骨肽注射液的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种骨肽注射液的制备方法。它采用冷的丙酮和酸碱沉淀去除杂蛋白，并通过５０ＫＤ、１０ＫＤ，５ＫＤ超滤膜多级超滤，既能保证杂蛋白的彻底去除，又能有效地控制高分子量物质，使得骨肽注射液中得高分子物质少于２．１％，大大低于国家标准更有效保证制剂的安全性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物制药领域技术，具体涉及一种。
技术介绍
骨肽注射液，曾用名骨宁注射液，系由健康猪或胎牛四肢骨中提取制成的无菌水 溶液，其主要成分为有机钙、磷、无机钙、无机盐、微量元素、氨基酸等。本品具有调节骨代 谢，刺激成骨细胞增殖，促进新骨形成，以及调节钙、磷代谢，增加骨钙沉积，防止骨质疏松。目前，已公开了一些有关骨肽的制备工艺，是经热压提取、酸碱沉淀去蛋白、离心 过滤、超滤、浓缩等过程。通常包括以下方法(1)将猪四肢骨破碎后加水热压提取；(2)酸 碱沉淀，离心去蛋白；(3)酒精沉淀，离心去蛋白；(4)离心液经10000分子量左右的超滤膜 超滤得骨肽(5)根据骨肽含量加注射用水配制注射液制剂。上述的工艺方法未经过活性炭除热原，不能保证临床使用安全性；再者未经过多 级超滤去除大分子物质，使制剂产品易引起过敏反应；其次注射液制剂中未添加稳定剂，注 射液中氨基酸、小肽类物质易发生聚合为大分子物质而析出致使制剂不稳定，也易引起过 敏反应。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种，以克服现有技术的不足。本专利技术的技术方案为，它是将去除的脂肪的猪或胎牛的 四肢骨用水洗净后破碎，加所述碎骨4倍重量的纯化水加温在115-121°C，保温2小时，冷却 至室温的提取液；过滤提取液，得第一上清液，将第一上清液在0-5°C存放净置，除去上层 脂肪得第二提取液；将第二提取液浓缩至原体积的1/3 1/5得浓缩液；将浓缩液按体积 比1 1比例加入-10 -20°C预冷的冷丙酮，在不高于-20°C 5°C的低温环境下静置， 分离，得第二上清液；第二上清液浓缩至无丙酮得第二浓缩液；调节第二浓缩液得PH值至 3. 0 4. 5，在90 130°C保温后，冷却至室温后分离得第三上清液；调节第三上清液pH值 至8. 0 8. 5，90 130°C保温后，冷却至室温后分离得第四上清液；调节第四上清液pH值 至7. 2 7. 5得第三提取液；在第三提取液中加入活性炭，在75 85°C搅拌后过滤脱碳； 过滤液先后通过50KD、10KD和5KD超滤膜超滤得骨肽溶液；在骨肽溶液中加入中加注射用 水调节至每毫升溶液中含骨肽不少于6mg ；加入稳定剂，灭菌得骨肽注射液。加入稳定剂吐温-80至每毫升溶液中的稳定剂重量含量为1-2%。。本专利技术法采用丙酮和酸碱沉淀去除杂蛋白，较传统工艺能更有效去除各类杂蛋 白，特别是采用-10 -20°C预冷丙酮以及多级超滤，使得骨肽注射液中得高分子物质少于 2. 1%，大大低于国家标准5.0%，更有效保证制剂的安全性；采用活性炭吸附工艺能有效 除热原，进一步保证了制剂临床使用的安全性；先后通过50KD、10KD，5KD超滤膜多级超滤， 既能保证杂蛋白的彻底去除，又能有效地控制高分子量物质，保证临床安全性；制剂配料过 程中加入吐温-80作稳定剂，能有效得避免制剂在储存过程中氨基酸、小肽类物质等聚合为大分子物质析出，影响制剂的澄明度，保证产品长时间储存过程的稳定，同时降低过敏反应发生率。