【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及人源化的4-1bb单克隆抗体、其抗原结合片段、其药物组合物以及医药用途。
技术介绍
1、4-1bb(也称为cd137或tnfrsf9)属于tnfr超家族，分子量50-55kda，表达于t细胞、nk细胞，nkt细胞、树突细胞(dc)、tregs以及pdca+b细胞上。4-1bb与表达于apc细胞上的高亲和性配体4-1bbl结合，从而促进t细胞增殖，增强细胞因子生成，并阻止激活诱导的细胞死亡(aicd)。
2、激动性抗4-1bb单克隆抗体(mab)对各种自身免疫疾病和病毒感染具有显著的抑制作用。许多研究表明，4-1bb在类风湿性关节炎(ra)的发病机制中扮演重要角色。在ra病人中，可溶性4-1bb和4-1bbl的水平均高于健康人群，并且它们的水平与疾病严重程度相关。在抗4-1bb抗体治疗的关节炎小鼠中，大量出现共表达cd11c标记物的cd8+t细胞亚群。该cd11c+cd8+t细胞被证实是关节炎症状减轻的原因。进一步研究证实，4-1bb抗体诱导的cd11c+cd8+t细胞表达高水平的ifn-γ。实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎(eau)是一种眼血管层的炎症性疾病，可导致视力受损，甚至失明。研究表明，4-1bb抗体与一种eau诱导剂(irbp)一同给药使cd11c+cd8+ifn-g+t细胞和ido+dc大量扩增，共同抑制病原性cd4+t细胞。此外，4-1bb抗体还被用来治疗其他自身免疫疾病，包括多发性硬化(ms)、i型糖尿病(t1d)和狼疮。研究还发现，4-1bb抗体可以干扰某些病毒感染，如hsv-1，日本乙
3、4-1bb抗体体内抗肿瘤效果是melero等在1997年首次发现，抗4-1bb抗体抑制小鼠体内低免疫原性肉瘤和高免疫原性肥大细胞瘤的生长。随后，研究者们证实，4-1bb抗体单独或与其他抗肿瘤药物可发挥强大的抗肿瘤作用。当4-1bb抗体被注射至scid肿瘤小鼠时，肿瘤生长显著受到抑制。4-1bb抗体处理携带肉瘤细胞或胶质瘤细胞的小鼠，可延长小鼠的生存期并且导t细胞依赖性的致肿瘤退化。而且，4-1bb抗体还显示出在内皮肿瘤、肾细胞瘤、肺癌中的治疗作用。此外，大量研究显示，当4-1bb抗体与其他抗癌剂联合使用时，它们具有更佳的效果。例如，4-1bb抗体/pd-1抗体组合、4-1bb抗体/ctla-4抗体组合、4-1bb抗体/gm-csf组合、4-1bb抗体/cd40抗体组合、顺铂/4-1bb抗体组合、环磷酰胺/4-1bb抗体组合、4-1bb抗体/细胞因子诱导的杀伤细胞组合、4-1bb抗体/cd4+t细胞消除组合、il-2/4-1bb抗体组合，等等。当与其他抗癌剂联合使用时，4-1bb抗体介导的抗肿瘤作用会被放大，这为治疗癌症提供了新的思路。4-1bb抗体的变体，例如4-1bb抗体的scfv，也具有显著的抗肿瘤效果，肿瘤内注射抗4-1bb scfv抑制hepa 1-6肿瘤，这种抗肿瘤作用依赖于增加的ifn-γ以及t细胞对肿瘤的渗透增加。
4、但是，目前4-1bb抗体还没有上市，多项临床研究都以失败告终，体内效果不理想和严重副作用(包括肝毒性、血小板减少、白细胞减少等)是其失败的主要原因。目前仅有两项4-1bb单抗处于临床试验中，分别是百时美施贵宝公司的完全人源化的urelumab，以及辉瑞公司的pf2566。因此，有必要提供更多的4-1bb抗体以满足市场需求。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种人源化的4-1bb单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体包含：(1)重链互补决定区cdr1、cdr2、cdr3，所述cdr1包含seq id no:1或seq id no:4所示的氨基酸序列，所述cdr2包含seq id no:2或seq id no:5所示的氨基酸序列，所述cdr3包含seq id no:3所示的氨基酸序列；和(2)轻链互补决定区cdr1’、cdr2’、cdr3’，所述cdr1’包含seq id no:6所示的氨基酸序列，所述cdr2’包含seq id no:7所示的氨基酸序列，所述cdr3’包含seq id no:8所示的氨基酸序列。
2、本专利技术另一方面提供一种人源化的4-1bb单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，其中重链可变区包含seq id no:9或seq id no:10所示的氨基酸序列，轻链可变区包含seq id no:11所示的氨基酸序列。
3、本专利技术另一方面还提供一种人源化的4-1bb单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体包含重链和轻链，其中重链包含seq id no:12或seq id no:13所示的氨基酸序列，轻链包含seq id no:14所示的氨基酸序列。
4、本专利技术的另一方面还提供一种药物组合物，其包含本专利技术所述的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体。
5、本专利技术的另一方面还提供一种药品套装，所述药品套装包括独立存在的包含本专利技术的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段的第一制剂，以及独立存在的具有抗癌活性的第二制剂。所述第二制剂例如是pd-1抗体、ctla-4抗体、gm-csf、cd40抗体、顺铂、环磷酰胺、细胞因子诱导的杀伤细胞、il-2等。
6、本专利技术的另一方面还提供本专利技术所述的结合人4-1bb的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗癌症、自身免疫性疾病、炎症性疾病或病毒感染的药物中的应用。
