多价脑膜炎球菌制剂盒、疫苗制剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种多价脑膜炎球菌产品，包括冻干组分和液体组分，其中，冻干组分和液体组分分别包括A，C，Y或W135群脑膜炎球菌多糖中的1种、2种或3种，且相同的脑膜炎球菌多糖不同时存在于冻干组分和液体组分中，在临床使用时，通过将液体组分和冻干组分相混合得到多价脑膜炎球菌疫苗制剂。本发明专利技术多价脑膜炎球菌产品可稳定维持多糖抗原活性，且易于对制剂中有效抗原组分进行检测，便于进行制剂质量控制；此外，制备工艺简单，通过对多糖抗原的冻干工艺及溶解条件进行优化，得到能够稳定保存、抗原活性高的多价脑膜炎球菌产品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及多价疫苗
，特别涉及一种可稳定维持多价脑膜炎球菌疫苗抗 原活性的组合制剂及制备方法。
技术介绍
脑膜炎球菌（Meningococcus)，又称为脑膜炎奈瑟氏球菌，为流行性脑脊髓膜炎 (简称流脑）的病原菌。根据脑膜炎球菌荚膜多糖的抗原不同，通过血凝试验，将脑膜炎球 菌分为A、B、C、D、X、Y、29E、W135、H、I、K群等十多个血清型。常见的流行株主要分布于A 群、C群、W135群以及Y群。 预防接种是控制流脑最经济有效的措施，我国从1980年代开始广泛使用A群流脑 多糖疫苗，2007年更将A群和A+C群流脑多糖疫苗纳入国家免疫规划，多年临床经验证明， 疫苗可有效的防止感染，极大降低致病率。目前，已上市或进入临床阶段的脑膜炎球菌疫苗 包括单价疫苗如A群脑膜炎球菌多糖疫苗和C群脑膜炎球菌多糖-蛋白结合疫苗等，以及 多价疫苗（或组合疫苗）如A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗、A群C群脑膜炎球菌多糖-蛋 白结合疫苗、ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗和ACYW135群脑膜炎球菌多糖-蛋白结合疫 苗等。 其中，多价疫苗由于含有一种以上病原生物的抗原，相比较单价疫苗具有更广的 预防谱，临床优势明显。然而，多价疫苗由于不同有效组分（抗原组分）之间物理和生化性 质的不相容性以及免疫干扰性等原因，导致其制造较为困难，且疫苗的稳定性较难保证；此 外，多价疫苗质量控制的复杂程度远高于单价疫苗。 现有技术中多价流脑疫苗制剂主要包括液体制剂、冻干制剂、冻干和液体制剂组 合。然而，这些制剂虽满足疫苗申报的相关标准，经临床验证不影响产品的免疫原性和稳定 性，但是疫苗生产工艺复杂，且不易于成品中多组分抗原含量的分析和质量控制。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种多价脑膜炎球菌疫苗制剂，该多价脑膜炎球菌疫苗 制剂可稳定维持制剂中抗原活性，且易于对制剂中有效抗原组分活性进行检测。 本专利技术的另一个目的是提供一种多价脑膜炎球菌疫苗制剂的制备工艺，其工艺简 单，且易于制剂中有效抗原组分活性的测定，便于流脑结合疫苗成品中抗原组分的质控。 为了实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案： 本专利技术提供一种多价脑膜炎球菌试剂盒，包括冻干组分和液体组分，所述冻干组 分和液体组分分别包括A，C，Y或W135群脑膜炎球菌多糖中的1种、2种或3种，且相同的 脑膜炎球菌多糖不同时存在于冻干组分和液体组分中。 本专利技术还提供一种多价脑膜炎球菌疫苗制剂，包括冻干组分和液体组分，所述冻 干组分和液体组分分别包括A，C，Y或W135群脑膜炎球菌多糖中的1种、2种或3种，且相 同的脑膜炎球菌多糖不同时存在于冻干组分和液体组分中；通过将液体组分和冻干组分相 混合得到多价脑膜炎球菌疫苗制剂。 本专利技术还提供一种多价脑膜炎球菌疫苗制剂的制备方法，该方法包括将冻干组分 和液体组分相混合，所述冻干组分和液体组分分别包括A，C，Y或W135群脑膜炎球菌多糖中 的1种、2种或3种，且相同的脑膜炎球菌多糖不同时存在于冻干组分和液体组分中。 优选的，本专利技术试剂盒/疫苗制剂可为2、3、4价脑膜炎球菌试剂盒/制剂；所述 冻干组分包括A、C或AC群脑膜炎球菌多糖；所述液体组分包括血清群Y、W135、YW135或 AYW135群脑膜炎球菌多糖。 