一种含人参皂甙的油佐剂及其制备方法技术

本发明专利技术为一种含人参皂甙的油佐剂及其制备方法，该油佐剂是一种由人参皂甙、佐剂油、硬脂酸铝和山梨醇单油酸酯组成的混合物，每毫升油佐剂中含人参皂甙１０～１００μｇ。其制备方法为：将制备佐剂的油加热６０～１５０℃，在每毫升油加入１０～２０毫克硬脂酸铝，混匀；待油温下降至５０～２０℃后，按体积比加入５～７％去水山梨醇单油酸酯，搅拌均匀，过滤，备用；用二甲基亚砜或吐温溶剂溶解人参皂甙成溶液；在每毫升制得的备用物中加入人参皂甙溶液１０～１００μｇ，混匀，１１０℃灭菌３０分钟。用含人参皂甙的油为佐剂制备而成的疫苗免疫动物可以大幅度提高疫苗诱导的特异性细胞和体液免疫反应强度和减少注射部位的局部刺激反应。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，涉及一种新的疫苗佐剂及其制备方法，具体为一种含人参皂 甙的油佐剂及其制备方法，采用该佐剂制备疫苗可以大幅度提高疫苗诱导的特异性免疫反应 强度和减少注射部位的局部刺激反应。
技术介绍
,中国是世界第一养殖大国，畜禽数量庞大，每年出栏的生猪、肉牛、羊接近9亿只(头)。 动物疫病种类繁多，规模化养殖程度提高后，疫病更易传播，因此动物疫病防治的任务十分 艰巨。使用疫苗对畜禽进行强制免疫，是疫病预防控制的重要措施之一。以偶蹄类动物(猪、 牛、羊等)口蹄疫为例，我国实施100%强制计划免疫控制政策，每年需接种口蹄疫疫苗2 3次，年用疫苗总量为100亿毫升，费用由国家和地方财政全额拨付，仅购买疫苗每年就需 支出十几亿元人民币。佐剂是灭活疫苗中的一种必备成分，起着增强或调节疫苗免疫反应的作用。每头份成品 疫苗中约含佐剂l毫升，约占成品疫苗量的50%。我国目前采用的口蹄疫等灭活疫苗的佐剂 均为油佐剂，主要是国产矿物油和法国进口的油佐剂(简称206)。但是，目前一些商品油佐 剂疫苗的免疫效果不十分理想。比如谢琴[1等人的调查表明，注射了含油佐剂的口蹄疫疫苗 后仅有20.9%的仔猪产生了足够强的免疫反应，其余的仔猪仍然存在感染的危险。郝大丽等 人在分析了 91份注射了含油佐剂的口蹄疫疫苗仔猪血清后发现,仅有31.9%的血清所含的抗 体达到了保护性水平21。此外，油佐剂主要促进体液免疫反应，而对细胞免疫反应较弱。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服一些油佐剂疫苗免疫效果差和注射部位局部刺激大的缺点，为此， 本专利技术提供一种新的佐剂，采用该佐剂制备的疫苗可以在大幅度提高疫苗诱导的细胞和体液 免疫反应强度的同时，减少注射部位的局部刺激反应。本专利技术的一种含人参皂甙的油佐剂，是一种由人参皂甙、佐剂油、硬脂酸铝和山梨醇单 油酸酯组成的混合物，每毫升油佐剂中含人参皂式10 100 fig。本专利技术人参皂甙的油佐剂的制备方法为(1) 将制备佐剂的油加热60 150'C，在每毫升油加入10 20毫克硬脂酸铝，混匀(2) 待油温下降至50 20后，按体积比加入5~7%去水山梨醇单油酸酯，搅拌均匀， 过滤，备用；(3) 用二甲基亚砜或吐温溶剂溶解人参皂甙成溶液；(4) 在每毫升步骤2制得的备用物中加入人参皂甙溶液10 100Hg，混匀，11(TC灭菌30 分钟，冷却，即得。所述制备油佐剂的佐剂油为MONTANIDE ISA 206油或国产10号白油。给油加热为了使硬脂酸铝更好溶解。本专利技术的有益效果是，用含人参皂甙的油为佐剂制备而成的疫苗免疫动物可以大幅度提 高疫苗诱导的特异性细胞和体液免疫反应强度和减少注射部位的局部刺激反应。此外，将本 专利技术的新型油佐剂用于疫苗生产，无需改变现有生产工艺，方法简便。 附图说明图1:将70只ICR小鼠随机分成7组，分别皮下注射0. 2ml下列实验疫苗(1) FMDV + 生理盐水组；(2) FMDV + IO号白油；(3) FMDV + IO号白油+ GSLS (1 Pg); (4) FMDV + 10 号白油+ GSLS (5 Pg); (5) FMDV + IO号白油+ GSLS (10 (6) FMDV + IO号白油+GSLS (15 Pg); (7) FMDV + IO号白油+ GSLS (20 Mg)。每只小鼠注射2次，间隔3周。二 免后2周眼眶静脉采血，检测血清IgG水平。两个柱状图上标字母不同者表示有显著差异(P < 0.05)。图2:将70只ICR小鼠随机分成7组，分别皮下注射0. 