【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物检测领域，具体涉及抗禽多瘤病毒vp4蛋白单克隆抗体及其在禽多瘤病毒感染检测中的应用。
技术介绍
1、禽多瘤病(avian polyomavirus disease)早期又称为鹦鹉幼雏病(budgerigarfledgling disease，bfd)，对幼雏具有非常强的致病性，感染成年禽类会导致成年禽类出现慢性症状，包括羽毛异常、背部和腹部羽毛缺乏、头部和颈部肉瘤等。该病没有严格的宿主特异性，可以感染多种禽类，包括鸡、鹦鹉、鸽子、鸭等。对于该病，至今还未有可行的防控措施。
2、apv是一种环状双链dna病毒，大小约为4981bp，病毒粒子为二十面体对称球形颗粒，直径约为45nm，不具囊膜。2017年国际病毒分类委员会(ictv)将其归属于多瘤病毒科(polyomaviridae)，γ多瘤病毒属(gammapolyomavirus)。apv的主要蛋白质组分为早期区域编码的大t抗原和小t抗原蛋白，晚期区域编码的vp1、vp2、vp3、vp4结构蛋白及vp4变体vp4-delta，相较于哺乳动物多瘤病毒，vp4和vp4-delta是仅存在于apv中的特异性蛋白。此外，vp4在apv感染中至关重要，并被认为与细胞培养中的病毒基因组包装和细胞凋亡有关。
3、有研究表明，删除或灭活vp4可以减弱apv的毒力。因此，对vp4基因的功能与特性进行深入的研究，将有助于对禽多瘤病毒致病机理的探索。本研究制备针对apv结构蛋白vp4的单克隆抗体，可为apv诊断方法的建立和疫苗研究提供重要理论依据。
>技术实现思路
1、在本领域中，获得反应性较好的vp4蛋白单克隆抗体，能够为检测禽多瘤病毒，建立快速检测方法和疫苗研发奠定基础。
2、此前，张志等专利技术了一种禽多瘤病毒检测试剂盒，运用特定引物通过pcr合成经地高辛标记的特异性核酸探针，通过斑点分子杂交，该特异性探针检测病料样品中禽多瘤病毒核酸的存在。李阳等专利技术了一种鹦鹉多重病毒检测试剂盒，可以检测鹦鹉喙羽病(psittacine beak and feather disease，pbfd)、禽腺病毒(fowl adenovirus，fadv)和apv感染，但二者耗时均较长，步骤复杂，24h～36h才能完成检测。刘艳、闫佳佳等的荧光定量pcr检测方法对操作人员的技术水平要求较高。而ifa作为一种基于抗体-抗原反应的免疫学检测方法,特异性强、灵敏度高、操作便捷，广泛用于临床诊断和生物学研究
3、因此，需要提供一种反应性较好的vp4蛋白单克隆抗体，并应用于将来基于ifa的apv快速诊断与检测方法，研发apv快速检测试剂盒。
4、本申请所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供结合apv结构蛋白vp4的单克隆抗体及其制备方法。
5、本申请还要解决的技术问题是提供上述单抗的应用。具体来说，本申请涉及如下内容：
6、1.一种结合apv结构蛋白vp4的单克隆抗体，其中，包含三个重链互补决定区(cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3)和三个轻链互补决定区(cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3)，其中：
7、cdr-h1的氨基酸序列如seq id no.3或seq id no.4或seq id no.5所示；
8、cdr-h2的氨基酸序列如seq id no.6或seq id no.7或seq id no.8所示；
9、cdr-h3的氨基酸序列如seq id no.9或seq id no.10或seq id no.11所示；
10、cdr-l1的氨基酸序列如seq id no.12或seq id no.13或seq id no.14所示；
11、cdr-l2的氨基酸序列如seq id no.15或seq id no.16或seq id no.17所示；
12、cdr-l3的氨基酸序列如seq id no.18或seq id no.19或seq id no.20所示。
13、2.根据项1所述的抗体，其中，cdr-h1具有如seq id no.3所示的氨基酸序列，所述cdr-h2具有如seq id no.6所示的氨基酸序列，所述cdr-h3具有如seq id no.9所示的氨基酸序列，所述cdr-l1的具有如seq id no.12所示的氨基酸序列，所述cdr-l2的具有如seqid no.15所示的氨基酸序列，所述cdr-l3的具有如seq id no.18所示的氨基酸序列。
14、3.根据项1所述的抗体，所述cdr-h1具有如seq id no.4的所示的氨基酸序列，所述cdr-h2具有如seq id no.7所示的氨基酸序列，所述cdr-h3具有如seq id no.10所示的氨基酸序列，所述cdr-l1的具有如seq id no.13所示的氨基酸序列，所述cdr-l2的具有如seq id no.16所示的氨基酸序列，所述cdr-l3的具有如seq id no.19所示的氨基酸序列。
15、4.根据项1所述的抗体，其中，所述cdr-h1具有如seq id no.5的所示的氨基酸序列，所述cdr-h2具有如seq id no.8所示的氨基酸序列，所述cdr-h3具有如seq id no.11所示的氨基酸序列，所述cdr-l1的具有如seq id no.14所示的氨基酸序列，所述cdr-l2的具有如seq id no.17所示的氨基酸序列，所述cdr-l3的具有如seq id no.20所示的氨基酸序列。
16、5.根据项1-4中任一项所述的单克隆抗体，其中，所述单克隆抗体包含抗体重链可变区hcvr和抗体轻链可变区lcvr，其中：
17、hcvr的氨基酸序列如seq id no.21或seq id no.22或seq id no.23所示，或为与seq id no.21或seq id no.22或seq id no.23具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列；
