天然产物中提取分离高纯1-脱氧野尻霉素的方法技术

本发明专利技术涉及中药领域，从天然产物，包括桑叶、桑枝、桑白皮、桑椹、蚕沙，提取分离纯度高于９８％的１－脱氧野尻霉素（１－Ｄｅｏｘｙｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ，ＤＮＪ），同时制备１－脱氧野尻霉素粗品（纯度３５％以上）、蛋白饲料、粗黄酮及精制多糖（纯度９０％以上）的方法，主要包括以下步骤：原料干粉用亲水溶剂提取，提取液酸化、浓缩后以阴离子交换树脂浸泡，流出液和水洗液浓缩后用阳离子交换柱层析、有机溶剂萃取、重结晶、凝胶柱层析纯化，所得产物中１－脱氧野尻霉素含量不少于９８％，具体实施已进入中试。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药领域，即从天然产物中提取分离高纯1-脱氧野尻霉素 (l-Deoxynojirimycin, DNJ)及制备高附加值的副产物的方法。
技术介绍
1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin，DNJ )是一种哌啶生物碱，化学名称为3, 4, 5-三 羟基-2-羟甲基四氢吡啶(结构式l), CAS号19130-96-2，分子式为C6H13N04，分子量为163。 DNJ具有高效的生理活性,可用于治疗糖尿病、肥胖症、病毒感染等疾病，可抑制肿瘤，对a -葡萄糖淀粉酶有抑制作用，并可作为载体用于高纯度麦芽糖的酶合成。HO、人力H结构式l 1-脱氧野尻霉素的化学结构 Ficture 1 The chemical constitution of 1-DNJ现有专利中，CN101195602A介绍了以D-葡萄糖为原料进行DNJ全合成的方法；部分专利 涉及较低纯度l-脱氧野尻霉素的提取或桑叶生物总碱制备，包括CN1471934A、 CN1175818C、 CN1240407C、 CN1250246C、 CN1762428A、 CN1259915C、 CN101020655、 CN101314586A、 CN100464764C;另有部分专利涉及本专利技术中单一或混合副产物的制备，包括CN1159343C、 CN1317272C、 CN101209284A、 CN101214279A、 CN101244124A、 CN101412703A、 CN101491579A。 对于从天然产物中提取分离高纯(98%以上)1-脱氧野尻霉素及同时制备1-脱氧野尻霉素粗 品(纯度35%以上)、蛋白饲料、粗黄酮及精制多糖(9096以上)的方法，在现有专利中还未 见报道。另外，本专利技术已进行了中试(投料500kg)，在现有制备1-脱氧野尻霉素及相关副产 物的专利中，未见已进入中试的报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于采用更为合理的提取和分离水溶性生物碱的方法，从天 然产物中提取分离高纯1-脱氧野尻霉素，同时制备高附加值的副产物。本专利技术公开的是原料干粉用亲水溶剂提取，提取液酸化、浓縮后以阴离子交换树脂浸泡， 流出液和水洗液浓缩后用阳离子交换柱层析、有机溶剂萃取、重结晶、凝胶柱层析纯化，所 得产物中1-脱氧野尻霉素含量不少于98%。本专利技术所述原料包括天然产物桑叶、桑枝、桑白皮、桑椹、蚕沙；采用烘箱干燥、真空 干燥、冷冻干燥或喷雾干燥；采用减压浓縮或常压浓縮；采用自然沉降、离心分离、膜分离、 絮凝、常压或减压过滤；采用单独粉碎或混合粉碎；采用超声提取、微波提取、加热回流提 取、煎煮、滲漉或浸提，优选超声提取。本专利技术所要解决的另一技术问题是公开在提取上述高纯目标产物的同时制备高附加值的 副产物的方法。本专利技术公开的从天然产物中提取分离高纯l-脱氧野尻霉素及制备高附加值的副产物的方 法包括以下步骤-1.从天然产物中提取分离高纯1-脱氧野尻霉素1) 制备原料粉原料除去杂质，干燥后粉碎、过筛、称重，得原料粉末；原料包括桑叶、桑枝、桑白皮、 桑椹、蚕沙等；干燥温度不超过7(TC;粉碎后原料粉末过40目筛。