【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物合成，具体而言，涉及形成l-异亮氨酸-l-苏氨酸(叔丁酯)-l-天冬氨酸(叔丁酯)-叔丁酯的合成方法。
技术介绍
1、人胰高血糖素样肽-2(glp-2)的二串体蛋白及其构建方法，将人胰高血糖素样肽-2的氨基酸片段的第二位突变并应用连接肽将其两个片段串联起来，模拟glp-2二聚体结构，应用人工合成的方法获得了其二串体蛋白的编码基因，将编码基因克隆入pet22b(+)原核表达载体，转化大肠杆菌bl21，在大肠杆菌中高效表达，经过硫酸铵分段盐析，阴离子交换柱层析获得了纯化的重组目的蛋白。该重组目的蛋白可以刺激caco-2细胞，显著的促进caco-2细胞的增殖，表明人胰高血糖素样肽-2二串体蛋白具有天然生物学活性，为人glp-2的进一步研究和广泛应用奠定基础。
2、其中，l-异亮氨酸-l-苏氨酸(叔丁酯)-l-天冬氨酸(叔丁酯)-叔丁酯是glp-2的一个重要片段，那么在利用化学合成glp-2的过程中l-异亮氨酸-l-苏氨酸(叔丁酯)-l-天冬氨酸(叔丁酯)-叔丁酯的纯度等对glp-2的合成有显著影响。
3、鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供形成l-异亮氨酸-l-苏氨酸(叔丁酯)-l-天冬氨酸(叔丁酯)-叔丁酯的合成方法。本专利技术实施例提供的制备方法可以利用化学合成方法合成得到l-异亮氨酸-l-苏氨酸(叔丁酯)-l-天冬氨酸(叔丁酯)-叔丁酯，且得到的产物纯度高，杂质含量低，特别是异构体的含量低。
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3、第一方面，本专利技术提供一种形成l-异亮氨酸-l-苏氨酸(叔丁酯)-l-天冬氨酸(叔丁酯)-叔丁酯的合成方法，包括：将保护基-叔丁基-l-苏氨酸盐、tbtu、hobt、碱性物质和l-天门冬氨酸二叔丁酯盐酸盐混合进行缩合反应形成中间体1；
4、脱除所述中间体1中的保护基形成中间体2；
5、将所述中间体2与tbtu、hobt、碱性物质和(2r，3r)-2-(((保护基)羰基)氨基)-3-甲基戊酸混合进行缩合反应形成中间体3；
6、脱除所述中间体3中的保护基。
7、在可选的实施方式中，形成所述中间体1的步骤包括：将保护基-叔丁基-l-苏氨酸盐、tbtu、hobt、碱性物质和酰胺类溶剂混合形成混合溶液，而后将所述混合溶液降温至5-10℃，加入所述l-天门冬氨酸二叔丁酯盐酸盐，保持温度搅拌45-60分钟，而后自然升温至20-30℃反应。
8、在可选的实施方式中，所述保护基-叔丁基-l-苏氨酸盐中的保护基选自cbz、fmoc、bn、pmb和trt中的任意一种；
9、优选地，所述保护基-叔丁基-l-苏氨酸盐选自n-苄氧羰基-o-叔丁基-l-苏氨酸二环己胺盐；
10、优选地，所述酰胺类溶剂选自dmf和dma；
11、优选地，所述碱性物质选自有机碱，优选为dipea；
12、优选地，所述保护基-叔丁基-l-苏氨酸盐和所述l-天门冬氨酸二叔丁酯盐酸盐的摩尔比为1：(1.1-1.2)；
13、所述保护基-叔丁基-l-苏氨酸盐与tbtu和hobt的摩尔比为1：(1.15-1.25)：(1.03-1.08)；
14、所述保护基-叔丁基-l-苏氨酸盐与所述碱性物质的摩尔比为1：1.5-2.5。
15、在可选的实施方式中，形成所述中间体2的步骤包括：将所述中间体1与钯碳在氢气氛围下反应脱除保护基；
16、优选地，将所述中间体1、钯碳和酯类溶剂混合，氢气置换多次，并在2-4mpa，20-30℃的条件下反应。
17、在可选的实施方式中，所述酯类溶剂选自c2-c8酯类溶剂，优选为c2-c4酯类溶剂，更优选为乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲酸甲酯和甲酸乙酯；
18、优选地，所述钯碳为5％钯碳；
19、优选地，所述5％钯碳的用量为8-12％。
20、在可选的实施方式中，形成中间体3的步骤包括：将(2r，3r)-2-(((保护基)羰基)氨基)-3-甲基戊酸、tbtu、hobt、碱性物质和酰胺类溶剂混合，而后降温至5-10℃，加入中间体2保持温度搅拌45-60分钟，而后自然升温至20-30℃反应。
21、在可选的实施方式中，所述(2r，3r)-2-(((保护基)羰基)氨基)-3-甲基戊酸中的保护基选自cbz、fmoc、bn、pmb和trt中的任意一种；
22、优选地，所述(2r，3r)-2-(((保护基)羰基)氨基)-3-甲基戊酸为(2r，3r)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-甲基戊酸；
23、优选地，所述酰胺类溶剂选自dmf和dma；
24、优选地，所述碱性物质选自有机碱，优选为dipea；
25、优选地，所述中间体2与所述(2r，3r)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-甲基戊酸的摩尔比为1：1.1-1.2；
26、优选地，所述中间体2与tbtu和hobt的摩尔比为1：(1.15-1.25)：(1.03-1.08)；
27、优选地，所述中间体2与所述碱性物质的摩尔比为1：1.5-2.5。
28、在可选的实施方式中，所述中间体3脱除保护基的步骤包括：将所述中间体3与钯碳在氢气氛围下反应脱除保护基；
