一种关于HPV病毒的新型佐剂疫苗组合物制造技术

本发明专利技术公开一种关于HPV病毒的新型佐剂疫苗，及该疫苗的制备方法。具体而言，本发明专利技术的新型佐剂为PLGA-CaP复合颗粒，该佐剂疫苗PLGA-CaP复合颗粒能够对体内免疫产生应答，属于开发高效的HPV蛋白疫苗组合物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及以磷酸钙-聚合物复合颗粒为佐剂的疫苗组合物，及该疫苗组合物的 制备方法及其在药中的用途。本专利技术尤其针对由HPV蛋白制成的疫苗组合物及其在治疗或 预防HPV病毒药物中的应用。
技术介绍
人乳头瘤病毒（Humanpapillomaviruses，HPV)是无囊膜的双链DNA病毒，主要由 病毒外壳和基因组DNA组成（King，Adamsetal.2012)。HPV病毒外壳是由360个L1蛋白 (形成72个五聚体）和至多72个L2蛋白构成的二十面体结构，直径55_60nm(Howleyand Lowy2007)。病毒外壳蛋白具有自组装特性，在体外L1蛋白单独或与L2蛋白共同自组装 形成类病毒样颗粒（Virus-likeParticle，VLP)(Chen，Garceaetal.2000，Clementsand Griffiths2002,Chen，Nietal. 2011，WangandRoden2013)。目前的HPV疫苗都是以 VLP作为靶抗原，已有两种基于HPVLIVLP预防性疫苗上市，均以铝盐为佐剂（Jansenand Shaw2004,HowleyandLowy2007,Buonaguro,Torneselloetal. 2009,Harper2009, Frazer,Leggattetal. 2011,Hariri,Dunneetal. 2011,Malagon,Droletetal. 2012, LehtinenandDillner2013，Shaw2013)。2006 年 6 月 8 日，美国食品与药品管理局 (FDA)正式批准美国Merck公司生产的GardasilHPV预防性疫苗上市；它是由酿酒酵母表 达并纯化的HPV16/18/6/11LIVLP四价宫颈癌预防性疫苗，以无定形羟基磷酸铝硫酸盐 (amorphousaluminumHydroxyphosphatesulfate，AAHS)为佐剂，被批准用于预防 6 ~26 岁女孩和妇女HPV16、18、6、11型感染所引起的宫颈癌、癌前病变和生殖器疣，这是FDA通 过的世界上第一个肿瘤疫苗（Villa，Costaetal· 2005，Villa，Aultetal· 2006，Bryan 2007,Olsson,Villaetal. 2007,GoldstoneandVuocolo2012) 〇 随后英国葛兰素史 克（GSK)公司生产的商品名为Cervarix的HPV预防性疫苗也成功上市，它是由来源于昆 虫表达系统的HPV16/18LIVLP二价宫颈癌预防性疫苗，采用AS04佐剂（氢氧化铝复合 MPL)(Paavonen,Jenkinsetal. 2007,Garcon,Moreletal. 2011,Kreimer,Gonzalezet al· 2011,Szarewski2012) 〇 佐剂是指能非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答，而本身并无抗 原性的物质，又称免疫佐剂或抗原佐剂。传统疫苗直接来源于细菌和病毒，具有较高的免 疫原性，但存在较大的安全性问题。随着生物技术的高速发展，利用基因重组、生物合成及 化学合成获得的亚单位疫苗、合成肽疫苗等，结构简单，易于纯化，安全稳定，但是抗原的免 疫原性减弱，难以诱导良好的免疫保护性应答，必须添加免疫佐剂来增强免疫效果（Singh andSrivastava2003,Zepp2010)〇 目前，磷酸钙、MF59、铝佐剂在欧洲许多国家已经被批准用于人类疫苗（Singh, Carlsonetal· 1998,He，Mitchelletal· 2000)。铝佐剂是目前应用最为广泛的一类佐 剂，也是长期以来一度是被美国食品和药品监督管理局（FDA)批准用于人类疫苗的唯一 佐剂（Glenny，Popeetal· 1926，GuptaandSiber1995，Gupta1998，Baylor，Eganet al. 2002,ClementsandGriffiths2002,Lindblad2004,Lindblad2004)。尽管铝佐剂 可以有效增强免疫应答，但也存在一些不足。铝佐剂仅在注射部位形成贮库效应（Gupta， Changetal. 1996,Hem2002,Verdier,Burnettetal. 2005,HemandHogenEsch2007, 1^〇6，6代6116七31.2010)，通过炎症反应吸引树突状细胞（0(])(]\1〇代1161(1，3〇1?)1〇￥81^6七 al. 2005,Kool,Soullieetal. 2008,Sharp,Ruaneetal. 2009,Flach,Ngetal. 2011, Ghimire，Bensonetal· 2012)、巨嗤细胞（Μφ) (Hamilton,Byrneetal· 2000，Jordan, Millsetal· 2004，Rimaniol，Grasetal· 2004，Rimaniol，Grasetal· 2007)等抗原呈 递细胞（antigen-presentingcell,APC)，这些细胞通过吞嗤作用摄取抗原并经NLRP3炎 性小体激活免疫应答（DeGregorio，Trittoetal.2008，Dostert，Petrillietal· 2008， Eisenbarth,Colegioetal· 2008,FranchiandNunez2008,Kool,Petrillietal.2008, Li,Willinghametal. 2008,Cassel,Jolyetal. 2009,Demento,Eisenbarthetal. 2009, Duewell，Konoetal.2010，Davis，Wenetal· 2011)。同时，错佐剂通过刺激IL-10 分泌等 机制对细胞免疫产生抑制作用（Chen，Nietal. 2011)，而对于病毒感染而言，细胞免疫效 果将发挥更好地免疫保护和免疫防治作用（(VHaganandValiante2003，Demento，Cuiet al. 2012,LevitzandGolenbock2012,Olive2012,Cain,Sandersetal. 2013,HogenEsch 2013)。而且，铝佐剂可引起IgE介导的过敏反应（如注射部位肉芽肿）以及神经系统不 良反应等，从而引起人们对错佐剂安全性的担忧（Petrik，Wongetal.2007,Bystrianyk 2009,ShawandPetrik2009,Munks,McKeeetal. 2010,TomljenovicandShaw2011) 〇 另外，错佐剂对流感（AtmarandKeitel2009)、痕疾（Lew,Andersetal_1988，Schwartz， Brownetal· 2012)、单疱瘆病毒（Geerligs，Weijeretal· 1989)诱导的佐剂免疫效应比 较微弱。为此，需要针对HPV抗原的候选疫苗开发新型免疫佐剂（CampoandRoden2010， MarianiandVenuti2010,Chen,Nietal. 2011,Fo本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有佐剂作用的复合颗粒，其特征在于该复合颗粒为粒径分布在100nm～100μm之间的磷酸钙与聚合物组成的复合颗粒，其中磷酸钙是Ca与P摩尔比为0.1‑5∶1的化合物或混合物；聚合物为带负电，且zeta电位最小至‑30mV的直链或有支链的聚合物、均聚物、生物聚合物、共聚物，或其混合物；复合颗粒的zeta电位范围是‑5mV到+30mV。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨小杰，张世艳，
申请(专利权)人：张世艳，杨小杰，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23