本发明专利技术属生物检测领域。半定量化检测黄曲霉毒素Ｂ１的多检测线免疫层析试纸条，包括纸板，纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫、样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线、检测线Ｉ、检测线ＩＩ和检测线ＩＩＩ，所述质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，所述检测线Ｉ、检测线ＩＩ和检测线ＩＩＩ分别包被有黄曲霉毒素Ｂ１－牛血清白蛋白偶联物（ＡＦＢ１－ＢＳＡ）；所述金标垫横向喷涂有纳米金标记的黄曲霉毒素Ｂ１单克隆抗体。该试纸条用于半定量化检测黄曲霉毒素Ｂ１，具有检测快速，操作简单，灵敏度高的特点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属生物检测领域，具体涉及一种半定量化检测黄曲霉毒素Bl的多检测线 免疫层析试纸条及其制备方法。
技术介绍
黄曲霉毒素主要是由黄曲霉和寄生曲霉分泌产生的次生代谢产物，是一种能引起 人畜各种损害的天然有毒化合物。在已经发现的黄曲霉毒素中黄曲霉毒素BKaflatoxin Bi，简称AFB1)是毒性最强的黄曲霉毒素，其毒性、致癌性和污染频率均居生物毒素的首 位。黄曲霉毒素污染食品及饲料后，会直接或间接进入人类食品链，威胁人类的健康 和生命安全，其危害程度与黄曲霉毒素的摄入量成正比。黄曲霉毒素Bl广泛存在于大米、 玉米、花生、芝麻、大豆、菜籽等农产品和鱼肉等食品中，为此世界各国都规定了食品及饲料 中黄曲霉毒素Bl的最大允许含量并将其作为强制性标准，因此加强对食品及饲料中黄曲 霉毒素尤其是黄曲霉毒素Bl的检测、特别是速测，以便及时了解和掌握食品及饲料的卫生 信息，对保障我国食品消费安全具有重要意义。现有技术中常用的黄曲霉毒素Bl检测技术主要有薄层层析法、精密仪器分析法、 免疫学分析法。近年来发展的免疫学分析法克服了前两者的缺点，具有特异性强、灵敏度 高、样品前处理简单、成本低、对实验人员和环境的污染危害小、适于现场批量检测等优点。 其中基于纳米金的免疫层析快速检测技术具有简便、快速、灵敏、适于现场检测的优点，具 有极大的应用价值和应用前景。但是，传统的黄曲霉毒素Bl免疫层析检测试纸条仅有一条 检测线，只能对样品中的黄曲霉毒素Bl进行定性检测，且灵敏度较低。所以研究建立针对 黄曲霉毒素Bl的多检测线免疫层析快速检测试纸条，从而实现对样品中的黄曲霉毒素Bl 高、中、低三个浓度含量的半定量检测，对监控食品和农产品中的黄曲霉毒素Bl具有重要 的意义和很高的应用价值。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种半定量化检测黄曲霉毒素Bl的多检测线 免疫层析试纸条及其制备方法。该半定量化检测黄曲霉毒素的多检测线免疫层析试纸条用 于半定量化检测黄曲霉毒素Bl，具有检测快速，操作简单，灵敏度高的特点。为解决本专利技术提出的技术问题所采用的技术方案为半定量化检测黄曲霉毒素Bl的多检测线免疫层析试纸条(见图1)，包括纸板，纸 板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫、样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接， 所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线、检测线I、 检测线II和检测线III，所述质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，所述检测线I、检测线II和 检测线III分别包被有黄曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶联物(AFBl-BSA)；所述金标垫横向喷涂有纳米金标记的黄曲霉毒素Bl单克隆抗体。按上述方案，所述的吸水垫长16-18_，宽2-4mm ；检测垫长25_30mm，宽2_4mm ；金 标垫长6-9mm，宽2_4mm ；样品垫长12_18mm，宽2_4mm，相邻各垫的交叠长度为l_3mm。按上述方案，所述的吸水垫为吸水纸。按上述方案，所述检测垫上检测线I、检测线II和检测线III距硝酸纤维素膜上沿 的距离分别为11 17mm、13 19mm、15 21mm，且每相邻两条检测线的间距最小为2mm ； 所述质控线与检测线I的距离为5 11mm。按上述方案，所述检测垫上每厘米检测线I、检测线II和检测线III上所需黄曲 霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶联物(AFBl-BSA)的包被量分别为120 600ng，40 200ng和 20 IOOng ；每厘米质控线上所需兔抗鼠多克隆抗体的包被量为200 500ng。