一种鹅突变型OAZ1基因真核表达载体的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种鹅突变型OAZ1基因真核表达载体的构建方法。步骤为：应用定点突变技术，设计引物P3、P4和P5、P6，PCR扩增获得缺失掉+175位碱基的鹅突变型OAZ1基因；设计引物P7和P8，PCR扩增获得5'端含有kozak序列的鹅突变型OAZ1基因；酶切含有kozak序列的突变型OAZ1基因及pEGFP-N1骨架载体，连接酶切产物，转化至E. coli DH5α中，获得突变型OAZ1基因的真核表达载体。应用本发明专利技术可快速获得+175位碱基缺失的突变型OAZ1基因，并可构建突变型OAZ1基因的真核表达载体，使OAZ1表达不再受细胞内游离多胺调控而直接表达全长功能蛋白质。

【技术实现步骤摘要】
—种鹅突变型0AZ1基因真核表达载体的构建方法
本专利技术属于突变型OAZl真核表达载体的构建方法，其具体步骤包括OAZl基因的CDS区的获得；0AZ1基因+175位碱基的定点缺失以及突变型OAZl基因的pEGFP-Nl真核表达载体的构建。
技术介绍
多胺(主要包括腐胺、亚精胺和精胺)是一类带有两个或两个以上氨基的低分子脂肪族化合物，它在几乎所有的真核细胞生物体内都存在。在生理pH下，多胺呈高密度的阳性电荷，它们能与带有大量负电荷的DNA、RNA和蛋白质等生物大分子结合并发挥其调控作用。多胺可参与调控基因表达和翻译、细胞增殖、细胞信号转导、细胞膜稳定等生命活动过程，并且能够调节某些阳离子通道的活性。多胺被认为是一种生长素，细胞内多胺浓度降低可抑制细胞的增殖并使细胞停留在G1期；而细胞内多胺含量过多，也可使细胞过度增殖诱导癌变。所以，细胞中多胺的浓度受到机体的精密调控。鸟氨酸脱羧酶抗酶(ornithinedecarboxylase antizyme, 0AZ)能抑制多胺合成过程中的第一限速酶鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase, ODC)的活性,并能抑制本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鹅突变型OAZ1基因真核表达载体的构建方法，其特征在于，定点缺失鹅OAZ1基因CDS区+175位碱基以及用于定点突变的引物设计为：P3（TGGTGCTCCGATGTCCCTCACC）、P4（GGATCTTCCAGAGATTGAGCTCATGGTGAAATCCTCCCTGC）、P5（TGAGGGACATCGGAGCACCACCG）和P6（CTGCCGTTCGACGATTAAGCTTCTATTCTTCTTCTGATGTCTC）。

【技术特征摘要】
1.一种鹅突变型OAZl基因真核表达载体的构建方法，其特征在于，定点缺失鹅OAZl基因CDS区+175位碱基以及用于定点突变的引物设计为:P3(TGGTGCTCCGATGTCCCTCACC)、P4(GGATCTTCCAGAGATTGAGCTCATGGTGAAATCCTCCCTGC)、P5 (TGAGGGACATCGGAGCACCACCG)和 P6(CTGCCGTTCGACGATTAAGCTTCTATTCTTCTTCTGATGTCTC)。2.一种鹅突变型OAZl基因真核表达载体的构建方法，其特征在于，在OAZl基因CDS区前加入kozak (GCCGCCACC)序列以增强pEGFP-Nl-OAZl-mutation的翻译效率，去掉OAZl基因的终止密码子使OAZl全长功能蛋白质与荧光蛋白质GFP融合，为达到此目的其引物设计为:P7 (ATCGAGCTCGCCGCCACCATGGTGAAATCCTCCCT)和 P8 (GGAAGCTTTTCTTCTTCTGATGTCTCTCTCTCAAACG)。3.一种鹅突变型OAZl基因真核表达载体的构建方法，其特征在于，其步骤为: (1)设计引物Pl (TGCGGGGTGTTCAAGATGT)和 P2 (GAGGGAGAGGACCTGCAAAC)扩增鹅 OAZl基因编码区序列，连接至PMD19-T载体中，并转化到疋coli DH5a中，提取质粒，获得野生型OAZl基因编码区序列T载体质粒，命名为plasmid-OAZl-wild ； (2)设计用于OAZl基因⑶S区+175位碱基定点缺失的引物P3、P4和P5、P6，PCR扩增获得产物I和II，...

【专利技术属性】
技术研发人员：康波，姜冬梅，何珲，马容，白林，王迅，赵玲，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川;51