一种新型通用型基质疫苗佐剂及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及一种新型通用型基质疫苗佐剂及其制备方法和用途。该佐剂为合欢皮皂苷基质佐剂，包含合欢皮皂苷、胆固醇和卵磷脂，三者重量比为5～20∶1∶1，是由粒径10～12 nm的正方体和/或球形颗粒组成的300～700 nm片状和/或链状微粒构成。合欢皮皂苷基质佐剂具有显著的免疫佐剂作用，能增强疫苗免疫机体的细胞免疫和体液免疫反应，诱导产生平衡的Th1型和Th2型免疫应答；且可降低疫苗抗原剂量，是抗原量有限或造价昂贵疫苗的理想佐剂，较合欢皮皂苷用量少，溶血性低，安全性好。合欢皮皂苷基质佐剂与各种抗原均有良好的亲和性，是一种新型、通用型疫苗佐剂。生产工艺简单，易于大规模生产。

【技术实现步骤摘要】
一种新型通用型基质疫苗佐剂及其制备方法和用途
本专利技术涉及一种新型通用型基质疫苗佐剂及其制备方法和用途。
技术介绍
疫苗接种是预防和控制传染性疾病最经济、有效的手段。DNA疫苗、重组疫苗和合成肽疫苗等新型疫苗是近年来发展迅速的一类生物制剂，比常规疫苗具有抗原纯度高、特异性强、安全性好等优势。然而，这些新型疫苗的免疫原性弱，免疫效力低下[OystonP,RobinsoK.Thecurrentchallengesforvaccinedevelopment.JMedMicrobiol2012;61(7):889–894]。同此，当前疫苗研究正面临一些复杂病原如疟疾、结核、人免疫缺陷病毒等的重要挑战[Leroux–RoelsG.Unmetneedsinmodernvaccinology:Adjuvantstoimprovetheimmuneresponse.Vaccine2010;28(Supp.3):C25–36]。佐剂是传统疫苗和当前新型疫苗必不可少的组成成分，不仅能影响机体对疫苗免疫应答的强度，而且能针对特定病原体诱导最有效的免疫应答类型[MbowML,DeGregorioE,ValianteNM,etal.Newadjuvantsforhumanvaccines.CurrentOpinioninImmunology2010;22(3):411–416]。目前报道的免疫佐剂种类很多，如油佐剂、弗氏佐剂、微生物及其代谢产物、核酸及其类似物、细胞因子、脂质体等[DeyAK,SrivastavaIK.Noveladjuvantsanddeliverysystemsforenhancingimmuneresponsesinducedbyimmunogens.ExpertRevVaccines2011;10:227–51]，但由于存在不同程度的毒副作用或安全隐患等一些不可避免的缺陷而难以实际应用[MbowML,DeGregorioE,ValianteNM,RappuoliR.Newadjuvantsforhumanvaccines.CurrOpinImmunol2010,22(3):411–6;Batista–DuharteA,LindbladEB,Oviedo–OrtaE.Progressinunderstandingadjuvantimmunotoxicitymechanisms.ToxicolLett2011;203(2):97–105]。铝胶佐剂自1920s使用以来，直至最近由铝盐和TLR4激动剂3–O–去酰基–4’–单磷酰脂质A组成的AS04被批准之前一直是唯一通过FDA批准的人用疫苗佐剂[MarrackP,McKeeAS,MunksMW.Towardsanunderstandingoftheadjuvantactionofaluminium.NatRevImmunol2009;9:287–293]。然而，铝胶佐剂存在一些弊端：①主要通过诱导Th2型免疫应答产生抗体起保护作用，不能诱生Th1型免疫应答和细胞介导的免疫反应，只适用于以抗体为主要保护性免疫的疫苗(ExleyC,SiesjoP,ErikssonH.Theimmunobiologyofaluminiumadjuvants:howdotheyreallyworkTrendsImmunol2010;31:103–109)；②对人免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、流感病毒以及血吸虫病、百日咳和伤寒等多种抗原无佐剂作用[O’HaganDT,DeGregorioE.Thepathtoasuccessfulvaccineadjuvant-‘thelongandwindingroad’.DrugDiscovToday2009;14:541–551]；③可促进IgE抗体产生，容易诱导机体产生过敏反应；④在局部形成肉芽肿，甚至发生局部无菌性脓肿；⑤因其理化性质特点，含铝胶的疫苗怕冻，冻后铝胶容易变性；⑥对人、畜神经系统可能有影响。因此，铝胶佐剂已远远不能满足新型疫苗发展的要求[KoolM,FierensK,LambrechtBN.Alumadjuvant:someofthetricksoftheoldestadjuvant.JMedMicrobiol2012;61(7):927–934]。