含有共用运载体蛋白的联合脑膜炎球菌偶联物制造技术

在同时给予具有相同运载体蛋白的多种偶联物时，运载体诱导的表位抑制尤其受到关注。为了避免这种抑制，本发明专利技术最大程度减少了疫苗中未偶联运载体蛋白的量。本发明专利技术提供了用于免疫患者以抵御脑膜炎奈瑟球菌引起的疾病的组合物，其中（１）该组合物包含四种脑膜炎球菌血清组Ａ、Ｃ、Ｗ１３５和Ｙ中至少两种的偶联物，这至少两种偶联物具有共用运载体蛋白；和（２）该组合物包含的未偶联形式的共用运载体少于１０μｇ／ｍｌ。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)的疫苗。具体说，本专利技术涉及基于来自多种脑膜炎球菌血清组的偶联荚膜糖的疫苗。
技术介绍
根据生物的荚膜多糖，鉴定了12个脑膜炎奈瑟球菌血清组(A、B、C、H、I、K、L、29E、W135、X、Y和Z)。A组是亚撒哈拉非洲流行病中最常见的病原体。血清组B和C引起美国和大部分发达国家中的大多数病例。血清组W135和Y引起美国和大部分发达国家中的其余病例。血清组A+C的荚膜多糖的二价疫苗可以产品Mencevax ACTM购得，血清组A+C+Y+W135的糖的四价混合物可以产品Mencevax ACWYTM和MenomuneTM购得。虽然这些疫苗在青少年和成年人中有效，但它们诱导的免疫应答差，保护时间短，因为未偶联的多糖是T细胞非依赖性抗原，它诱导的免疫应答弱，并且不可被增强。为解决荚膜糖免疫差的问题，开发了将糖连接于运载体蛋白的偶联疫苗。对抗血清组C的偶联疫苗已批准用于人，包括MenjugateTM、MeningitecTM和NeisVac-CTM。也测试了血清组A+C的偶联物的混合物，已报道了血清组A+C+W135+Y的偶联物的混合物。虽然混合的偶联疫苗类似于混合的糖疫苗，但有一些关键差异。具体说，偶联物混合物中由于包括运载体蛋白而产生新的风险，特别是运载体诱导的表位抑制(或″运载体抑制″，如其通常的称谓)即用运载体蛋白免疫动物会阻止动物以后产生对抗该运载体上存在的抗原表位的免疫应答的现象。当具有相同运载体蛋白的多种偶联物同时给予时这个问题尤其受到关注。研究了单价脑膜炎球菌偶联物的运载体抑制，也有一些工作涉及混合的脑膜炎球菌偶联物。例如，参考文献14说明，百日咳博德特菌(Bordetella pertussis)菌毛应该用作运载体以避免多价偶联疫苗中的运载体抑制。参考文献15说明，应该在疫苗中采用一种以上类型的运载体蛋白来对付运载体抑制，优选流感嗜血杆菌(H.influenzae)蛋白D和/或破伤风类毒素(Tt)。本专利技术的一个目的是提供包含多种脑膜炎球菌血清组的偶联荚膜糖但避免运载体诱导的表位抑制风险的其它疫苗。
技术实现思路
与参考文献15中关于避免运载体抑制的方法，即采用一种以上类型的不同运载体蛋白相反，本专利技术对多种偶联物采用相同类型的运载体蛋白(′共用运载体′)，这简化了商业规模生产疫苗。然而，通过选择共用运载体，增加了运载体抑制的可能性。通常通过混合已经在单独的浓缩部分中制备的单个偶联物来制备疫苗，其中各块通常包括来自偶联反应的残留量未偶联运载体蛋白。未偶联运载体可产生运载体抑制，如果各浓缩部分包括x量的未偶联运载体，那么四价混合物将包括4x未偶联运载体。当仅在运载体存在特定阈值时(例如仅在未偶联运载体水平足够高，以饱和相关B细胞和/或T细胞，或仅在其足够高，以刺激相关抑制性T细胞)观察到运载体抑制，那么4x水平可导致抑制，即使各偶联物的水平低于阈值并且单独给予不会引起抑制。因此，与单价疫苗相比或与采用不同运载体蛋白的偶联物相比，为多价疫苗选择共用运载体显著提高了运载体抑制风险。为了补偿此提高的风险，本专利技术控制疫苗中未偶联运载体蛋白的量。虽然参考文献13-15中通过关注用于脑膜炎球菌糖的收入蛋白(earner protein)的特性解决运载体抑制的可能性，但本专利技术关注所用运载体的量，更具体说是未偶联形式中存在的量。通过最大程度减少疫苗中未偶联运载体蛋白的量，可避免运载体抑制，即使采用共用运载体。以前考虑了偶联疫苗中包括未偶联运载体蛋白，但在以前工作中未偶联收入蛋白(破伤风类毒素)的浓度约为10Lf/剂。采用0.5ml剂量(所用转换因子为1Lf＝3μg)，这些疫苗约含60μg/ml未偶联运载体蛋白。参考文献16未涉及避免运载体抑制。