7、本专利技术提供的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段具有广泛的医疗用途，例如用于治疗癌症、自身免疫性疾病、炎症性疾病或病毒感染。一方面，本专利技术提供一种治疗对象的癌症的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本专利技术所述的结合人4-1bb的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段。另一方面，本专利技术提供一种治疗自身免疫性疾病的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本专利技术所述的结合人4-1bb的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段。另一方面，本专利技术提供一种治疗炎症性疾病的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本专利技术所述的结合人4-1bb的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段。另一方面，本专利技术提供一种治疗病毒感染的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本专利技术所述的结合人4-1bb的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段。
8、此外，本专利技术还提供生产本专利技术的抗体或其抗原结合片段的细胞系，包含本专利技术的核苷酸的重组表达载体，以及通过培养抗体生产细胞系来制备抗体的方法。
9、本专利技术提供的人源化单克隆抗体以高度亲和性和特异性结合人4-1bb，导致t细胞增殖和tnf-γ生成均显著增加，增强和刺激人4-1bb介导的免疫反应。这些抗体可被用作抗肿瘤或抗病毒免疫响应的免疫增强剂，或者作为t细胞介导的自身免疫疾病的免疫调节剂。这些抗体也可被用作诊断试剂，用于检测癌症、自身免疫疾病或其他疾病患者的血液或组织中的人4-本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种人源化的4-1BB单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述人源化的4-1BB单克隆抗体的重链可变区为SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列所包含的重链可变区，轻链可变区为SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列所包含的轻链可变区。
2.一种人源化的4-1BB单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述人源化的4-1BB单克隆抗体的重链可变区为SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列所包含的重链可变区，轻链可变区为SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列所包含的轻链可变区。
3.一种人源化的4-1BB单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述人源化的4-1BB单克隆抗体的重链可变区为SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列所包含的重链可变区，轻链可变区为SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列所包含的轻链可变区。
4.根据权利要求1所述的人源化的4-1BB单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述人源化的4-1BB单克隆抗体的重链为SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，轻链为SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求1所述的人源
6.根据权利要求1所述的人源化的4-1BB单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自所述人源化的4-1BB单克隆抗体的scFv、(scFv)2、Fab、Fab′和F(ab′)2。
7.一种药物组合物，其包含权利要求1至6中任一项所述的人源化的4-1BB单克隆抗体或其抗原结合片段；以及药学上可接受的载体。
8.一种药物组合物，其包含权利要求1至6中任一项所述的人源化的4-1BB单克隆抗体或其抗原结合片段；以及第二抗癌剂。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，所述第二抗癌剂选自PD-1抗体、CTLA-4抗体、GM-CSF、CD40抗体、顺铂、环磷酰胺、细胞因子诱导的杀伤细胞、IL-2中的任何一种。
10.权利要求1至6中任一项所述的人源化的4-1BB单克隆抗体或其抗原结合片段或权利要求7至9中任一项所述的药物组合物在制备用于治疗癌症、自身免疫性疾病、炎症性疾病或病毒感染的药物中的应用。
11.根据权利要求10所述的应用，所述癌症选自食管癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、子宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、膀胱癌、头颈癌、子宫内膜癌、骨肉瘤、前列腺癌、神经母细胞瘤。
