【技术实现步骤摘要】
专利
本申请涉及一种靶向cd40和pd-l1的多特异性抗体，及其在治疗肿瘤等疾病中的用途。
技术介绍
1、免疫检查点是免疫系统的调节者，分为抑制性检查点分子和刺激性检查点分子。抑制性检查点分子在防止免疫系统攻击健康细胞上发挥着重要作用，而刺激性检查点分子则是推进免疫反应所必需的。
2、pd-1和pd-l1
3、pd-1是下调免疫应答的检查点分子，主要表达于外周组织的记忆t细胞，也少量表达于b细胞、活化的单核细胞、树突状细胞和自然杀伤(nk)细胞(keir me et al.，(2008)annu rev immunol.26：677-704；ishida y et al.，(1992)embo j.11(11)：3887-3895)。pd-l1和pd-l2是pd-1的两个配体。其中，pd-l1组成性地表达于抗原提呈细胞、t细胞、b细胞、单核细胞和上皮细胞，且在促炎症细胞因子的存在下，很多细胞会上调pd-l1的表达(keir me et al.，(2008)同上；chen j et al.，(2016)ann oncol.27(3)：409-416)。研究表明，pd-l1可以通过多种途径对t细胞产生抑制性作用，或对活化的b细胞和nk细胞的裂解活性进行抑制(dong h et al.，(1999)nat med.5(12)：1365-1369；keir me et al.，(2008)同上；chen j et al.，(2016)同上；terme m et al.，(2011)cancer res.71
4、pd-1/pd-l1通路还被肿瘤细胞等利用，以帮助其逃避免疫系统的监视。pd-l1在多种肿瘤细胞上组成性地表达，还在肿瘤微环境中的髓细胞如巨噬细胞和树突状细胞上表达。研究表明，在肿瘤微环境中，pd-l1-pd-1的相互作用引起t细胞功能障碍和衰竭、以及il-10的分泌，抑制cd8+t细胞对肿瘤细胞的杀伤，促进肿瘤细胞的生长(zou w，chen l.(2008)nat rev immunol.8(6)：467-477；sun z et al.，(2015)cancerres.75(8)：1635-1644)。
5、通过抗体阻断pd-1-pd-l1之间的相互作用，能够在多种类型的肿瘤中持续性诱导肿瘤消退，包括实体瘤和血液瘤。目前，有超过1000多个不同的靶向pd-1/pd-l1的临床实验在进行中，适应症包含黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾细胞癌、霍奇金淋巴瘤、膀胱癌、头颈癌、神经内分泌癌以及微卫星高度不稳定和错配修复缺陷的实体瘤等，以及套细胞淋巴瘤、弥漫性大型b细胞淋巴瘤、和滤泡型淋巴瘤等(akinleye a，rasool z.(2019)j hematoloncol.12(1)：92；chong sun et.al.(2018)immunity 20；48(3)：434-452)。美国fda已批准用于癌症治疗的pd-l1抗体有三种，即阿替利珠单抗(atezolizumab)、德鲁单抗(durvalumab)、和阿维鲁单抗(avelumab)。临床数据表明阿替利珠单抗对多种实体瘤和血液瘤有效力，包括非小细胞肺癌、黑色素瘤、肾细胞癌、结直肠癌、胃癌、头颈鳞状细胞癌、和泌尿道上皮细胞癌。类似地，全人源抗体德鲁单抗在临床上显示出对于泌尿上皮癌、非小细胞肺癌等的效力。阿维鲁单抗则显示出对于merkel细胞癌、泌尿上皮癌、三阴乳癌等的较好的临床效果。
6、此外，在病毒、细菌和寄生虫的急性或慢性感染方面，pd-1/pd-l1阻断也在临床和临床前研究中表现出良好的效果(jubel jm et al.，(2020)front immunol.11：487)。例如，在乙肝病毒、丙肝病毒、人免疫缺陷病毒(hiv)和猴免疫缺陷病毒(siv)的慢性感染后，pd-l1抗体处理增加ifn-γ、il-2和tnfα的分泌，t细胞耗竭情况得到缓解，病毒血症得到控制。
7、cd40
8、cd40又称为肿瘤坏死因子受体超家族成员5或tnfr5，是一种跨膜共刺激蛋白，在抗原提呈细胞例如b细胞、巨噬细胞和树突细胞上表达。该蛋白与cd40l(cd154)，一种主要由激活的t淋巴细胞和血小板表达的主要配体，的结合，激活抗原提呈细胞，激发多个下游信号通路，包括免疫细胞激活和增殖、以及细胞因子和趋化因子的生产，增强细胞功能和免疫功能(ara a et al，.(2018)immunotargets ther 7：55-61)。
