【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于抗体领域，具体涉及以白介素家族成员为靶点的新型抗体以及下游产品。
技术介绍
1、il-17为与宿主保护粘膜感染相关的关键细胞因子，也是多种自身免疫和炎症性疾病的主要致病细胞因子和药物靶标(yao,z.et al.herpesvirus saimiri encodes anew cytokine,il-17,which binds to a novel cytokine receptor.immunity 3,811-821(1995).)。il-17家族包括六个成员：il-17a、il-17b、il-17c、il-17d、il-17e和il-17f，各成员皆通过il-17受体(il-17ra至il-17re)介导其生物学功能。其中研究最多的il-17家族成员是il-17a，其通过与il-17ra和il-17rc结合来促进其生物活性。
2、白介素-17a(il-17a)是由th17辅助细胞产生的一类致炎细胞因子，通过与细胞表面的il-17受体结合可以促进t细胞的激活和刺激上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞产生多种细胞因子如il-6、il-8、gm-csf和cam-1等多种炎症因子和趋化因子从而介导炎症反应，与银屑病、强直性脊柱炎(as)和银屑病关节炎(psa)等多种自身免疫性疾病的发生发展密切相关。研究发现，特异性的阻断il-17a与其受体的结合，可以阻断炎症因子信号传递从而实现治疗银屑病等疾病的目的。目前阻断il-17的抗体药物包括中和il-17a(secukinumab和ixekizumab)或il-17
3、羊驼外周血液中存在一种天然缺失轻链的抗体，只包含一个重链可变区(vhh)和两个常规的ch2与ch3区，形成一个重链抗体。其单独克隆并表达出来的vhh结构具有与原重链抗体相当的结构稳定性以及与抗原的结合活性，是已知的可结合目标抗原的最小单位。vhh晶体为2.5nm，长4nm，分子量只有15kda，此也被称作纳米抗体(nanobody，nb)。纳米抗体能像正常抗体一样与抗原等靶标紧紧结合，但不像单链抗体那样相互黏连聚集成块。纳米抗体不仅分子量只是普通抗体的1/10，临床使用更加安全，而且化学性质也更加灵活、稳定性好、可溶性高、表达容易且容易偶联其他分子，因此研发il-17a纳米抗体可能克服传统抗体的缺点，具有广阔的前景。
4、纳米抗体的cdr3长度比一般抗体的cdr3长，在一定的程度上弥补了因轻链缺失而造成的结合力下降，从而使其具有较强的抗原结合能力(cai h,yao h,li t,et al.animproved fluorescent tag and its nanobodies for membrane protein expression,stability assay,and purification.commun biol,2020,3(1):753.)。纳米抗体由互补决定区和骨架区组成。互补决定区包括cdr1、cdr2和cdr3。骆驼类动物体内b细胞分化，vdj重排产生的重组基因参与cdr3区编码。因此，cdr3区与纳米抗体的特异性相关。纳米抗体cdr3区3-28个氨基酸的长度范围保障了纳米抗体库的库容。骨架区包括fr1、fr2、fr3和fr4，fr2上存在4个亲水性氨基酸突变，提高了水溶性。cdr1与cdr3间的特殊二硫键，增强了抗体在高压、高温、变性剂等条件下的稳定性，有利于纳米抗体的生产保存，也为新的给药方式创造了可能。
5、现有技术中对于抗il-7纳米抗体研究较少，仍存在较大的开发空间。
6、基于抗il-17a抗体开发筛选出的9个单域抗体(已另案申请)，进行进一步的技术开发，获得了12个亲和力、阻断效果和稳定性相对提升的单域抗体组合，基于专利法单一性的相关规定，对12个不同单域抗体组合分别请求保护。
7、本专利技术是针对上述12个单域抗体组合抗体之一所进行的专利申请。
8、基于以上，还开发了基因修饰干细胞技术以及后续的应用技术，基于专利法单一性的相关规定，对不同的基因修饰干细胞以及不同的应用分别请求保护。
9、为便于理解本专利技术技术方案，可选地参阅本项目其他专利申请文件。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种新型抗体以及下游产品。
2、本文所用的术语“高变区”、“超变区”、“互补决定区”、“hvr”或“cdr”，是指在抗体可变结构域区域中序列上高变和/或形成结构上限定的环(“高变环”)的区域。通常，天然四链抗体包含六个hvr或cdr：三个存在于vh中(h1、h2、h3)，三个存在于vl中(l1、l2、l3)。基于chothia定义规则，示例性cdr(lcdr1、lcdr2、lcdr3、hcdr1、hcdr2和hcdr3)位于氨基酸残基l26-l32(l1)、l50-l52(l2)、l91-l96(l3)、h26-h32(h1)、h52-h56(h2)和h96-h101(h3)处(chothia等人，j.mol.biol.196:901-917(1987))。基于kabat定义规则，示例性cdr(lcdr1、lcdr2、lcdr3、hcdr1、hcdr2和hcdr3)位于氨基酸残基l24-l34(l1)、l50-l56(l2)、l89-l97(l3)、h31-h35(h1)、h50-h65(h2)和h95-h102(h3)处(kabat等人，sequences of proteinsofimmunological interest,the fifth edtion,public health service,nationalinstitutes of health,bethesda,md(1991))。