在本专利技术中，A群脑膜炎球菌多糖的功能团为0-乙酰基和磷，C群脑膜炎球菌多 糖的官能团为〇-乙酰基和唾液酸，W群脑膜炎球菌多糖的官能团为半乳糖和唾液酸，Y群 糖的官能团为葡萄糖和唾液酸；本专利技术所提供的多价脑膜炎球菌疫苗制剂的优势之一是可 以根据官能团来测定各多糖的含量，从而获取各自抗原的含量，进行质量监控。本专利技术按照 "官能团互不影响含量测定的原则"将脑膜炎球菌多糖以冻干和液体的形式进行组合得到 多价脑膜炎球菌试剂盒，能够方便快捷的对试剂盒中各有效抗原成分进行含量测定。例如， 本专利技术多价脑膜炎球菌试剂盒中冻干组分和液体组分的组合可为（"+"前后分别代表冻干 组分和液体组分）：AC+YW135 ;AC+W135 ;AC+Y;C+AYW135 ;C+YW135 ;C+W135 ;C+Y;A+YW135 ; A+W135 ;A+Y等。更优选的，本专利技术试剂盒/疫苗制剂为4价脑膜炎球菌试剂盒/制剂，所述冻干组 分为AC群脑膜炎球菌多糖，所述液体组分为WY135群脑膜炎球菌多糖；或所述冻干组分为 C群脑膜炎球菌多糖，所述液体组分为AYW135群脑膜炎球菌多糖。当选择AC群脑膜炎球 菌多糖为冻干组分，每种抗原含量的检测可以通过磷含量和唾液酸含量的测定实现，选择 YW135群脑膜炎球菌多糖为液体组分，有效抗原组分可以通过测定半乳糖和葡萄糖实现。其 中，磷含量、唾液酸含量、半乳糖和葡糖糖含量的测定可按照《中国药典》(2010)规定的方法 进行测定。此处给出的实施方式仅为进行示意性说明本专利技术。 在本专利技术中，所述脑膜炎球菌多糖以偶联或未偶联在蛋白载体上的形式存在。即 所述脑膜炎球菌多糖以独立的形式存在，或偶联在蛋白载体上以结合的形式存在。优选的， 所述脑膜炎球菌多糖以偶联在蛋白载体上的形式存在。 优选的，所述的蛋白载体包括突变无毒白喉毒素（CRM197)、白喉类毒素（DT)和/ 或破伤风类毒素（TT)。当冻干组分包括一种以上脑膜炎球菌多糖时，各偶联物可采用相同 的蛋白载体（例如，当存在两种脑膜炎球菌多糖时，可分别偶联与CRM197上，然后组合）或 不同的载体蛋白（例如，一种脑膜炎球菌多糖偶联在CRM197上，另一种偶联在TT上）。其中，脑膜炎球菌多糖（例如A、C、Y和W135群脑膜炎球菌多糖及脑膜炎球菌多 糖蛋白偶联物）的制造方法是本领域技术人员所公知的技术，本领域技术人员可通过任何 已知的现有方法进行制备，例如独立的脑膜炎球菌多糖采用相应脑膜炎球菌菌种经过发酵 培养生产出A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖，其纯化步骤可以为通用的常规步骤（例如超 滤、色谱、透析等方法）。与蛋白载体偶联的多糖，例如通过合适的偶联反应（采用活性酯、 巯基、碳二亚胺、酰肼、降冰片烷、对硝基苯甲酸、N-羟基琥珀酰亚胺等）进行，或者采用各 种现有的等同的方法实现偶联过程。此外，本领域技术人员也可采用市售产品得到与蛋白 载体偶联或未偶联的脑膜炎球菌多糖。 优选的，所述冻干组分还可包括保护剂，所述保护剂包括乳糖、蔗糖、海藻糖、甘露 醇中的一种或多种，例如乳糖/蔗糖混合物、蔗糖/甘露醇混合物等。更优选的，所述保护 剂为低浓度（以水为溶剂浓度为10~l〇〇mg/mL)蔗糖/甘露醇的混合物；更优选的，甘露 醇的含量为每剂不高于l〇mg，例如5-10mg，优选为10mg ;鹿糖的含量为每剂不高于5mg，例 如2_5mg，优选为5mg。 优选的，所述冻干组分通过如下步骤制备：取经纯化的脑膜炎球菌多糖和/或保 护剂，在温度为-45 ± 5°C下预冻120~300分钟；抽真空，保持真空度0. 2 ± 0. 02mBar，在温 度为-35 ±5°C下真空干燥720~960分钟；升温至35 ±5°C，普通干燥300~600分钟。 更优选的，所述冻干组分通过如下步骤制备：取脑膜炎球菌多糖和/或保护剂，在 温度为_45°C下预冻240~300分钟；抽真空，保持真空度0. 2±0. 02本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多价脑膜炎球菌试剂盒，包括冻干组分和液体组分，所述冻干组分和液体组分分别包括A，C，Y或W135群脑膜炎球菌多糖中的1种、2种或3种，且相同的脑膜炎球菌多糖不同时存在于冻干组分和液体组分中，所述脑膜炎球菌多糖以偶联或未偶联在蛋白载体上的形式存在。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李军强，司伟雪，邓捷，朱涛，邵忠琦，宇学锋，毛慧华，
申请(专利权)人：天津康希诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12