9、已经开发出一些cd40抗体用于潜在的肿瘤治疗。cp-870,893，开发的完全人源的igg2激动型cd40抗体，可以激活树突细胞，并已在多种背景的晚期癌症病患中显示出了临床效用(vonderheide et al.，(2007)j clin oncol 25(7)：876-883；gladue et al.，(2011)cancer immunol immunother 60(7)：1009-1017；beatty et al.，(2013)expertrev anticancer ther 17(2)：175-186；vonderheide et al.，(2013)oncoimmunology 2(1)：e23033；nowak et al.，ann oncol 26(12)：2483-2490；2015u.s.patent no.7,338,660)。达西珠单抗(dacetuzumab)，也称作sgn-40，是seattle genetics开发的人源化igg1激动型cd40抗体，每周静脉施用下显示出抗肿瘤活性，特别是在患有弥漫性大b细胞性淋巴瘤的患者中。临床前数据也示出dacetuzumab与其他药物例如cd20单抗利妥昔单抗的协同效应(lapalombella et al.，(2009)br j haematol 144(6)：848-855；hussein et al.，(2010)haematologica 95(5)：845-848；de vos et al.，(2014)j hematol oncol 7：44)。chi lob 7/4，英国癌症研究中心(cancer research uk)开发的嵌合igg1激动型抗人cd40抗体，正在进行初始的临床测试。21名患者中的11名病情稳定，而没有部分或完全缓解(chowdhury et al.，(2014)cancer immunol res 2(3)：229-240)。
10、很多激动型cd40抗体需要在交联成例如三聚体的状态下结合cd40才能引发下游信号通路，而这种抗体交联主要依赖于抗体fc区与例如免疫细胞上的fcγriib的结合。肝脏是免疫复合物清除的主要场所，肝脏窦状内皮细胞表面高表达的fcγriib容易引起cd40抗体的交联，活化免疫细胞，引起过多的细胞因子释放等，从而造本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种多特异性抗体，包含：
2.如权利要求1所述的多特异性抗体，其中第三多肽链包含该第二结合域，且该第一结合域和该第二结合域结合相同或不同的PD-L1表位。
3.如权利要求1所述的多特异性抗体，其中该第一结合域为单链抗体(scfv)或纳米抗体，该第二结合域为单链抗体(scfv)或纳米抗体。
4.如权利要求1所述的多特异性抗体，其中第三多肽链包含该第二结合域，该第一结合域和该第二结合域分别为单链抗体和纳米抗体、均为纳米抗体、或均为单链抗体。
5.如权利要求4所述的多特异性抗体，其中单链抗体包含SEQ ID NOs：33、34和35所示的VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，以及SEQ ID NOs：36、37和38所示的VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3；或者SEQ ID NOs：39、40和41所示的VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，以及SEQ ID NOs：42、43和44所示的VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，和/或
6.如权利要求5所述的多特异性抗体，其中单链抗体
7.如权利要求1所述的多特异性抗体，其中第一多肽链和第三多肽链中的重链恒定区弱结合或不结合FcR。
