不对称菁类化合物、其制备方法及应用技术

本发明专利技术提供式Ⅰ所示的一类不对称菁类化合物，其中Ｘ、ｎ、Ｒ↓［１］、Ｒ↓［２］、Ｒ↓［３］、Ｒ↓［４］和Ｙ↑［－］如说明书中的定义。该类化合物最大吸收峰位置在６４０ｎｍ附近，且不随环境温度的变化而变化，与核酸结合后染料／核酸复合物荧光强度迅速增加，在流式细胞分析仪中作为核酸染色剂使用，光谱在近红外区可以有效降低背景荧光的干扰，提高检测的精度。同时，本发明专利技术提供的化合物可以作为血液中网织红细胞的染色剂使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及不对称菁类化合物及其用于生物样品染色的用途。
技术介绍
网织红细胞是骨髓中晚幼红细胞脱核后到完全成熟的红细胞之间的过渡型细胞，网织红细胞从骨髓释放到外周血后，随着其不断成熟，细胞内的RNA含量也逐渐减少，直至完全消失。因此，细胞内RNA的含量表示了网织红细胞的成熟程度。网织红细胞是血液学诊断中评估红细胞生成能力的基础性试验，是贫血诊断、分型和疗效检测的基础，能够确认骨髓的化疗和移植疗效，检测EPO(促红细胞生成素)的疗效等。 早期检测网织红细胞主要是采用手工法镜检，但存在调制试样步骤烦杂，人为影响因素较多，导致操作者间的变异达到25％～50％。随着流式细胞分析仪的发展，自动化的仪器提高了网织红细胞测定的准确度和精确度，同时提供了关于网织红细胞成熟度的可靠指标。荧光染料的开发是发展荧光分析技术的具有决定性作用的因素。 发展初期应用的染料包括新亚甲蓝(NMB)、亮甲苯蓝(BCB)、派诺宁Y、溴乙锭等。它们通过嵌入或静电吸引与核酸分子形成复合物，从而可以在显微镜下观察增强后的荧光。但是这些染料自身也可以形成染料复合物，不能明显区别于染料与核酸形成的复合物，造成高的荧光背景干扰。同时，这些染料的荧光量子效率较低，降低了荧光增强的程度，影响检测结果的准确性。 吖啶橙也应用在荧光分析中，可以和核酸形成复合物，使荧光增强。这类染料分子相互之间在能量传递的过程中可能会导致光淬灭，使得染料核酸复合物没有荧光发出，影响检测结果真实性。同时在流式细胞分析仪中，吖啶橙和塑料管路有较强的作用，会增加背景荧光强度。为了清除测试后残留的染料和保证测试结果的准确性，需要仪器进行长时间的管路清洗，这就降低了仪器的分析效率。 已有人提出了一类噻唑蓝染料用于检测核酸和血液中的网织红细胞。该类染料使用的激发波长在488nm，需要使用价格高昂的激光器做光源，增加了仪器的使用成本。同时，这类染料需要较长的孵育时间，才能和核酸较好的结合。 还公开了一种用于血液中网织红细胞染色的染料，它需要在35℃以上的反应条件下才能得到良好的检测结果，对仪器的使用条件提出了较高的要求。 目前使用的红色半导体激光器只有在环境温度10℃左右可以发出633nm波长的光，在工作过程中由于环境温度的逐渐升高其波长会随之变化。在仪器稳定运行过程中，环境温度会达到40℃，此时激光器的波长也会相应增加到640nm左右，而不能和荧光染料的最大吸收峰很好的匹配，降低了检测结果的准确性。在此基础上，如果为了消除温度对检测结果的影响，需要增加恒温装置，则大大增加了仪器的成本。 因此，需要开发新的适合用作荧光染料的化合物，该化合物优选具有以下性质无核酸时自身几乎没有荧光，与核酸形成复合物后荧光强度迅速增加并且光谱在近红外区，避免背景荧光的干扰；可以在640nm附近被激发且其波长在40℃可以保持稳定，与使用的半导体激光器工作波长相匹配；对RNA有一定的特异性结合。
技术实现思路
本专利技术的上述种种目的通过提供本专利技术化合物而得以实现。因此，本专利技术一方面提供了一类具有以下通式I结构的化合物 其中 n为1、2或3； X为C(CH3)2、O、S或Se； R1和R2各自独立选自H、卤素、C1-8烷基磺酸基，且R1和R2不同时为H； R3、R4各自独立选自C1-18烷基、C1-8烷基OR5；且R2为卤素时R3和R4不同时为烷基； R5为氢原子、酰基或者低级烷基； Y-为负离子。 本专利技术还一方面提供一种缀合物，所述缀合物包含上述式I化合物。 本专利技术另一个方面还提供用于生物样品染色的组合物，所述组合物包含上述式I化合物或其缀合物。 本专利技术再一方面还提供了本专利技术式I化合物或其缀合物在对生物样品进行染色中的用途。 