2) 提取原料粉末用亲水溶剂提取，分离固液相；亲水溶剂为水、低级醇、低级醇水溶液及低级 醇或水混合液。3) 酸化、浓缩向2)的提取液中加入稀酸，调节pH-2 5，提取液浓縮至小体积，分离固液相；加入的 酸为盐酸、硫酸。4) 阴离子交换树脂浸泡将3)的液相通过阴离子交换树脂纯化直接将3)的浓縮液浸泡阴离子交换树脂6 10 小时，流出液加入原阴离子树脂，重复2 5次，水洗，收集最后一次的流出液和水洗液，浓 縮至小体积；阴离子交换树脂型号为701、 717、 D201、 D301，优选717;上样液体积与树脂 重量之比为1:3 1:8;洗脱用水量为树脂体积的1 5倍。5) 阳离子交换树脂柱层析将4)的浓縮液通过阳离子交换树脂纯化上样后，以纯水洗至流出液无色后以氨水洗 脱，收集PH=9 12段洗脱液，浓縮至小体积；阳离子交换树脂型号为732、 724、 D152，优 选732;上样液体积与树脂重量之比为1:1 1:8;所用氨水浓度低于2. 5mol/L。6) 有机溶剂萃取将5)的浓縮液加入酸调节pH=6. 5 7. 5，以氯仿萃取，保留水相；加入的酸为盐酸、硫 酸、冰醋酸；浓縮液与氯仿体积比为3:1 1:1，萃取次数1 3次。将所得水相以正丁醇萃 取，保留正丁醇相，浓缩至小体积，收集析出的固相；浓縮液与正丁醇体积比为1:1 3:1， 萃取次数3 5次。.7) 重结晶将6)的干品加入无水乙醇重结晶；重结晶的次数为1 3次。8) 凝胶柱层析纯化将7)的产品溶于少量纯水，通过凝胶柱层析，以标准品对照，收集薄层色谱Rf值和斑 点颜色均一致部分，浓缩至干，得成品。其中目标产物1-脱氧野尻霉素含量不少于98%。凝5胶柱层析柱采用Superose、 S印hdex LH-20、 HiTrapSP等，优选S印hdex LH-20，纯水洗脱； 1-脱氧野尻霉素标准品纯度不低于99%;薄层层析采用层析硅胶G，显色剂为茚三酮。2.同时制备高附加值的副产物的方法1) 1-脱氧野尻霉素粗品的制备合并步骤1-6)中水相与正丁醇未浓縮至干部分，以活性炭脱色、无水乙醇重结晶后浓 縮、干燥，得1-脱氧野尻霉素粗品，其中目标产物1-脱氧野尻霉素含量不少于35%。2) 黄酮粗品的制备用60% 90%低级醇水溶液洗脱步骤1-4)中的阴离子树脂，洗脱液浓縮至干，合并步骤 1-3)中得到的固相，得到黄酮粗品。3) 蛋白饲料的制备将步骤卜2)中得到的固相以超声波水提(400 3000HZ, 60 100°C，固液比1:4 1:12, 10 60 min/次Xl 5次)，过滤，滤渣可作为蛋白饲料。4) 多糖的制备将步骤1-3)中滤液浓縮至近干，加入有机溶剂(乙醇、甲醇、异丙醇、丙酮、丁醇、 二甲基甲酰胺或二甲亚砜)萃取，除去脂溶性部分，保留水相；将水相加入有机溶剂(乙酸 乙酯、乙酸丁酯、苯、甲苯或沸程为60 9(TC的石油醚)萃取，除去叶绿素，保留水相；所 得水相与步骤1-7)中水洗液及pH<9段氨水洗脱液浓縮后合并，加95%乙醇使含醇量达80 %，于冰箱放置48 h，取出抽滤，将沉淀加水溶解，除蛋白(4'C加入三氯乙酸使三氯乙酸 浓度为20%， 15min后沉降离心3000 4000r/m 30min，保留液相)，得样液。A. 将样液过大孔吸附树脂(AB-8、 LSA-5B、 HPDIOO、 D941、 DlOl，优选AB-8)，固液比 5:1 1:1，用蒸馏水洗至在洗脱液中加入95%乙醇无沉淀为止)，洗脱液浓縮，加10%量的 活性炭或双氧水脱色处理，加入95%乙醇使含醇量达75%以上醇沉，放置48h后，取出抽 滤，沉淀用无水乙醇、丙酮各洗3次，干燥，得到白色无定形粉末，其多糖含量不低于80%;B. 将样液以透析袋(分子量10 000以上)透析，干燥，得到白色无定形粉末，其多糖含 量不低于90%。