基于imgt定义规则，示例性cdr(lcdr1、lcdr2、lcdr3、hcdr1、hcdr2和hcdr3)位于氨基酸残基l27-l32(l1)、l50-l51(l2)、l89-l97(l3)、h26-h33(h1)、h51-h56(h2)和h93-h102(h3)处(honjo,t.和alt,f.w.(1995)immunoglobulin genes.academic press pp.3-443)。本领域人员公知，在本领域中可以通过多种方法来定义抗体的cdr，例如基于序列可变性的kabat定义规则、基于结构环区域位置的chothia定义规则和基于cdr移植的抗体人源化设计的参考工具(参见j molbiol.273:927-48,1997)。本领域技术人员应当理解的是，除非另有规定，否则术本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗体，其特征在于，包含：
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，氨基酸序列包含：通过在SEQ ID NO.1-6所示的氨基酸序列上进行添加、缺失、修饰和/或取代中的至少一种方式所得到的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列包含：与SEQ IDNO.1-6所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸差异的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的抗体，其特征在于，所述第一单域抗体或第二单域抗体还包括用于连接重链可变区的至少4个FR区。
5.根据权利要求4所述的抗体，其特征在于，所述重链框架区包含部分或全部选自人源、鼠源、灵长目动物源或骆驼科动物源的抗体重链框架区或其变体；
6.一种抗体，其特征在于，包括：
7.根据权利要求6所述的抗体，其特征在于，所述HCDR1具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，所述HCDR2具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，所述HCDR3具有如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序
8.根据权利要求1-7任意一项所述的抗体，其特征在于，所述的第一单域抗体和第二单域抗体的氨基酸序列直接连接；或；通过连接子间接连接。
9.根据权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述连接子为(GGGGS)n，其中n选自1、2、3、4、5或6；较佳地，所述连接子为(GGGGS)3。
10.根据权利要求1-9任意一项所述的抗体，其特征在于，所述的第一单域抗体和第二单域抗体以任选的顺序连接；或；第一单域抗体和第二单域抗体按照从N端到C端的顺序连接；或；第一单域抗体和第二单域抗体按照从C端到N端的顺序连接。
11.根据权利要求1-10任意一项所述的抗体，其特征在于，为抗IL-17A抗体。
12.包含权利要求1-11中任意一项所述的抗体的重组蛋白。
13.根据权利要求12所述的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白还包含协助表达和/或分泌，或延长体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段。
14.根据权利要求13所述的重组蛋白，其特征在于，所述生物活性蛋白或其功能片段选自免疫球蛋白Fc结构域、血清白蛋白、白蛋白结合多肽、前白蛋白、羧基末端肽、弹性蛋白样多肽、His标签、GST标签、MBP标签、FLAG标签和SUMO标签中的至少一种。
15.根据权利要求14所述的重组蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc结构域源自人抗体、鼠抗体、灵长目动物抗体或骆驼科动物抗体、或其变体；
16.一种抗体制剂，其特征在于，其包括：
17.一种试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1-11中任意一项所述的抗体、权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白或权利要求16所述的抗体制剂；
18.一种药物偶联物，其特征在于，其包括：
19.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1-11中任意一项所述的抗体或权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白。
20.包含权利要求19所述核酸分子的表达载体。
21.一种药物组合物，其特征在于，其包含权利要求1-11中任意一项所述的抗体、权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白、权利要求16所述的抗体制剂、权利要求18所述的药物偶联物、权利要求19所述的核酸分子或权利要求20所述的表达载体；