18、lcvr的氨基酸序列如seq id no.24或seq id no.25或seq id no.26所示，或为与seq id no.24或seq id no.25或seq id no.26具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列。
19、6.根据项5所述的单克隆抗体，其中，所述抗体重链可变区hcvr具有如seq idno.21所示的氨基酸序列，或为与seq id no.21具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列；
20、所述抗体轻链可变区lcvr具有如序列seq id no.24所示的氨基酸序列，或为与seq id no.24具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种结合APV结构蛋白VP4的单克隆抗体，其中，包含三个重链互补决定区(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)和三个轻链互补决定区(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)，其中：
2.根据权利要求1所述的抗体，其中，CDR-H1具有如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列，所述CDR-H2具有如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，所述CDR-H3具有如SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列，所述CDR-L1的具有如SEQ ID NO.12所示的氨基酸序列，所述CDR-L2的具有如SEQID NO.15所示的氨基酸序列，所述CDR-L3的具有如SEQ ID NO.18所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的抗体，所述CDR-H1具有如SEQ ID NO.4的所示的氨基酸序列，所述CDR-H2具有如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，所述CDR-H3具有如SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列，所述CDR-L1的具有如SEQ ID NO.13所示的氨基酸序列，所述CDR-L2的具有如SEQ ID NO.16所示的氨基酸序列，所述CDR
4.根据权利要求1所述的抗体，其中，所述CDR-H1具有如SEQ ID NO.5的所示的氨基酸序列，所述CDR-H2具有如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，所述CDR-H3具有如SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列，所述CDR-L1的具有如SEQ ID NO.14所示的氨基酸序列，所述CDR-L2的具有如SEQ ID NO.17所示的氨基酸序列，所述CDR-L3的具有如SEQ ID NO.20所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的单克隆抗体，其中，所述单克隆抗体包含抗体重链可变区HCVR和抗体轻链可变区LCVR，其中：
6.根据权利要求5所述的单克隆抗体，其中，所述抗体重链可变区HCVR具有如SEQ IDNO.21所示的氨基酸序列；
7.根据权利要求5所述的单克隆抗体，其中，所述抗体重链可变区HCVR具有如SEQ IDNO.22所示的氨基酸序列；
8.根据权利要求5所述的单克隆抗体，其中，所述抗体重链可变区HCVR具有如SEQ IDNO.23所示的氨基酸序列；
9.一种编码如权利要求1-8中任一项所述的单克隆抗体的核酸分子。
10.根据权利要求1-8中任一项所述的单克隆抗体或权利要求9所述的核酸分子所编码的抗体在制备检测和/或诊断禽多瘤病毒感染的动物的试剂中的应用。
11.一种用于检测和/或诊断禽多瘤病毒感染的试剂盒，其包括：权利要求1-8中任一项所述的单克隆抗体或权利要求9所述的核酸分子所编码的抗体，优选所述试剂盒为基于间接免疫荧光检测法的试剂盒。
...【技术特征摘要】
1.一种结合apv结构蛋白vp4的单克隆抗体，其中，包含三个重链互补决定区(cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3)和三个轻链互补决定区(cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3)，其中：
2.根据权利要求1所述的抗体，其中，cdr-h1具有如seq id no.3所示的氨基酸序列，所述cdr-h2具有如seq id no.6所示的氨基酸序列，所述cdr-h3具有如seq id no.9所示的氨基酸序列，所述cdr-l1的具有如seq id no.12所示的氨基酸序列，所述cdr-l2的具有如seqid no.15所示的氨基酸序列，所述cdr-l3的具有如seq id no.18所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的抗体，所述cdr-h1具有如seq id no.4的所示的氨基酸序列，所述cdr-h2具有如seq id no.7所示的氨基酸序列，所述cdr-h3具有如seq id no.10所示的氨基酸序列，所述cdr-l1的具有如seq id no.13所示的氨基酸序列，所述cdr-l2的具有如seq id no.16所示的氨基酸序列，所述cdr-l3的具有如seq id no.19所示的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的抗体，其中，所述cdr-h1具有如seq id no.5的所示的氨基酸序列，所述cdr-h2具有如seq id no.8所示的氨基酸序列...
【专利技术属性】
技术研发人员：毛娅卿，翟天舒，王嘉，汪溪，闫佳佳，孔冬妮，邓永，陈小云，薛青红，
申请(专利权)人：中国兽医药品监察所，
类型：发明
国别省市：
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