寻找安全、有效、新型的免疫佐剂是当前疫苗研究领域的一个热点[SchijnsVEJC,LavelleEC.Trendsinvaccineadjuvants.ExpertRevVaccines2011;10(4):539–550]。免疫佐剂研究已被列为疫苗研究的优先领域[HarandiAM,MedagliniD,ShattockRJ.Vaccineadjuvants:Apriorityforvaccineresearch.Vaccine2010;28(12):2363–2366;HarandAM‌,BreweJ,SchijnV.ConferenceScene:Recentadvancementsinimmunopotentiatorsformodernvaccines.Immunotherapy2011;3(11):1297–301]。天然药物用于防治疾病具有悠久的历史。当今，FDA批准的药物约30%来源于天然药物。新的具有免疫活性的天然产物的发现日益成为研究重点，尤其在寻找新一代疫苗佐剂方面[LicciardiPV,UnderwoodJR.Plant-derivedmedicines:Anovelclassofimmunologicaladjuvants.IntImmunopharmacol2011;11(3):390-398]。皂苷(saponin)是一类广泛存在于中药和天然药物中的重要免疫活性物质[RíosJL.Effectsoftriterpenesontheimmunesystem.JEthnopharmacol2010;128:1-14]。自1951年发现皂苷能增强机体对口蹄疫疫苗的免疫应答以来，其佐剂作用受到了广泛的关注。研究最多的是南美皂树（QuillajasaponariaMolina）树皮中筛选到具有佐剂活性总皂苷——QuilA及其活性成分QS-21[SkeneCDandSuttonP.Saponin-adjuvantedparticulatevaccinesforclinicaluse.Methods2006;40:53-9]。QuilA和QS-21对外源性抗原既能刺激Th1免疫应答，又能诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTL）应答。这一独特的特性使其成为亚单位疫苗、细胞内病原体疫苗及癌症疫苗的理想佐剂[MbawuikeI,ZangY,CouchRB.Humoralandcell-mediatedimmuneresponsesofhumanstoinactivatedinfluenzavaccinewithorwithoutQS21adjuvant.Vaccine2007;25(17):3263-9]。但QuilA存在严重的缺陷：溶血性强、毒副作用大，可引起局部组织坏死，甚至全身不良反应和中毒[WaiteDC,JacobsonEW,EnnisF本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种合欢皮皂苷基质佐剂，其特征在于，该佐剂含有合欢皮皂苷、胆固醇和卵磷脂，且三者的重量比为5～20:1:1。

【技术特征摘要】
1.一种合欢皮皂苷基质佐剂，其特征在于，该佐剂含有合欢皮皂苷、胆固醇和卵磷脂，且三者的重量比为5～20:1:1；所述的佐剂是由300～700nm片状和/或链状微粒构成，该片状或链状微粒由粒径10～12nm的正方体和/或球形颗粒组成。2.根据权利要求1所述的合欢皮皂苷基质佐剂，其特征在于，所述的合欢皮皂苷是合欢皮属植物中的皂苷，它是齐墩果烷型苷元、8～10个单糖分子以及1～4单萜烯酸分子结合而成的三萜皂苷。3.根据权利要求1所述的合欢皮皂苷基质佐剂，其特征在于，所述的卵磷脂为磷脂酰胆碱、大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂。4.制备权利要求1所述的合欢皮皂苷基质佐剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：a.合欢皮皂苷溶液的配制：将合欢皮皂苷溶解于蒸馏水，制成50mg/ml的溶液，滤过除菌，获得合欢皮皂苷溶液；b.胆固醇/卵磷脂溶液的配制：取非离子型表面活性剂，以双蒸水溶解，制成质量浓度为20%的溶液；再称取卵磷脂和胆固醇，溶于上述溶液中，使每ml溶液含卵磷脂和胆固醇各10mg，滤过除菌，获得胆固醇/卵磷脂溶液；c.按合欢皮皂苷、胆固醇和卵磷脂三者重量比5～20:1:1，取步骤a的合欢皮皂苷溶液与步骤b的胆固醇/卵磷脂溶液，加入pH6.2的PBS缓...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙红祥，王巧文，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33