本发明专利技术提供一种ABC群脑膜炎球菌联合疫苗，其由A、C群脑膜炎球菌荚膜多糖分别与B群血清型4型(CMCC29356)脑膜炎球菌外膜蛋白囊(OMV)共价结合的多糖-蛋白偶联物，以及B群ST-4821基因型(xrsw341215)脑膜炎球菌外膜蛋白囊(OMV)组成。该疫苗可同时预防A、B、C群脑膜炎球菌侵袭性疾病，尤其针对2岁以下流脑高危人群预防，具有更好的保护效果，并且针对自然界A、B、C群脑膜炎球菌侵袭具有更好的特异性，更好的保护作用。
【技术实现步骤摘要】
ABC群脑膜炎球菌联合疫苗及其制备方法
本专利技术涉及多个血清群脑膜炎球菌疫苗组成的多价联合疫苗及其制备工艺，具体地说，涉及一种由ABC群脑膜炎球菌多糖偶联物和蛋白抗原成分组成的联合疫苗及其制备方法。
技术介绍
脑膜炎球菌感染所致的侵袭性败血症、脑膜炎、肺炎等疾病在世界各地均有发生，并引起很高的病死率和致残率，严重地威胁着人类健康。根据脑膜炎球菌荚膜多糖组成的差异，可将其分成13个血清群，且所有血清群均致病。其中尤以A、B、C群病例最多，占脑膜炎球菌病例的90%以上。目前，国内外已有多种不同种类和不同组合的脑膜炎球菌疫苗上市，其中荚膜多糖疫苗包括A群、C群、AC群和ACYW135群；多糖-蛋白结合疫苗包括A群、C群、AC群、ACYffl35 群。脑膜炎球菌疾病的高危人群主要是婴幼儿，在早期研发的各血清群多糖疫苗中其细菌荚膜多糖是一种T细胞非依赖性抗原，也是一种半抗原，因婴幼儿免疫系统发育尚不完善，故而不能有效识别荚膜多糖抗原而产生有效抗体，故而预防效果不理想。在Hib结合疫苗成功上市的启迪下，脑膜炎球菌多糖-蛋白结合疫苗也相继研发成功并上市，但目前国内外的各种组合的脑膜炎球菌结合疫苗，所用蛋白载体均为破伤风类毒素(TT)、白喉类毒素(DT)或白喉无毒变异株蛋白(CRM197)。这些蛋白载体虽也能刺激机体产生相应抗体，但这种抗体与脑膜炎球菌疾病的预防无关。并且尤其是TT和DT，是由各自细菌毒素经甲醛或戊二醛脱毒而来的，在百白破三联疫苗中为了维持其脱毒效果的稳定，避免出现毒性逆转现象，需要加入微量的甲醛或戊二醛。而在以TT或DT为蛋白载体的结合疫苗中是不加微量甲醛或戊二醛的，因而存在着蛋白载体毒性逆转的风险。并且破伤风毒素是高致敏原性物质，虽经脱毒后的破伤风类毒素(TT)也存在着导致过敏发生的高风险。这些因素，均构成了疫苗接种的安全隐患。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种针对ABC群脑膜炎球菌感染性疾病均有效的预防用疫苗，并能有效规避由TT或DT为蛋白载体而引起的毒性逆转、过敏反应等不安全风险。为了实现本专利技术目的，本专利技术的一种ABC群脑膜炎球菌联合疫苗，其由A、C群脑膜炎球菌荚膜多糖(CPS)分别与B群血清型4型脑膜炎球菌外膜蛋白囊(OMV)共价结合的多糖-蛋白偶联物，以及B群ST-4821基因型脑膜炎球菌外膜蛋白囊(OMV)组成。前述的联合疫苗，所述A群脑膜炎球菌荚膜多糖分离自菌株编号为CMCC29201的A群脑膜炎球菌，所述C群脑膜炎球菌荚膜多糖分离自菌株编号为CMCC29205的C群脑膜炎球菌，所述B群血清型4型脑膜炎球菌OMV分离自菌株编号为CMCC29356的B群脑膜炎球菌，所述B群ST-4821基因型脑膜炎球菌OMV分离自保藏编号为CGMCC N0.8982的B群脑膜炎球菌。