重组人白细胞介素12真核表达载体的构建及其应用制造技术

重组人白细胞介素１２真核表达载体的构建及其应用，它涉及重组人白细胞介素１２（ｒｈＩＬ－１２）表达载体的研制、稳定表达细胞系的筛选、其核酸疫苗基因佐剂功能和肿瘤基因治疗作用。采用１０个疏水的柔性氨基酸接头连接Ｐ４０、Ｐ３５获得融合基因构建ｒｈＩＬ－１２真核表达质粒（ｐＣＤＮＡ６－ＩＬ－１２）。将其转染ＣＨＯ细胞筛选出了稳定表达细胞系，并且表达产物具有良好的生物学活性。ｐＣＤＮＡ６－ＩＬ－１２与核酸疫苗共免疫可显著增强其免疫效果。直接在实验小鼠肿瘤模型瘤体内注射或用其对肿瘤细胞进行基因修饰后再植入均可发挥强大的抗肿瘤作用。经进一步完善后可进入临床试用阶段的研究。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及重组人白细胞介素12 ( rhIL-12)真核表达载体的研 制和应用。具体涉及该载体的构建、表达鉴定、生物学活性分析、 rfiIL-12在真核细胞中稳定表达细胞系的筛选、 一种核酸疫苗的基因 佐剂和肿瘤基因治疗制剂。
技术介绍
IL-12是一种由异源二聚体蛋白组成的细胞因子，编码IL-12 两个亚基(p35、 p40)的基因位于不同的染色体上，二者分别合 成后再通过亚基间二硫键结合成具有生物学活性的二聚体分子 (p70)。单独的亚基不能发挥其生物学作用。而且，p40易形成 同源二聚体，通过受体竞争机制抑制IL-12的活性。中国专利200410080518.7公开了一种纯化重组人白细胞介素12 的方法，涉及蛋白质纯化方法。本专利技术纯化重组人白细胞介素12的 方法，是将重组人白细胞介素12的细胞培养上清液进行阳离子交换 层析和阴离子交换层析；所述重组人白细胞介素12的细胞培养上清 液进行所述阳离子交换层析时，pH高于重组人白细胞介素12的等电 点；进行所述阴离子交换层析时，先用pH3.5-5.0的缓冲液洗脱除去 杂蛋白，接着洗脱收集目的物。但是这种方法生产rhIL-1本文档来自技高网...

【技术保护点】
重组人白细胞介素１２真核表达载体的构建及其应用，其特征在于ｐＣＤＮＡ６－ＩＬ－１２的构建过程：采用１０个疏水的柔性氨基酸接头连接的方案获取ｒＩＬ－１２　Ｐ４０、Ｐ３５融合基因，插入真核表达质粒（ｐｃＤＮＡ６／ｖ５－ｈｉｓｐ），构建重组ｒＩＬ－１２表达载体（ｐＣＤＮＡ６－ＩＬ－１２）；通过酶切、测序鉴定重组克隆。

【技术特征摘要】
1、重组人白细胞介素12真核表达载体的构建及其应用，其特征在于pCDNA6-IL-12的构建过程采用10个疏水的柔性氨基酸接头连接的方案获取rIL-12 P40、P35融合基因，插入真核表达质粒(pcDNA6/v5-hisp)，构建重组rIL-12表达载体(pCDNA6-IL-12)；通过酶切、测序鉴定重组克隆。2、 根据权利要求1所述的重组人白细胞介素12真核表达载体的 构建及其应用，其特征在于rh-IL-12体外生物学活性分析应用特 异性淋巴细胞增生实验、NK杀伤活性、细胞因子流式细胞(CFC)等 方法对rhIL-12进行体外生物学活性分析。3、 根据权利要求1所述的重组人白细胞介素12真核表达载体的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张文卿，
申请(专利权)人：张文卿，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]