【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物医药领域，具体涉及一种用于预防猪瘟的mrna纳米脂质体颗粒及其制备、检测方法。
技术介绍
1、猪瘟（classical swine fever，csf）是由猪瘟病毒（classical swine fevervirus）引起的猪和野猪的一种高度接触性、高致死性传染病。猪瘟是世界动物卫生组织（world organisation for animal health，woah ）规定的须申报的疫病。该病以发病急、持续高热、全身广泛性出血和白细胞减少为主要特征，发病率和死亡率高。
2、csfv属于黄病毒科瘟病毒属，是单股正链rna病毒，基因组大小为12.3kb，由中间的开放阅读框（opening reading frame，orf）及两侧的5’和3’非编码区（untranslatedregions，utr）构成，其orf编码3898个氨基酸并形成多聚蛋白前体，随后在宿主细胞和病毒自身特异性蛋白酶的作用下裂解成12个成熟的蛋白，包括4种结构蛋白（c、erns、e1、e2）和9种非结构蛋白（npro、p7、ns2-3、ns2、ns3、ns4a、ns4b、ns5a和ns5b）。在编码的结构蛋白中，c蛋白为衣壳蛋白，具有保护和转录调节作用，erns和e2蛋白均为囊膜糖蛋白，两者囊括了csfv的大部分抗原表位，其中e2蛋白是csfv的主要保护抗原。
技术实现思路
1、近年来，随着猪瘟强制免疫的推行和猪瘟c株活疫苗的应用，猪瘟疫情得到有效控制，猪瘟净化已提上日程。由于活疫苗
2、本申请提供如下技术方案。
3、1、一种信使核糖核酸(mrna)，其中，所述mrna包含开放阅读框(orf)，所述开放阅读框(orf)编码囊膜糖蛋白，所述囊膜糖蛋白具有猪瘟病毒（csfv）的抗原表位。
4、2、根据项1所述的mrna，其中，所述囊膜糖蛋白为e2蛋白，
5、优选所述e2蛋白包含seq id no:1的氨基酸序列，或相对于seq id no:1的氨基酸序列以下位点的一个或多个突变：第27位，第63位，第81位，第134位，第173位和第290位。
6、3、根据项2所述的mrna，其中，所述第27位的氨基酸突变为脯氨酸，
7、所述第63位的氨基酸突变为脯氨酸，
8、所述第81位的氨基酸突变为脯氨酸，
9、所述第134位的氨基酸突变为脯氨酸，
10、所述第173位的氨基酸突变为脯氨酸，
11、所述第290位的氨基酸突变为脯氨酸。
12、4、根据项3所述的mrna，其中，所述e2蛋白包含seq id no:2的氨基酸序列。
13、5、根据项1所述的mrna，其中，所述rna还包含5’非编码区(5’utr)和3’非编码区(3’utr)。
14、6、根据项5所述的mrna，其中，所述rna中从5’端到3’端依次包括5’端帽子结构、5’非编码区(5’utr)、开放阅读框(orf)、3’非编码区(3’utr)以及多聚腺嘌呤尾(polya)。
15、7、根据项1所述的mrna，其中，所述mrna为未修饰或经修饰的；
16、优选地，所述修饰包括：假尿苷三磷酸修饰或n1-甲基假尿苷三磷酸修饰。
17、8、一种编码项1~7任一项所述mrna的dna分子。
18、9、一种药物组合物，其中，包括载体以及项1~7任一项所述的mrna或项8所述的dna。
19、10、根据项9所述组合物，其中，所述载体包括病毒载体或非病毒载体；
20、所述病毒载体选自腺相关病毒(aav)载体、腺病毒(ad)载体、慢病毒(lv)载体或单纯疱疹病毒(hsv)载体；
21、所述非病毒性载体选自质粒、阳离子脂质体、脂质体纳米颗粒(lnp)、脂质体、聚合物基载体、类病毒颗粒或细胞外囊泡；
22、优选为脂质体纳米颗粒(lnp)。
23、11、根据项10所述的组合物，其中，所述载体为脂质体纳米颗粒，所述mrna与所述脂质体纳米颗粒(lnp)的摩尔比为1:2至1:2，优选为1:5。
24、12、根据项10所述的组合物，其中，所述脂质体纳米颗粒包含peg修饰的脂质体、非阳离子脂质体、固醇、可电离的阳离子脂质体或其任何组合；
25、优选地，所述peg修饰的脂质是1，2二肉豆蔻酰基-sn-甘油或甲氧基聚乙二醇(peg2000 dmg)，
26、所述非阳离子脂质是1 ,2二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)，