按上述方案，所述金标垫中所用的纳米金的粒径为15 20nm。按上述方案，所述金标垫上每厘米喷涂长度所需纳米金标记的黄曲霉毒素Bl单 克隆抗体的用量为60 216ng。半定量化检测黄曲霉毒素Bl的高灵敏度免疫层析试纸条的制备方法，包括以下 步骤(1)吸水垫的制备将吸水纸剪裁即得吸水垫；(2)检测垫的制备检测线的包被将市售黄曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶联物(AFBl-BSA)配制成0. 1 0. 5mg/mL 的包被液A ；于距硝酸纤维素膜上沿11 17mm、13 19mm、15 21mm的位置，用点喷方式 将包被液A依次横向包被于硝酸纤维素膜上，得到检测线I、检测线II和检测线III，且每 条检测线之间的间距至少为2mm，每厘米检测线I、检测线II和检测线III所需的黄曲霉毒 素Bl-牛血清白蛋白偶联物(AFBl-BSA)的包被量分别为120 600ng，40 200ng和20 IOOng,再于37 40°C条件下干燥8 20分钟；质控线的包被将兔抗鼠多克隆抗体配制成0. 4 0. 6mg/mL的包被液B ；于距硝酸纤维素膜上检 测线I的距离为5 11mm，用点喷方式将包被液B横向包被于硝酸纤维素膜上，得到质控 线，每厘米质控线所需的兔抗鼠多克隆抗体的包被量为200 500ng，然后于37 40°C条 件下干燥8 20分钟；(3)样品垫的制备将玻璃纤维膜放入封闭液A中浸湿，取出，于37 40°C条件下干燥10 16小时， 得样品垫，然后置于干燥器中室温保存；(4)金标垫的制备用点喷方式将纳米金标记的黄曲霉毒素Bl单克隆抗体溶液横向喷涂于样品垫 上，每厘米喷涂长度所需纳米金标记的抗黄曲霉毒素Bl单克隆抗体的量为60 216ng，真 空冷冻干燥2 6h，即得金标垫，然后置于干燥器中室温保存；(5)半定量化检测黄曲霉毒素Bl的多检测线免疫层析试纸条的组装在纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，交叠长度为1 3mm，即得半定量化检测黄曲霉毒素Bl的多检测线免疫层析 试纸条(见图1和图2)。按上述方案，所述的包被液A为10 50mg市售黄曲霉毒素Bl-牛血清白蛋白偶 联物(AFBl-BSA)，1 2g牛血清白蛋白，1 2g蔗糖，0. 02 0. 05g叠氮化钠，0. 8g氯化 钠，0. 29g十二水磷酸氢二钠，0. 02g氯化钾，0. 02g磷酸二氢钾，加水定容至IOOmL所得；所述的包被液B为50mg兔抗鼠多克隆抗体，0. 02 0. 05g叠氮化钠，0. 8g氯化钠， 0. 29g十二水磷酸氢二钠，0. 02g氯化钾，0. 02g磷酸二氢钾，加水定容至IOOmL所得。按上述方案，所述的封闭液A为1 2g牛血清白蛋白，0. 1 0. 2mL曲拉通X-100， 0. 3g聚乙烯吡咯烷酮，2 5g蔗糖，0. 02 0. 05g叠氮化钠，0. 8g氯化钠，0. 29g十二水磷 酸氢二钠，0. 02g氯化钾，0. 02g磷酸二氢钾，加水定容至IOOmL所得。按上述方案，所述的纳米金标记的黄曲霉毒素Bl单克隆抗体溶液的制备方法为 量取50. OmL市售质量浓度为0. 01%纳米金溶液，调节纳米金溶液的pH值为5. 5 ；在搅拌 的状态下缓慢加入2mL的0. lmg/mL黄曲霉毒素Bl单克隆抗体水溶液，继续搅拌30min ；加 入质量浓度为10%的牛血清白蛋白水溶液至牛血清白蛋白的终质量浓度为1%，继续搅拌 30min ；在4°C条件下放置2h后，1500r/min离心15min，吸出上清，弃沉淀；将吸出的上清液 12000r/min离心30min，弃上清液，加入50mL标本文档来自技高网...
【技术保护点】
半定量化检测黄曲霉毒素Ｂ１的多检测线免疫层析试纸条，其特征在于：包括纸板，纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫、样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线、检测线Ⅰ、检测线Ⅱ和检测线Ⅲ，所述质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，所述检测线Ⅰ、检测线Ⅱ和检测线Ⅲ分别包被有黄曲霉毒素Ｂ１－牛血清白蛋白偶联物；所述金标垫横向喷涂有纳米金标记的黄曲霉毒素Ｂ１单克隆抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李培武，张道宏，张奇，张文，丁小霞，姜俊，陈小媚，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，
类型：发明
国别省市：83
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