22.权利要求1-11中任意一项所述的抗体、权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白、权利要求16所述的抗体制剂、权利要求18所述的药物偶联物或权利要求21所述的药物组合物在以下用途中的至少一种：
23.根据权利要求22所述的用途，其特征在于，所述自身免疫性疾病包括白塞氏病、系统性红斑狼疮、慢性盘状红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬皮病、进行性系统性硬化症、硬皮病、多发性肌炎、皮肌炎、结节性动脉周围炎、主动脉炎综合征、恶性类风湿关节炎、类风湿关节炎、幼年特发性关节炎、脊椎关节炎、混合性结缔组织病、卡斯尔曼病、干燥综合征、成人斯蒂尔病、血管炎、过敏性肉芽肿性血管炎、过敏性血管炎、类风湿性血管炎、大血管血管炎、ANCA相关性血管炎、Cogan综合征、RS3PE综合征、颞动脉炎、风湿性多肌痛、纤维肌痛、抗磷脂抗体综合征、嗜酸性筋膜炎、IgG4相关疾病、格林巴利综合征、重症肌无力、慢性萎缩性胃炎...
【技术特征摘要】
1.一种抗体，其特征在于，包含：
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，氨基酸序列包含：通过在seq id no.1-6所示的氨基酸序列上进行添加、缺失、修饰和/或取代中的至少一种方式所得到的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列包含：与seq idno.1-6所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸差异的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的抗体，其特征在于，所述第一单域抗体或第二单域抗体还包括用于连接重链可变区的至少4个fr区。
5.根据权利要求4所述的抗体，其特征在于，所述重链框架区包含部分或全部选自人源、鼠源、灵长目动物源或骆驼科动物源的抗体重链框架区或其变体；
6.一种抗体，其特征在于，包括：
7.根据权利要求6所述的抗体，其特征在于，所述hcdr1具有如seq id no.1所示的氨基酸序列，所述hcdr2具有如seq id no.2所示的氨基酸序列，所述hcdr3具有如seq id no.3所示的氨基酸序列，所述hcdr4具有如seq id no.4所示的氨基酸序列，所述hcdr5具有如seq id no.5所示的氨基酸序列，所述hcdr6具有如seq id no.6所示的氨基酸序列。
8.根据权利要求1-7任意一项所述的抗体，其特征在于，所述的第一单域抗体和第二单域抗体的氨基酸序列直接连接；或；通过连接子间接连接。
9.根据权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述连接子为(ggggs)n，其中n选自1、2、3、4、5或6；较佳地，所述连接子为(ggggs)3。
10.根据权利要求1-9任意一项所述的抗体，其特征在于，所述的第一单域抗体和第二单域抗体以任选的顺序连接；或；第一单域抗体和第二单域抗体按照从n端到c端的顺序连接；或；第一单域抗体和第二单域抗体按照从c端到n端的顺序连接。
11.根据权利要求1-10任意一项所述的抗体，其特征在于，为抗il-17a抗体。
12.包含权利要求1-11中任意一项所述的抗体的重组蛋白。
13.根据权利要求12所述的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白还包含协助表达和/或分泌，或延长体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段。
14.根据权利要求13所述的重组蛋白，其特征在于，所述生物活性蛋白或其功能片段选自免疫球蛋白fc结构域、血清白蛋白、白蛋白结合多肽、前白蛋白、羧基末端肽、弹性蛋白样多肽、his标签、gst标签、mbp标签、flag标签和sumo标签中的至少一种。
15.根据权利要求14所述的重组蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白fc结构域源自人抗体、鼠抗体、灵长目动物抗体或骆驼科动物抗体、或其变体；
16.一种抗体制剂，其特征在于，其包括：
17.一种试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1-11中任意一项所述的抗体、权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白或权利要求16所述的抗体制剂；
18.一种药物偶联物，其特征在于，其包括：
19.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1-11中任意一项所述的抗体或权利要求12-1...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘广洋，刘拥军，张晨亮，龙浩淼，徐晓丹，李果，
申请(专利权)人：北京贝来药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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