本专利技术还一方面提供一种分析网织红细胞的方法，所述方法包括将血液样品用本专利技术化合物、其缀合物或其组合物染色，随后在流式细胞分析仪上进行分析，测试网织红细胞。 本专利技术再一方面提供一种分析网织红细胞的试剂盒，所述试剂盒包括本专利技术化合物、其缀合物或其组合物。 本专利技术的化合物对生物样品如核酸、有核红细胞、网织红细胞等具有良好的染色作用，其形成的复合物发射波长在近红外区，避免了生物自身的荧光背景干扰，有助于提高检测结果的精确度，同时可在流式细胞分析仪上用作各种生物样品的染色剂。 本专利技术的这些特征和优点以及其他特征和优点在参考以下附图和本专利技术的具体实施方式之后将变得显而易见。 附图说明 图1是Dye-1在不同环境温度下放置48小时后的吸收光谱。 图2是Dye-1与含不同浓度鲑鱼精DNA结合后在磷酸盐缓冲液(PBS)中的荧光发射光谱。 图3是Dye-1在PBS中与鲑鱼精DNA结合前后的荧光发射光谱。 图4是Dye-1与含不同浓度甲鱼肝RNA结合后在磷酸盐缓冲液(PBS)中的荧光发射光谱。 图5是Dye-1在PBS中与甲鱼肝RNA结合前后的荧光发射光谱。 图6是Dye-3与含不同浓度鲑鱼精DNA结合后在磷酸盐缓冲液(PBS)中的荧光发射光谱。 图7是Dye-3与含不同浓度甲鱼肝RNA结合后在磷酸盐缓冲液(PBS)中的荧光发射光谱。 图8是Dye-3在PBS中与鲑鱼精DNA结合前后的荧光发射光谱。 图9是Dye-3在PBS中与甲鱼肝RNA结合前后的荧光发射光谱。 图10是用Dye-1荧光染料作为网织红细胞测定试剂，测定血液的前方散射光强度及荧光强度时的散射图。 图11是用Dye-2荧光染料作为网织红细胞测定试剂，测定血液的前方散射光强度及荧光强度时的散射图。 图12是用Dye-3荧光染料作为网织红细胞测定试剂，测定血液的前方散射光强度及荧光强度时的散射图。 图13是用Dye-6荧光染料作为网织红细胞测定试剂，测定血液的前方散射光强度及荧光强度时的散射图。 具体实施例方式 定义 除另有说明外，本文中使用的术语具有以下含义。 本文中使用的术语“烷基”，无论是单独使用还是与其他基团结合使用，指包含1-18、优选1-12、更优选1-8、最优选1-6个碳原子的直链烷基和支链烷基。如提及单个烷基如“正丙基”，则只特指直链烷基，如提及单个支链烷基如“异丙基”，则只特指支链烷基。例如，“C1-6烷基”包括C1-4烷基、C1-3烷基、甲基、乙基、正丙基、异丙基和叔丁基。类似的规则也适用于本说明书中使用的其它基团。 本专利技术所用术语“低级烷基”具有本领域所使用的常规含义，通常指C1-6烷基。 本文中使用的术语“酰基”是指与基团-CO-结合的上述定义的“烷基”，其中所述“烷基”包含1-18、优选1-12、更优选1-8、最优选1-6个碳原子，例如甲酰基、乙酰基、丙酰基等。 本文中使用的术语“卤素”包括氟、氯、溴和碘。 本文中使用的术语“生物样品”包括但不限于核酸、血液中的有核红细胞、网织红细胞等。 本专利技术的化合物 本专利技术提供了一种具有以下通式I结构的化合物 其中 n为1、2或3； X为C(CH3)2、O、S或Se； R1和R2各自独立选自H、卤素、C1-18烷基磺酸基，且R1和R2不同时为H； R3、R4各自独立选自C1-8烷基、C1-18烷基OR5；且R2为卤素时R3和R4不同时为烷基； R5为氢原子、酰基或者本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有通式Ⅰ结构的化合物：　＊＊＊　Ⅰ　其中　ｎ为１、２或３；　Ｘ为Ｃ（ＣＨ↓［３］）↓［２］、Ｏ、Ｓ或Ｓｅ；　Ｒ↓［１］和Ｒ↓［２］各自独立选自Ｈ、卤素、Ｃ↓［１－１８］烷基磺酸基，且Ｒ↓［１］和Ｒ↓［２ ］不同时为Ｈ；　Ｒ↓［３］、Ｒ↓［４］各自独立选自Ｃ↓［１－１８］烷基、Ｃ↓［１－１８］烷基ＯＲ↓［５］；且Ｒ↓［２］为卤素时Ｒ↓［３］和Ｒ↓［４］不同时为烷基；　Ｒ↓［５］为氢原子、酰基或者低级烷基；　Ｙ↑［－］为负离子 。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邵建辉，
申请(专利权)人：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]