2ml下列实验疫苗(1) FMDV + 生理盐水组；(2) FMDV + IO号白油；(3) FMDV + IO号白油+ GSLS (2 (4) FMDV + 10 号白油+GSLS (4Pg); (5) FMDV+10号白油+ GSLS (6 Pg); (6) FMDV + 10号白油+ GSLS (8 M); (7) FMDV + IO号白油+ GSLS (10 Pg)。每只小鼠注射2次，间隔3周。二免后 2周眼眶静脉采血，检测血清IgG水平。两个柱状图上标字母不同者表示有显著差异(P < 0. 05)。图3:将40只ICR小鼠随机分成5组，分别皮下注射0. 2ml下列实验疫苗(1) 1剂量 FMDV抗原+生理盐水组；(2) l剂量FMDV抗原+ 10号白油；(3) 1剂量FMDV抗原+ 10 号白油+GSLS; (4) 0.5剂量FMDV抗原+IO号白油+ GSLS; (5) 0. 25剂量FMDV抗原+10 号白油+ GSLS。每只小鼠注射2次，间隔3周。二免后2周眼眶静脉采血，检测血清IgG 水平。两个柱状图上标字母不同者表示有显著差异(P < 0.05)。图4:将40只ICR小鼠随机分成5组，分别皮下注射0. 2ml下列实验疫苗(1) 1剂量 FMDV抗原+生理盐水组；(2) 1剂量FMDV抗原+206油；(3) 1剂量FMDV抗原+ 206油+ GSLS; (4) 0. 5剂量FMDV抗原+ 206油+ GSLS; (5) 0. 25剂量FMDV抗原+ 206油+ GSLS。 每只小鼠注射2次，间隔3周。二免后2周眼眶静脉采血，检测血清IgG水平。两个柱状图 上标字母不同者表示有显著差异(p 〈 0.05)。图5:将24只ICR小鼠随机分成3组，分别皮下注射0. 2ml下列实验疫苗(1) FMDV 抗原+ IO号白油；(2) FMDV抗原+ 206油；(3) FMDV抗原+ IO号白油+ GSLS。 每只小鼠注射2次，间隔3周。二免后2周眼眶静脉采血，检测血清IgG水平。两个柱状图 上标字母不同者表示有显著差异(P < 0.05)。图6:将48只ICR小鼠随机分成6组，分别皮下注射0. 2ml下列实验疫苗(1) FMDV 抗原+生理盐水组；(2)商品FMDV疫苗；(3) FMDV抗原+10号白油；(4) FMDV抗原+10 号白油+ GSLS (4 Mg); (5) FMDV抗原+ 206油；(6) FMDV抗原+ 206油+ GSLS (4 Pg)。4每只小鼠注射2次，间隔3周。二免后将小鼠脱臼处死后，置75%酒精中浸泡15分钟，用眼 科剪从小鼠耻骨前缘将整个腹部皮肤剪下，浸泡在中性甲醛中固定24小时以上，使组织完 全固定。将皮肤用吸水纸吸干表面液体后，用游标卡尺测定皮肤厚度。两个柱状图上标字母 不同者表示有显著差异(P 〈 0.05)。 具体实施例方式实施例所用主要试剂的说明1、 硬脂酸铝为温州市化学用料厂产品，白色粉末，纯度以Al20j标定，8.4 9.4%。2、 去水山梨醇单油酸酯为温州清明化工有限公司产品，其技术指标如下脂肪酸％..................................................................................71-75多元醇％....................................................................................29.5-3酸值(m沐OH/g;)...............本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含人参皂甙的油佐剂，该油佐剂应用于疫苗制备，其特征在于：该油佐剂是一种由人参皂甙、佐剂油、硬脂酸铝和山梨醇单油酸酯组成的混合物，每毫升油佐剂中含人参皂甙１０～１００μｇ。

【技术特征摘要】
1、一种含人参皂甙的油佐剂，该油佐剂应用于疫苗制备，其特征在于该油佐剂是一种由人参皂甙、佐剂油、硬脂酸铝和山梨醇单油酸酯组成的混合物，每毫升油佐剂中含人参皂甙10～100μg。2、 如权利要求1所述一种含人参皂甙的油佐剂的制备方法，其特征在于以下步骤(1) 将制备佐剂的油加热60 150'C，在每毫升油加入10 20毫克硬脂酸铝，混匀；(2) 待油温下降至50 20'C后，按...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡松华，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]