因此，本专利技术提供了用于免疫患者以抵御脑膜炎奈瑟球菌引起的疾病的组合物，该组合物包含下组中的至少两种(a)(i)血清组A脑膜炎奈瑟球菌的荚膜糖和(ii)运载体蛋白的偶联物；(b)(i)血清组C脑膜炎奈瑟球菌的荚膜糖和(ii)运载体蛋白的偶联物；(c)(i)血清组W135脑膜炎奈瑟球菌的荚膜糖和(ii)运载体蛋白的偶联物；(d)(i)血清组Y脑膜炎奈瑟球菌的荚膜糖和(ii)运载体蛋白的偶联物，其特征是(1)所述偶联物(a)、(b)、(c)和(d)中至少两种采用相同的运载体蛋白(′共用运载体′)，和(2)该组合物包含未偶联形式的共用运载体，其中所述未偶联共用运载体浓度小于10μg/ml。本专利技术也提供用于免疫患者以抵御脑膜炎奈瑟球菌引起的疾病的组合物的制备方法，该方法包括以下步骤(1)制备下组的至少两种(a)(i)血清组A脑膜炎奈瑟球菌的荚膜糖和(ii)运载体蛋白的偶联物；(b)(i)血清组C脑膜炎奈瑟球菌的荚膜糖和(ii)运载体蛋白的偶联物；(c)(i)血清组W135脑膜炎奈瑟球菌的荚膜糖和(ii)运载体蛋白的偶联物；(d)(i)血清组Y脑膜炎奈瑟球菌的荚膜糖和(ii)运载体蛋白的偶联物，其中所述偶联物(a)、(b)、(c)和(d)中至少两种采用相同的运载体蛋白(′共用运载体′)；和(2)混合(1)中制备的至少两种偶联物，以产生包含未偶联形式的共用运载体的组合物，其中所述未偶联共用运载体的浓度小于10μg/ml。该方法可包括测定未偶联共用运载体量的一个或多个步骤。可在混合前对单个偶联物进行所述测定和/或在混合后对混合的偶联物进行所述测定。可根据所述测定的结果拒绝或选择单个偶联物用以混合，可根据所述测定的结果简单地拒绝或选择最终组合物用以发布给医生。本专利技术也提供用于免疫患者以抵御脑膜炎奈瑟球菌引起的疾病的组合物的制备方法，该方法包括以下步骤(a)从A、C、W135和Y中选择n种不同的脑膜炎球菌血清组，其中n的值是2、3或4；(b)对于n种所选血清组中每个血清组，制备(i)该血清组的荚膜糖和(ii)运载体蛋白的偶联物，其中n种偶联物各自采用相同的运载体蛋白(′共用运载体′)；和(c)混合(b)中制备的n种偶联物，产生包含未偶联形式的共用运载体的组合物，其中所述未偶联共用运载体的浓度小于10μg/ml。n的值优选为4，以致于本专利技术能提供以下用于免疫患者以抵御脑膜炎奈瑟球菌引起的疾病的组合物的制备方法，该方法包括以下步骤(a)制备各脑膜炎球菌血清组A、C、W135和Y，(i)该血清组的荚膜糖和(ii)运载体蛋白的偶联物，其中四种偶联物各自采用相同的运载体蛋白；和(b)混合这些偶联物产生包括未偶联形式的共用运载体的组合物，其中所述未偶联共用运载体的浓度小于10μg/ml。同以前一样，此方法可包括在步骤(b)混合之前和/或之后测定未偶联共用运载体量的一个或多个步骤。偶联物用偶联提高糖的免疫原性，因为它能将其从T非依赖性抗原转化为T依赖性抗原，从而可以引发免疫记忆。偶联在儿科疫苗中尤其有用，并且是熟知技术。本专利技术组合物包含以下脑膜炎球菌偶联物的至少两种(即2、3或4种)(a)(i)血清组A脑膜炎奈瑟球菌的荚膜糖和(ii)运载体蛋白的偶联物；(b)(i)血清组C脑膜炎奈瑟球菌的荚膜糖和(ii)运载体蛋白的偶联物；(c)(i)血清组W135脑膜炎奈瑟球菌的荚膜糖和(ii)运载体蛋白的偶联物；(d)(i)血清组Y脑本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于免疫患者以抵御脑膜炎奈瑟球菌引起的疾病的组合物，该组合物包含下组中的至少两种：（ａ）（ｉ）脑膜炎奈瑟球菌血清组Ａ的荚膜糖和（ｉｉ）运载体蛋白的偶联物；（ｂ）（ｉ）脑膜炎奈瑟球菌血清组Ｃ的荚膜糖和（ｉｉ）运载体蛋白的偶联物；（ｃ）（ｉ）脑膜炎奈瑟球菌血清组Ｗ１３５的荚膜糖和（ｉｉ）运载体蛋白的偶联物；（ｄ）（ｉ）脑膜炎奈瑟球菌血清组Ｙ的荚膜糖和（ｉｉ）运载体蛋白的偶联物，其特征是（１）所述偶联物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）和（ｄ）中至少两种采用相同的运载体蛋白（′共用运载体′），和（２）该组合物包含未偶联形式的共用运载体，其中所述未偶联共用运载体浓度小于１０μｇ／ｍｌ。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：P科斯坦蒂诺，
申请(专利权)人：启龙有限公司，
类型：发明
国别省市：IT[意大利]