具体实施例方式取新鲜的猪(或胎牛)四肢骨，剥离其附着的脂肪，用饮用水和纯化水先后分别清 洗三次，然后将其破碎。将破碎的猪(或胎牛)四肢骨与其4倍重量的纯化水加入反应罐中，在121°C，保 温2小时，然后冷却至室温。将提取液用纱布过滤弃沉渣，上清液置0-5°C存放12小时以上，除去上层脂肪。将去脂后的提取液减压真空(温度70-80°C ；真空度-0. 03 _0. OSMPa)浓缩至 原体积的1/4。将浓缩液按体积比1 1比例加入-10 _20°C预冷的冷丙酮，在不高于5°C的低 温环境下静置1-2小时后，迅速离心，弃沉渣取上清液。上清液减压减压真空(温度50-60°C ；真空度-0. 03 -0. 08MPa)浓缩至无丙酮， 同时回收丙酮。浓缩液在不断搅拌下用10%盐酸调节pH值至4.0，100°C保温45分钟，冷却至室 温后离心，弃沉渣取上清液。上清液再用50%氢氧化钠溶液调节pH值8. 5，100°C保温45分钟，冷却至室温后 离心，弃沉渣取上清液。上清液在不断搅拌下用10%的稀盐酸调pH值7. 2，然后加入溶液总体积0. 5%的 活性炭，开启夹层蒸汽升温到80°C，搅拌30分钟后用蔡氏滤器过滤脱碳。然后用50KD、10KD超滤膜逐级超滤澄清后得澄清液。澄清液再用5KD超滤膜超滤得骨肽溶液。制剂将骨肽按质量标准方法测定多肽含量，加注射用水调节至每毫升含骨肽不 少于6mg，同时加入稳定剂吐温-80至每毫升含量为1-2%。，然后灌装、灭菌后即得骨肽注射 液。产品检测对上述制备的产品的检测结果如下表1检测结果表1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种骨肽注射液的制备方法，它是将去除的脂肪的猪或胎牛的四肢骨用水洗净后破碎，加所述碎骨４倍重量的纯化水加温在１１５－１２１℃，保温２小时，冷却至室温的提取液；过滤提取液，得第一上清液，将第一上清液在０－５℃存放净置，除去上层脂肪得第二提取液；将第二提取液浓缩至原体积的１／３～１／５得浓缩液；将浓缩液按体积比１∶１比例加入－１０～－２０℃预冷的冷丙酮，在不高于－２０℃～５℃的低温环境下静置，分离，得第二上清液；第二上清液浓缩至无丙酮得第二浓缩液；调节第二浓缩液得ＰＨ值至３．０～４．５，在９０～１３０℃保温后，冷却至室温后分离得第三上清液；调节第三上清液ｐＨ值至８．０～８．５，９０～１３０℃保温后，冷却至室温后分离得第四上清液；调节第四上清液ｐＨ值至７．２～７．５得第三提取液；在第三提取液中加入活性炭，在７５～８５℃搅拌后过滤脱碳；过滤液先后通过５０ＫＤ、１０ＫＤ和５ＫＤ超滤膜超滤得骨肽溶液；在骨肽溶液中加入中加注射用水调节至每毫升溶液中含骨肽不少于６ｍｇ；加入稳定剂，灭菌得骨肽注射液。

【技术特征摘要】
一种骨肽注射液的制备方法，它是将去除的脂肪的猪或胎牛的四肢骨用水洗净后破碎，加所述碎骨4倍重量的纯化水加温在115 121℃，保温2小时，冷却至室温的提取液；过滤提取液，得第一上清液，将第一上清液在0 5℃存放净置，除去上层脂肪得第二提取液；将第二提取液浓缩至原体积的1/3～1/5得浓缩液；将浓缩液按体积比1∶1比例加入 10～ 20℃预冷的冷丙酮，在不高于 20℃～5℃的低温环境下静置，分离，得第二上清液；第二上清液浓缩至无丙酮得第二浓缩液；调节第二浓缩液得PH值至3.0～4.5，在90～130℃保...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕家燕，
申请(专利权)人：武汉华龙生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]