两种荚膜糖。本发明专利技术组合物中的荚膜糖优选结合到载体蛋白和／或寡糖。结合的寡糖抗原特别优选。本发明专利技术还提供免疫圆形组合物，其包含（ａ）一种来自脑膜炎奈瑟氏球菌血清组Ｃ的荚膜糖，和（ｂ）一种脱乙酰壳多糖佐剂。所述组合物优选包含（ｃ）一种或多种其他抗原和／或（ｄ）一种或多种其他佐剂。所述组合物特别适于粘膜给药，包括鼻内给药。使用脱乙酰壳多糖和／或解毒的ＡＤＰ－核糖基化毒素佐剂增强了抗脑膜炎球菌的粘膜免疫应答，并可转变应答的Ｔｈ１／Ｔｈ２偏倚。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于疫苗领域，尤其是抗脑膜炎球菌感染和疾病的疫苗。
技术介绍
脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitides)是一种革兰氏阴性的人病原体如参考文献1的第28章，它能引起细菌性脑膜炎。尽管明显区分脑膜炎球菌的一个特征是存在多糖荚膜，所述多糖荚膜存在于所有的致病脑膜炎球菌中，但是它与淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrhoeae)密切相关。基于生物的荚膜多糖，已经鉴定了脑膜炎奈瑟氏球菌的12个血清组(A，B，C，H，I，K，L，29E，W135，X，Y和Z)。A组是在撒哈拉沙漠以南的非洲最常见的流行疾病病因。血清组B和C引起的病例绝大部分发生在发达国家，其余一些病例是由血清组W135和Y引起的。除用作分类之外，荚膜多糖已经用于接种疫苗。一种可注射的来自血清组A、C、Y和W135的荚膜多糖的四价疫苗已经知道很多年2，3，并且已经被许可用于人类。虽然在青少年和成人中都是有效的，但其引起差的免疫应答和短期的保护性，并且不能用于婴儿如4。此疫苗中的多糖是非结合的，并且以1∶1∶1∶1的重量比例存在5。MENCEVAX ACWYTM和MENOMUNETM都包含50μg每一种纯化的多糖，从它们的冻干形式进行重建。结合的血清组C寡糖已经批准用于人类如MenjugateTM；参考文献6。然而，仍然需要对抗血清组A、W135和Y的结合疫苗以及它们的制造方法进行改进。所述需要被分为产品、方法和用途，公开在参考文献8中，但是，仍有进一步变更和改进的余地，特别是在给药和制剂方面。本专利技术公布的内容本专利技术提供了一种免疫原性的组合物，包含(a)一种来自脑膜炎奈瑟氏球菌(N.Meningitidis)的血清组C的荚膜糖抗原，和(b)一种脱乙酰壳多糖佐剂。所述组合物优选包含(c)一种或多种其他抗原和/或(d)一种或多种其他佐剂。本专利技术还提供了一种用于粘膜给药的免疫原性的组合物，包含来自脑膜炎奈瑟氏球菌血清组A、C、W135和Y中至少两种的荚膜糖。优选的，本专利技术的组合物中的荚膜糖结合到载体蛋白和/或是寡糖。结合的寡糖抗原(附图说明图1)是特别优选的。来自脑膜炎球菌血清组C的荚膜糖抗原脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组C的荚膜糖已经被广泛地用作一种抗原。例如，MenjugateTM的活性组分是一种荚膜多糖的寡糖片断，结合到CRM197载体蛋白。当本专利技术的组合物包含一种来自脑膜炎奈瑟氏球菌血清组C的荚膜糖抗原时，优选使用一种荚膜多糖的寡糖片断和/或将糖抗原结合到载体蛋白。特别优选的MenC糖抗原公开在参考文献6和9中。下文将给出寡糖生成和结合的进一步细节。糖类混合物本专利技术的组合物可以包含来自脑膜炎奈瑟氏球菌血清组A、C、W135和Y中至少两种(即2，3或4)的荚膜糖。来自一种以上脑膜炎奈瑟氏球菌血清组的糖类混合物是优选的，如包含来自血清组A+C、A+W135、A+Y、C+W135、C+Y、W135+Y、A+C+W135、A+C+Y、C+W135+Y、A+C+W135+Y等糖类的组合物。优选的，单个糖抗原的保护性效果没有因充分组合而被去除，尽管实际的免疫原性(如ELISA效价)可能会降低。优选的组合物包含来自血清组C和Y的糖。其他优选的组合物包含来自血清组C、W135和Y的糖。当一种混合物包含来自血清组A和C的荚膜糖时，MenA糖∶MenC糖的比例(w/w)可大于1(如2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、10∶1或更高)。