前述的联合疫苗，其所用A、B、C群脑膜炎球菌菌株包括但不限于其他来源的不同血清型和基因型、克隆群的筛选株。前述的联合疫苗，所述疫苗中游离多糖的含量< 15%，游离蛋白的含量< 3%。前述的联合疫苗，用所述疫苗免疫动物后，血清抗体阳转率> 90%。前述的联合疫苗，每毫升疫苗中含有A群脑膜炎球菌荚膜多糖8-40 μ g，C群脑膜炎球菌荚膜多糖8-40 μ g，B群ST-4821基因型脑膜炎球菌0MV10-80 μ g。将疫苗分装于西林瓶或预充式注射器内密封保存。例如，每剂分装量为0.5ml。前述的联合疫苗，所述疫苗为液体剂型或冻干剂型。当所述疫苗为液体剂型时，任选含有铝佐剂，所述铝佐剂包括但不限于氢氧化铝、磷酸铝或硫酸铝等。当所述疫苗为冻干剂型时，任选含有赋形剂，所述赋形剂包括但不限于乳糖、蔗糖、明胶、山梨醇或人血白蛋白等。用于冻干剂型疫苗的稀释液时，其稀释液可以是磷酸盐缓冲生理盐水或生理盐水，也可以采用含铝佐剂的缓冲液或生理盐水，其中，每毫升稀释液中铝含量为0.05-0.80mg。本专利技术还提供所述联合疫苗的制备方法，包括以下步骤:1)A、C群脑膜炎球菌荚膜多糖的制备:分别向A、C群脑膜炎球菌液体培养上清液中加入十六烷基三甲基溴化铵沉淀多糖，离心获得荚膜多糖复合物，再向复合物中加入氯化钙或氯化钠解聚，然后用乙醇分步沉淀，获得粗制多糖，经脱氧胆酸钠处理，用CaptoAdhere和Capto DEAE凝胶层析，收集流穿液，再经G25凝胶脱盐，或用苯酚抽提，超滤，除菌过滤后即得纯化的荚膜多糖，置_20°C以下或冻干后保存。2) B群血清型4型及B群ST-4821基因型脑膜炎球菌OMV的制备:分别对B群血清型4型及B群ST-4821基因型脑膜炎球菌的液体培养液进行连续流离心，收获菌体，菌体经抽提分离出OMV复合物，经脱氧胆酸钠处理后，再依次经硫酸铵分步沉淀，乙醇分步沉淀，三氯醋酸沉淀，等电点沉淀，离子交换凝胶层析和疏水凝胶层析，G25凝胶层析，分子筛层析等，超滤，除菌过滤后即得纯化的0MV，置2-8°C避光保存。3)荚膜多糖-蛋白偶联物的制备:将步骤I)中制备的A、C群脑膜炎球菌荚膜多糖，分别经溴化氰活化后，在活化的糖链上连接已二酰肼，超滤去除游离的溴化氰、已二酰肼，然后加入步骤2)中制备的B群血清型4型脑膜炎球菌OMV作为蛋白载体，在ADH的桥联作用下分别形成A、C群脑膜炎球菌荚膜多糖-蛋白偶联物，经分子筛凝胶层析收集所述偶联物，除菌过滤后，置2-8 °C避光保存。4)疫苗配制:根据A群脑膜炎球菌荚膜多糖-蛋白偶联物的磷含量计算A群脑膜炎球菌荚膜多糖含量，根据C群群脑膜炎球菌荚膜多糖-蛋白偶联物的唾液酸含量计算C群脑膜炎球菌荚膜多糖含量，根据B群ST-4821基因型脑膜炎球菌OMV的含量，配制ABC群脑膜炎球菌联合疫苗毫升。在A、C群CPS与B群血清型4型OMV共价偶联物的制备中，A、C群CPS可分别经酸水解，形成分子量较均一的I X IO3-1 X IO6道尔顿的CPS，经高碘酸氧化，硼氢化合物作用而形成。 本专利技术还提供一株新分离的B群ST-4821基因型脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseriameningococcus) xrsw341215 (即B群ST-4821基因型脑膜炎球菌)，来源于国内B群流行性脑脊髓膜炎患者血液标本分离株，现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号CGMCC N0.8982，保藏日期2014年4月I日。