8.如权利要求1所述的多特异性抗体，其中，第一多肽链中特异结合CD40的重链可变区包含SEQ ID NOs：28和29所示的VH-CDR1和VH-CDR2、以及LDY所示的VH-CDR3，第二多肽链中特异结合CD40的轻链可变区包含SEQ ID NOs：30、31和32所示的VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3；和/或第三多肽链中特异结合CD40的重链可变区包含SEQ ID NOs：28和29所示的VH-CDR1和VH-CDR2、以及LDY所示的VH-CDR3，第四多肽链中特异结合CD40的轻链可变区包含SEQ ID NOs：30、31和32所示的VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。
9.如权利要求8所述的多特异性抗体，其中特异结合CD40的重链可变区和轻链可变区包含与SEQ ID NOs：1和2具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致性的氨基酸序列。
10.如权利要求1所述的多特异性抗体，其中第一多肽链和/或第三多肽链中的重链恒定区经接头与第一结合域和/或第二结合域连接。
11.如权利要求10所述的多特异性抗体，其中接头包含SEQ ID NOs：19、20、21或22所示的氨基酸序列。
12.如权利要求1所述的多特异性抗体，其中
13.如权利要求12所述的多特异性抗体，其中第一多肽链、第二多肽链、第三多肽链和第四多肽链分别包含与i)SEQ ID NOs：17、53、16、和53；ii)SEQ ID NOs：9、53、9、和53；iii)SEQ ID NOs：12、53、13、和53；iv)SEQ ID NOs：18、53、18、和53；v)SEQ ID NOs：14、53、13、和53；vi)SEQ ID NOs：15、53、16、和53；或vii)SEQ ID NOs：12、53、16、和53具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致性的氨基酸序列。
14.权利要求1-13中任一项所述的多特异性抗体在制备一种用于治疗肿瘤疾病、或感染性疾病的药物中的用途。
15.如权利要求14所述的用途，其中肿瘤疾病为实体瘤或血液瘤，感染性疾病选自由乙肝病毒、丙肝病毒、HIV和SIV引起的慢性感染。
...【技术特征摘要】
1.一种多特异性抗体，包含：
2.如权利要求1所述的多特异性抗体，其中第三多肽链包含该第二结合域，且该第一结合域和该第二结合域结合相同或不同的pd-l1表位。
3.如权利要求1所述的多特异性抗体，其中该第一结合域为单链抗体(scfv)或纳米抗体，该第二结合域为单链抗体(scfv)或纳米抗体。
4.如权利要求1所述的多特异性抗体，其中第三多肽链包含该第二结合域，该第一结合域和该第二结合域分别为单链抗体和纳米抗体、均为纳米抗体、或均为单链抗体。
5.如权利要求4所述的多特异性抗体，其中单链抗体包含seq id nos：33、34和35所示的vh-cdr1、vh-cdr2和vh-cdr3，以及seq id nos：36、37和38所示的vl-cdr1、vl-cdr2和vl-cdr3；或者seq id nos：39、40和41所示的vh-cdr1、vh-cdr2和vh-cdr3，以及seq id nos：42、43和44所示的vl-cdr1、vl-cdr2和vl-cdr3，和/或
6.如权利要求5所述的多特异性抗体，其中单链抗体包含与i)seq id nos：3和4或ii)seq id nos：10和11具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致性的氨基酸序列的重链可变区和轻链可变区，和/或
7.如权利要求1所述的多特异性抗体，其中第一多肽链和第三多肽链中的重链恒定区弱结合或不结合fcr。
8.如权利要求1所述的多特异性抗体，其中，第一多肽链中特异结合cd40的重链可变区包含seq id nos：28和29所示的vh-cdr1和vh-cdr2、以及ldy所示的vh-cdr3，第二多肽链中特异结合cd40的轻链可变区包含seq id nos：30、31和32所示的vl-cdr1、vl-cdr2和vl-cdr3；和/或第三多肽链中特异结合cd40的重链可变...
【专利技术属性】
技术研发人员：李江美，周雪晨，胡稳奇，李锋，
申请(专利权)人：北京天广实生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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