当一种混合物包含来自血清组Y的荚膜糖以及血清组C和W135之一或两者时，MenY糖∶MenW135糖的比例(w/w)可大于1(如2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、10∶1或更高)；和/或MenY糖∶MenC糖的比例(w/w)可小于1(如1∶2、1∶3、1∶4、1∶5或更低)。优选的来自血清组A∶C∶W135∶Y的糖的比例(w/w)为∶1∶1∶1∶1；1∶1∶1∶2；2∶1∶1∶1；4∶1∶1∶1；8∶4∶2∶1；4∶2∶1∶2；8∶4∶1∶2；4∶2∶2∶1；2∶2∶1∶1；4∶4∶2∶1；2∶2∶1∶2；4∶4∶1∶2；和2∶2∶2∶1。荚膜多糖的纯化脑膜炎球菌荚膜多糖典型的制备过程包括多糖沉淀(如使用阳离子洗涤剂)、乙醇分馏、冷苯酚抽提(去除蛋白)和超离心(去除LPS)步骤如参考文献10。然而，更优选的制备过程8包括在多糖沉淀后，使用低级醇溶解沉淀的多糖。沉淀作用可以使用一种阳离子洗涤剂如四丁基铵盐和十六烷基三甲基铵盐(如溴化盐)，或海美溴铵和十四烷基三甲基铵盐。十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)是特别优选的11。沉淀物质的溶解作用可是使用低级醇如甲醇、丙-1-醇、丙-2-醇、丁-1-醇、丁-2-醇、2-甲基-丙-1-醇、2-甲基-丙-2-醇、二醇等。但是乙醇特别适用于溶解CTAB-多糖复合物。乙醇优选加入到沉淀的多糖，在50％和95％之间产生最终乙醇浓度(基于乙醇和水的总含量)。在重新溶解后，可进一步处理多糖以去除污染物。在即使较少污染也不接受的情况下(如用于人疫苗生产)，这是特别重要的。一般这将包含一步或多步的过滤，如深层过滤，可使用活性炭过滤，按大小进行过滤和/或超滤。一旦过滤去除污染物后，所述多糖可沉淀以用于进一步处理和/或加工。这可通过阳离子交换方便地实现(如通过加入钙盐或钠盐)。所述多糖可以是经过化学修饰的。例如，其可进行修饰，用阻滞基取代一个或多个羟基基团。这对于血清组A特别有用12。寡糖荚膜糖通常呈寡糖的形式。这可通过纯化的荚膜多糖的断裂来方便地形成(如通过在温和的酸中水解，或通过加热)，通常接着是纯化所需大小的片断。多糖的断裂优选使寡糖的最终平均聚合度(DP)低于30(如在10和20之间，优选血清组A约为10；血清组W135和Y在15和25之间，优选约15至20；血清组C在12和22之间)。DP可以通过离子交换层析或比色测量来方便地测量13。如果进行水解，水解产物通常要进行分级，以去除长度短的寡糖。这可通过多种方法获得，如超滤后进行离子交换层析。聚合度低于或等于约6的寡糖优选从血清组A中去除，聚合度低于4的寡糖优选从血清组W135和Y中去除。共价结合本专利技术的组合物中的荚膜糖通常被结合到载体蛋白。通常，所述结合增强糖的免疫原性，由于它们被从T-非依赖的抗原转换到了T-依赖的抗原，因而可引发免疫记忆。所述结合对于儿科疫苗是特别有用的如参考文献14，并且是一种众所周知的技术如参见参考文献15-23等。优选的载体蛋白是细菌毒素或类毒素，如白喉或破伤风类毒素。CRM197白喉类毒素24，25，26是特别优选的。其他合适的载体蛋白包括脑膜炎奈瑟氏球菌外膜蛋白27、合成肽28，29、热休克蛋白30，31、百日咳蛋白32，33、细胞因子34、淋巴因子34、激素34、生长因子34、包含来自不同病原体衍生抗原的多重人CD4+T细胞表位的人工蛋白35、来自流感嗜血杆菌(H.influenzae)的蛋白D36、来自艰难梭菌(C.Difficile)的毒素A或B37等。在本专利技术的一种组合物中，可能使用多于一种的载体蛋白。因而不同的载体蛋白可用于不同的血清组如血清组A糖可结合到CRM197，而血清组C糖可结合到破伤风类毒素。也可能对一种特别的糖抗原使用多于一种载体蛋白，如血清组A糖可分为两组，一些结合到CRM19本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于粘膜给药的免疫原性组合物，其包含来自脑膜炎奈瑟氏球菌血清组Ａ、Ｃ、Ｗ１３５和Ｙ中至少两种的荚膜糖。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：G德尔古迪斯，B博德内尔，
申请(专利权)人：启龙有限公司，莱顿大学，
类型：发明
国别省市：IT[意大利]