12.根据权利要求10所述的应用，所述自身免疫性疾病选自格雷夫斯病、多发性硬化症、自身免疫性肝病、原发性肾上腺皮质萎缩、慢性甲状炎、l型糖尿病、系统性红斑狼疮、银屑病、克罗恩病、特应性皮炎、自身免疫性溶血性贫血、重症肌无力、脱髓鞘疾病、湿疹、移植物抗宿主病、类风湿关节炎、硬皮病、干燥综合征、慢性肾炎、强直性脊柱炎、慢性活动性肝炎、萎缩性胃炎、自身免疫性肾小球肾炎、肺肾出血性综合症、特发性血小板减少性紫癜、特发性白细胞减少症、慢性甲状腺炎、恶性贫血、慢性溃疡性结肠炎。
13.根据权利要求10所述的应用，所述炎症性疾病选自关节炎、肌腱炎、动脉硬化症、风湿性多肌痛、粘液囊炎、囊性纤维化、关节骨炎、巨细胞性动脉炎、多发性肌炎、皮肌炎、天疱疮、类天疱疮、混合型结缔组织病、硬化性胆管炎、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、炎症性皮肤病、石棉肺、硅肺、尘肺病、类肉瘤病、外源性过敏性肺泡炎、肝炎、迟发型超敏反应、肺炎、呼吸道炎症、成人呼吸窘迫综合征、脑炎、速发型超敏反应、哮喘、花粉热、过敏、急性过敏反应、风湿热、膀胱炎、慢性胆囊炎、同种异体移植排斥反应、宿主抗移植物排斥反应、阑尾炎、动脉炎、细支气管炎、支气管炎、宫颈炎、胆管炎、绒毛膜羊膜炎、结膜炎、泪腺炎、皮肌炎、心内膜炎、子宫内膜炎、肠炎、上髁炎、附睾炎、筋膜炎、纤维织炎、胃炎、胃肠炎、牙龈炎、虹膜炎、喉炎、脊髓炎、心肌炎、肾炎、脐炎、卵巢炎、睾丸炎、骨炎、耳炎、胰腺炎、腮腺炎、心包炎、咽炎、胸膜炎、静脉炎、前列腺炎、鼻炎、输卵管炎、鼻窦炎、口腔炎、滑膜炎、睾丸炎、扁桃体炎、尿道炎、葡萄膜炎、阴道炎、外阴炎、脉管炎、骨髓炎、视神经炎、颞动脉炎、横贯性脊髓炎、坏死性筋膜炎、心血管炎症。
14.根据权利要求10所述的应用，与所述病毒感染相关的疾病选自视网膜炎、肠炎、传染性单核细胞增多症、霍奇金氏淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、鼻咽癌、后天性免疫缺乏综合征、上呼吸道感染、下呼吸道感染、心肌炎、脑炎、登革出血热及登革休克综合征、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、龈口炎、角膜结膜炎、皮丘...
【技术特征摘要】
1.一种人源化的4-1bb单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述人源化的4-1bb单克隆抗体的重链可变区为seq id no:9所示的氨基酸序列所包含的重链可变区，轻链可变区为seq id no:11所示的氨基酸序列所包含的轻链可变区。
2.一种人源化的4-1bb单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述人源化的4-1bb单克隆抗体的重链可变区为seq id no:10所示的氨基酸序列所包含的重链可变区，轻链可变区为seq id no:11所示的氨基酸序列所包含的轻链可变区。
3.一种人源化的4-1bb单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述人源化的4-1bb单克隆抗体的重链可变区为seq id no:12所示的氨基酸序列所包含的重链可变区，轻链可变区为seq id no:11所示的氨基酸序列所包含的轻链可变区。
4.根据权利要求1所述的人源化的4-1bb单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述人源化的4-1bb单克隆抗体的重链为seq id no:12所示的氨基酸序列，轻链为seq id no:14所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求1所述的人源化的4-1bb单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述人源化的4-1bb单克隆抗体的重链为seq id no:13所示的氨基酸序列，轻链为seq id no:14所示的氨基酸序列。
6.根据权利要求1所述的人源化的4-1bb单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自所述人源化的4-1bb单克隆抗体的scfv、(scfv)2、fab、fab′和f(ab′)2。
7.一种药物组合物，其包含权利要求1至6中任一项所述的人源化的4-1bb单克隆抗体或其抗原结合片段；以及药学上可接受的载体。
8.一种药物组合物，其包含权利要求1至6中任一项所述的人源化的4-1bb单克隆抗体或其抗原结合片段；以及第二抗癌剂。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，所述第二抗癌剂选自pd-1抗体、ctla-4抗体、gm-csf、cd40抗体、顺铂、环磷酰胺、细胞因子诱导的杀伤细胞、il-2中的任何一种。
10.权利要求1至6中任一项所述的人源化的4-1bb单克隆抗体或其抗原结合片段或权利要求7至9中任一项所述的药物组合物在制备用于治疗癌症、自身免疫性疾病、炎症性疾病或病毒感染的药物中的应用。
11.根据权利要求10所述的应用，所述癌症选自食管癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、肺癌、乳...
【专利技术属性】
技术研发人员：李庆，马梵辛，王忠，
申请(专利权)人：非同成都生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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