27、所述固醇是胆固醇；
28、所述可电离的阳离子脂质选自化合物sm-102、1,2-二油酰基-3-三甲基铵丙烷（dotap）、cpd-18或4-(n,n-二甲基氨基)丁酸（二亚油基）甲酯（dlin-mc3-dma）中的一种，其中所述化合物sm-102具有如下结构：
29、 化合物sm-102 ；
30、所述1,2-二油酰基-3-三甲基铵丙烷（dotap）具有如下结构：
31、；
32、所述4-(n,n-二甲基氨基)丁酸（二亚油基）甲酯（dlin-mc3-dma）具有如下结构：
33、 。
34、13、一种蛋白，其中，所述蛋白包含项1~7任一项所述的mrna编码得到的氨基酸序列。
35、14、一种含有项8所述的dna分子的重组质粒。
36、15、一种mrna药物，其中，所述mrna药物包含项1~7任一项所述的mrna、项9~12任一项所述的药物组合物、项13所述的蛋白、项8所述的dna分子或项14所述的重组质粒。
37、16、一种根据项1~7任一项所述的mrna，或项9~12任一项所述的药物组合物、或项13任一项所述的蛋白，或项8所述的dna分子，或项14所述的重组质粒在制备预防猪瘟的药物中的用途。
38、在本申请提供的mrna，在体内利用自身的原料和翻译机制可以合成囊膜糖蛋白，通过该囊膜糖蛋白可同时刺激机体的体液免疫与细胞免疫，使宿主获得较为持久和坚实的免疫保护。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种mRNA，其中，所述mRNA包含开放阅读框，所述开放阅读框编码囊膜糖蛋白，所述囊膜糖蛋白具有猪瘟病毒的抗原表位；
2.根据权利要求1所述的mRNA，其中，所述第27位的氨基酸突变为脯氨酸，
3.根据权利要求2所述的mRNA，其中，所述E2蛋白包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的mRNA，其中，所述RNA中从5’端到3’端依次包括5’端帽子结构、5’非编码区、开放阅读框、3’非编码区以及多聚腺嘌呤尾；或者
5.一种编码权利要求1~4任一项所述mRNA的DNA分子。
6.一种药物组合物，其中，包括载体以及权利要求1~4任一项所述的mRNA或权利要求5所述的DNA。
7.根据权利要求6所述组合物，其中，所述载体包括病毒载体或非病毒载体；
8.根据权利要求7所述的组合物，其中，所述载体为脂质体纳米颗粒，所述mRNA与所述脂质体纳米颗粒的摩尔比为1:2至1:2；或
9.一种蛋白，其中，所述蛋白包含权利要求1~4任一项所述的mRNA编码得到的氨基酸序列。>
10.一种mRNA药物，其中，所述mRNA药物包含权利要求1~4任一项所述的mRNA、权利要求6~8任一项所述的药物组合物、权利要求9所述的蛋白、权利要求5所述的DNA分子。
11.一种根据权利要求1~4任一项所述的mRNA，或权利要求6~8任一项所述的药物组合物、或权利要求9任一项所述的蛋白，或权利要求5所述的DNA分子在制备预防猪瘟病的药物中的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种mrna，其中，所述mrna包含开放阅读框，所述开放阅读框编码囊膜糖蛋白，所述囊膜糖蛋白具有猪瘟病毒的抗原表位；
2.根据权利要求1所述的mrna，其中，所述第27位的氨基酸突变为脯氨酸，
3.根据权利要求2所述的mrna，其中，所述e2蛋白包含seq id no:2的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的mrna，其中，所述rna中从5’端到3’端依次包括5’端帽子结构、5’非编码区、开放阅读框、3’非编码区以及多聚腺嘌呤尾；或者
5.一种编码权利要求1~4任一项所述mrna的dna分子。
6.一种药物组合物，其中，包括载体以及权利要求1~4任一项所述的mrna或权利要求5所述的dna。
7.根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘业兵，夏应菊，杨波，陈紫昱，徐璐，王明伟，李琰，曾昊，赵俊杰，李佳昕，李芳韬，邹兴启，朱元源，
申请(专利权)人：中国兽医药品监察所，
类型：发明
国别省市：
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