29、优选地，将所述中间体3、钯碳和酯类溶剂混合，氢气置换多次，并在2-4mpa，20-30℃的条件下反应。
30、在可选的实施方式中，所述酯类溶剂选自c2-c8酯类溶剂，优选为c2-c4酯类溶剂，更优选为乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲酸甲酯和甲酸乙酯；
31、优选地，所述钯碳为5％钯碳；
32、优选地，所述5％钯碳的用量为8-12％。
33、在可选的实施方式中，形成所述中间体1的缩合反应结束后，而后对反应体系进行后处理；
34、其中，后处理包括：对所述反应体系进行萃取后收集有机相，再洗涤、干燥和过滤。
35、本专利技术具有以下有益效果：本专利技术实施例通过化学合成便可以得到l-异亮氨酸-l-苏氨酸(叔丁酯)-l-天冬氨酸(叔丁酯)-叔丁酯，且产物收率和纯度均高，杂质含量低，适合于工业应用。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种L-异亮氨酸-L-苏氨酸(叔丁酯)-L-天冬氨酸(叔丁酯)-叔丁酯的合成方法，其特征在于，包括：将保护基-叔丁基-L-苏氨酸盐、TBTU、HOBT、碱性物质和L-天门冬氨酸二叔丁酯盐酸盐混合进行缩合反应形成中间体1；
2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，形成所述中间体1的步骤包括：将保护基-叔丁基-L-苏氨酸盐、TBTU、HOBT、碱性物质和酰胺类溶剂混合形成混合溶液，而后将所述混合溶液降温至5-10℃，加入所述L-天门冬氨酸二叔丁酯盐酸盐，保持温度搅拌45-60分钟，而后自然升温至20-30℃反应。
3.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，所述保护基-叔丁基-L-苏氨酸盐中的保护基选自Cbz、Fmoc、Bn、Pmb和Trt中的任意一种；
4.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，形成所述中间体2的步骤包括：将所述中间体1与钯碳在氢气氛围下反应脱除保护基；
5.根据权利要求4所述的合成方法，其特征在于，所述酯类溶剂选自C2-C8酯类溶剂，优选为C2-C4酯类溶剂，更优选为乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲酸甲酯和甲酸
6.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，形成中间体3的步骤包括：将(2R，3R)-2-(((保护基)羰基)氨基)-3-甲基戊酸、TBTU、HOBT、碱性物质和酰胺类溶剂混合，而后降温至5-10℃，加入中间体2保持温度搅拌45-60分钟，而后自然升温至20-30℃反应。
7.根据权利要求6所述的合成方法，其特征在于，所述(2R，3R)-2-(((保护基)羰基)氨基)-3-甲基戊酸中的保护基选自Cbz、Fmoc、Bn、Pmb和Trt中的任意一种；
8.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述中间体3脱除保护基的步骤包括：将所述中间体3与钯碳在氢气氛围下反应脱除保护基；
9.根据权利要求8所述的合成方法，其特征在于，所述酯类溶剂选自C2-C8酯类溶剂，优选为C2-C4酯类溶剂，更优选为乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲酸甲酯和甲酸乙酯；
10.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，形成所述中间体1的缩合反应结束后，而后对反应体系进行后处理，
...【技术特征摘要】
1.一种l-异亮氨酸-l-苏氨酸(叔丁酯)-l-天冬氨酸(叔丁酯)-叔丁酯的合成方法，其特征在于，包括：将保护基-叔丁基-l-苏氨酸盐、tbtu、hobt、碱性物质和l-天门冬氨酸二叔丁酯盐酸盐混合进行缩合反应形成中间体1；
2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，形成所述中间体1的步骤包括：将保护基-叔丁基-l-苏氨酸盐、tbtu、hobt、碱性物质和酰胺类溶剂混合形成混合溶液，而后将所述混合溶液降温至5-10℃，加入所述l-天门冬氨酸二叔丁酯盐酸盐，保持温度搅拌45-60分钟，而后自然升温至20-30℃反应。
3.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，所述保护基-叔丁基-l-苏氨酸盐中的保护基选自cbz、fmoc、bn、pmb和trt中的任意一种；
4.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，形成所述中间体2的步骤包括：将所述中间体1与钯碳在氢气氛围下反应脱除保护基；
5.根据权利要求4所述的合成方法，其特征在于，所述酯类溶剂选自c2-c8酯类溶剂，优选为c2-c4酯类溶剂，更优...
【专利技术属性】
技术研发人员：吕晓虎，石桂远，杜松辉，周游，徐金润，
申请(专利权)人：成都普康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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