一种制备重组人PDCD5的方法技术

本发明专利技术公开了一种制备具有促进细胞凋亡活性的重组人ＰＤＣＤ５（ＰｒｏｇｒａｍｍｅｄＣｅｌｌ　Ｄｅａｔｈ　５）的方法。本方法包括重组人ＰＤＣＤ５基因工程菌发酵、工程菌破碎、目的蛋白粗提和层析分离。本发明专利技术通过调节ｐＨ沉淀部分杂蛋白进行粗提，再选用层析组合分离精制，与以往报道的方法相比，不仅简化了重组人ＰＤＣＤ５的纯化工艺，提高了产品纯度，而且可中试放大生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物制药领域，具体涉及一种制备具有促进细胞凋亡活性的重组人 PDCD5(programmed cell death 5)的方法。
技术介绍
PDCD5是北京大学医学部在国际上首先发现的新的程序性细胞死亡相关基因， 编码125个氨基酸的蛋白质。1999年在国际杂志发表论文时曾命名为TFAR19 (TF-1 cell apoptosis related gene 19)， 2002年国际人类基因命名委员会将其统一命 名为PDCD5。研究证明，PDCD5是一个新的抑癌基因，在多种肿瘤中表达下调，通 过结合组蛋白乙酰转移酶Tip60发挥促进肿瘤细胞凋亡的作用。动物实验证明重组 人PDCD5蛋白对肿瘤的的化疗具有明显的增敏效应，其本身未发现毒副作用。中国专利公开号CN1218833A公开的专利技术专利申请具 有细胞凋亡促进活性的 多肽，涉及PDCD5的制备，重组PDCD5为包涵体形式的原核融合表达，通过变性 溶解和稀释复性后，酶解释放出目的蛋白，再用阴离子交换柱DEAE分离纯化。中 国专利公开号CN101214371A公开的人重组蛋白PDCD5在制备肿瘤化疗增敏药中 的应用，重本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备重组人ＰＤＣＤ５的方法，该方法包括表达重组人ＰＤＣＤ５工程菌的高密度发酵、菌体破碎、重组人ＰＤＣＤ５粗提和层析分离，其特征在于：　（１）通过调节破碎前菌液的ｐＨ或菌体破碎液的ｐＨ，使杂蛋白沉淀；和　（２）通过层析分离组合　以简 化重组人ＰＤＣＤ５的纯化工艺和提高重组人ＰＤＣＤ５的纯度。

【技术特征摘要】
1、一种制备重组人PDCD5的方法，该方法包括表达重组人PDCD5工程菌的高密度发酵、菌体破碎、重组人PDCD5粗提和层析分离，其特征在于(1)通过调节破碎前菌液的pH或菌体破碎液的pH，使杂蛋白沉淀；和(2)通过层析分离组合以简化重组人PDCD5的纯化工艺和提高重组人PDCD5的纯度。2、 根据权利要求l的方法，其特征在于在菌体破碎前，调节菌液pH至1.5-5.0，优 选pH 1.5-4.0，首选pH2.0-3.0，沉淀部分杂蛋白。3、 根据权利要求1的方法，其特征在于在菌体破碎后，调节破碎液的pH至1.5-5.0， 优选pH 1.5-4.0，首选pH2.0-3.0，沉淀破碎液中的部分杂蛋白。4、 根据权利要求1-3之一的方法，其特征在于将调为酸性的离心上清液的pH调至 6.0-8.0，优选6.5-7.5，首选6.8-7.2，进一步沉淀部分杂蛋白。5、 根据权利要求1-4之一的方法，其特征在于在层析分离时选用阴离子-阳离子交 换层析、阴离子交换-疏水作用层析、阳离子-阴离子交换层析、阳离子交换-疏水作 用层析、疏水作用-阴离子交换或疏水作用-阳离子交换层析中的任意组合，优选阴 离子-阳离子交换层析、阴离子交换-疏水作用层析，首选阴离子-阳离子交换层析。6、 根据权利要求1-6之一的方法，其特征在于阴离子交换层析介质选用 Q-sepharose、 DEAE- s印haxose、 C即toQ- s印harose、 Toyopearl GigaC邻Q-650 或Toyopearl DEAE-650，优选Q-sepharose、DEAE- s印harose、C即toQ- sepharose、，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张炎，张英，唐治华，张杰，白敏姿，
申请(专利权)人：北京天广实生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：11[]