本专利技术涉及ABC群脑膜炎球菌联合疫苗的研发、质量标准建立和规模化生产，用于适龄人群接种，预防疫苗型血清群脑膜炎球菌感染所致的侵袭性疾病。本疫苗由三种抗原成分经疫苗相融性研究等确定配伍，组合而成。三种抗原成分别为=A群脑膜炎球菌CPS与B群脑膜炎球菌(CMCC29356株)OMV共价结合的A群偶联物；C群脑膜炎球菌CPS与B群脑膜炎球菌(CMCC29356) OMV共价结合的C群偶联物；B群脑膜炎球菌(xrsw341215株，保藏编号CGMCC N0.8982) 0MV。疫苗分装于2ml西林瓶或预充式注射器中，每剂疫苗0.5ml，含分别结合到载体蛋白上的A群CPS:4-20 μ g, C群多糖4_20 μ g和xrsw341215株B群0MV5-40 μ g，铝佐剂0.025本文档来自技高网...
【技术保护点】
ABC群脑膜炎球菌联合疫苗，其特征在于，其由A、C群脑膜炎球菌荚膜多糖分别与B群血清型4型脑膜炎球菌OMV共价结合的多糖‑蛋白偶联物，以及B群ST‑4821基因型脑膜炎球菌OMV组成。
【技术特征摘要】
1.ABC群脑膜炎球菌联合疫苗，其特征在于，其由A、C群脑膜炎球菌荚膜多糖分别与B群血清型4型脑膜炎球菌OMV共价结合的多糖-蛋白偶联物，以及B群ST-4821基因型脑膜炎球菌OMV组成。2.根据权利要求1所述的联合疫苗，其特征在于，所述A群脑膜炎球菌荚膜多糖分离自菌株编号为CMCC29201的A群脑膜炎球菌，所述C群脑膜炎球菌荚膜多糖分离自菌株编号为CMCC29205的C群脑膜炎球菌，所述B群血清型4型脑膜炎球菌OMV分离自菌株编号为CMCC29356的B群脑膜炎球菌，所述B群ST-4821基因型脑膜炎球菌OMV分离自保藏编号为CGMCC N0.8982的B群脑膜炎球菌。3.根据权利要求1或2所述的联合疫苗，其特征在于，每毫升疫苗中含有A群脑膜炎球菌荚膜多糖8-40 yg, C群脑膜炎球菌荚膜多糖8-40 μ g，B群ST-4821基因型脑膜炎球菌0MV10-80y go4.根据权利要求1或2所述的联合疫苗，其特征在于，疫苗分装于西林瓶或预充式注射器内密封保存。5.根据权利要求1或2所述的联合疫苗，其特征在于，所述疫苗为液体剂型或冻干剂型。6.根据权利要求5所述的联合疫苗，其特征在于，所述疫苗为液体剂型，任选含有铝佐剂，所述铝佐剂包括 但不限于氢氧化铝、磷酸铝或硫酸铝。7.根据权利要求5所述的联合疫苗，其特征在于，所述疫苗为冻干剂型，任选含有赋形剂，所述赋形剂包括但不限于乳糖、蔗糖、明胶、山梨醇或人血白蛋白。8.根据权利要求7所述的联合疫苗，其特征在于，所述冻干剂型的疫苗，其稀释液是磷酸盐缓冲生理盐水、生理盐水，或含有铝佐剂的缓冲液或生理盐水，其中，每毫升稀释液中铝含量为0.05-0.80mg。9.权利要求1-8任一项所述联合疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)A、C群脑膜炎球菌荚膜多...
【专利技术属性】
技术研发人员：王建华，
申请(专利权)人：北京祥瑞生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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