本专利技术弥补了从天然产物中提取分离高纯(98%以上)1-脱氧野尻霉素及同时制备1-脱 氧野尻霉素粗品(纯度35%以上)、蛋白词料、粗黄酮及精制多糖(90%以上)的技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从天然产物中提取分离高纯１－脱氧野尻霉素（１－Ｄｅｏｘｙｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ，ＤＮＪ）的方法，其特征在于包括以下过程：　１）原料除去杂质，干燥后粉碎、过筛、称重，得原料粉末；　２）原料粉末用亲水溶剂提取，分离固液相；　 　３）向２）的提取液中加入稀酸，调节ｐＨ＝２～５，提取液浓缩至小体积，分离固液相；　４）将３）的液相通过阴离子交换树脂纯化：直接将３）的浓缩液浸泡阴离子交换树脂６～１０小时，流出液加入原阴离子树脂，重复２～５次，水洗，收集最后一次的流 出液和水洗液，浓缩至小体积；　５）将４）的浓缩液通过阳离子交换树脂纯化：上样后，以纯水洗至流出液无色后以氨水洗脱，收集ｐＨ＝９～１２段洗脱液，浓缩至小体积；　６）将５）的浓缩液加入酸调节ｐＨ＝６．５～７．５，以氯仿萃取，保留水相 ；　７）将６）中的水相以正丁醇萃取，保留正丁醇相，浓缩至小体积，收集析出的固相；　８）将７）的干品加入无水乙醇重结晶；　９）将８）的产品溶于少量纯水，通过凝胶柱层析，以标准品对照，收集薄层色谱Ｒｆ值和斑点颜色均一致部分，浓 缩至干，得成品。其中目标产物１－脱氧野尻霉素含量不少于９８％。...

【技术特征摘要】
1、一种从天然产物中提取分离高纯1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin，DNJ)的方法，其特征在于包括以下过程1)原料除去杂质，干燥后粉碎、过筛、称重，得原料粉末；2)原料粉末用亲水溶剂提取，分离固液相；3)向2)的提取液中加入稀酸，调节pH＝2～5，提取液浓缩至小体积，分离固液相；4)将3)的液相通过阴离子交换树脂纯化直接将3)的浓缩液浸泡阴离子交换树脂6～10小时，流出液加入原阴离子树脂，重复2～5次，水洗，收集最后一次的流出液和水洗液，浓缩至小体积；5)将4)的浓缩液通过阳离子交换树脂纯化上样后，以纯水洗至流出液无色后以氨水洗脱，收集pH＝9～12段洗脱液，浓缩至小体积；6)将5)的浓缩液加入酸调节pH＝6.5～7.5，以氯仿萃取，保留水相；7)将6)中的水相以正丁醇萃取，保留正丁醇相，浓缩至小体积，收集析出的固相；8)将7)的干品加入无水乙醇重结晶；9)将8)的产品溶于少量纯水，通过凝胶柱层析，以标准品对照，收集薄层色谱Rf值和斑点颜色均一致部分，浓缩至干，得成品。其中目标产物1-脱氧野尻霉素含量不少于98％。2、 根据权利要求l所述方法，其特征在于所述l)中的原料为桑叶、桑枝、桑白皮、桑椹、蚕沙；干燥温度不超过7(TC;粉碎后原料粉末过40目筛。3、 根据权利要求l所述方法，其特征在于所述2)中的亲水溶剂为水、低级醇、低级醇水溶液及低级醇或水混合液。4、 根据权利要求l所述方法，其特征在于所述3)中加入的酸为盐酸、硫酸、冰醋酸，浓度低于3mol/L。5、 根据权利要^ 1所述方法，其特征在于所述4)中的阴离子交换树脂型号为701、 717、D201、 D301，优选717;上样液体积与树脂重量之比为1:3 1:8;洗脱用水量为树脂体积的1 5倍。6、 根据权利要求1所述方法，其特征在于所述5)中的阳离子交换树脂型号为732、 724、D152，优选732;上样液体积与树脂重量之比为1:1 1:8;所用氨水浓度低于2. 5mol/L。7、 根据权利要求l所述方法，其特征在于所述6)中加入的酸为盐酸、硫酸、冰醋酸；浓縮液与氯仿体积比为3:1 1:1，萃取次数1 3次。.8、 根据权利要求1所述方法，其特征在于所述7)中浓縮液与正丁醇体积比为1:1 3:1，萃取次数3 5次。9、 根据权利要求l所述方法，其特征在于所述8)中重结晶的次数为1 3次。10、 根据权利要求1所述方法，其特征在于所述9)中凝胶柱层析柱采用Superose、S印hdexLH-20、 Hi...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨茹，卢朝华，
申请(专利权)人：成都市金医生科技健康产业有限公司，杨茹，卢朝华，
类型：发明
国别省市：90[]