本发明专利技术涉及一种正常人和哺乳动物不同组织源性原代细胞分离的多酶体系，包括０．０１２５－０．１２５％（重量）胰蛋白酶、０．０２－０．２％（重量）胶原蛋白酶Ｉ－ＩＶ、０．００１５－０．０１５％（重量）透明质酸酶、０．０２－０．２％（重量）中性蛋白酶、０．００１５－０．０１５％（重量）脱氧核糖核酸酶Ｉ、１－１０Ｕ／ｍｌ木瓜蛋白酶、０．０１５－０．１５％（重量）链霉蛋白酶、５－５０Ｕ／ｍｌ弹性蛋白酶和０．０１－０．１％（重量）分离酶中的几种，还涉及上述多酶体系的应用和形成的试剂盒，本发明专利技术的多酶体系设计合理，能高特异地、高灵敏度地分离正常人和哺乳动物不同组织源性原代细胞，分离的原代细胞成活率高、纯度高、易于冻存和复苏，可用于对药物实验性评估、对药物毒性测试、对药物治疗性判断，适于大规模推广应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及原代细胞分离
，特别涉及不同组织源性原代细胞分离技术领 域，具体是指一种正常人和哺乳动物不同组织源性原代细胞分离的多酶体系、其用途和相 关试剂盒。
技术介绍
在生物医药行业，尤其是原代细胞培养在药物研发的应用产业，利润空间大，能源 消耗小，技术水平高，是中国国家改革与发展委员会确定的政策扶持性行业，已经列入国家 改革与发展委员会2010年之前中国重点发展行业指导名录。各省政府等地方政府对该类 项目，均列入关键技术、重大项目进行扶持，在人力、财力上享受特别的优惠待遇。原代细胞指从机体组织(如正常人、病人、哺乳动物等)经特殊技术方法处理后， 而获得单个细胞并在体外培养进行，完全正确的模拟机体组织生理学功能，这种细胞称为 原代细胞。培养第1-10代以内的细胞统称为原代细胞培养。原代细胞的基本生物学特征1、与机体细胞生长的生物学特征完全一样。2、能完全正确的反映机体组织生物学特征。3、能完全正确的反映机体组织对检测实验的结果。4、能完全正确的反映机体组织对药物实验的结果。目前，国内外市场上在生物医药行业的药物研发中，细胞水平上研发绝大多数是 使用细胞系，这类细胞最大缺点是与原代细胞有明显地差异性，不能正确地反应机体组织 生物学特征和生理学功能。原代细胞的分离和培养一直是一个难点，其原因是细胞消化酶 应用问题使分离后的原代细胞不易体外成活，因为正常人和哺乳动物(如小鼠、大鼠、豚 鼠、兔、狗、猪、牛、猴)不同组织源性原代细胞对不同消化酶的反应是有差异性的，一方面 影响分离组织为单个的原代细胞，另一方面影响分离原代细胞的成活性。因而用原代细胞 评估药物研发一直是生物医药行业热点和难点。因此，需要提供一种正常人和哺乳动物不同组织源性原代细胞分离的试剂，其能 高特异地、高灵敏度地分离正常人和哺乳动物不同组织源性原代细胞，分离的原代细胞可 用于对药物实验性评估、对药物毒性测试、对药物治疗性判断。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服了上述现有技术中的缺点，提供一种正常人和哺乳动物不同 组织源性原代细胞分离的多酶体系、其用途和相关试剂盒，该多酶体系设计合理，能高特异 地、高灵敏度地分离正常人和哺乳动物不同组织源性原代细胞，分离的原代细胞成活率高、 纯度高、易于冻存和复苏，可用于对药物实验性评估、对药物毒性测试、对药物治疗性判断， 适于大规模推广应用。为了实现上述目的，在本专利技术的第一方面，提供了一种正常人和哺乳动物不同 组织源性原代细胞分离的多酶体系，其特点是，包括0.0125-0. 125% (重量)胰蛋白酶 (Trypsin)、0· 02-0. 2% (重量)胶原蛋白酶 I-IV(CollagenaseI-IV)、0· 0015-0. 015% (重 量)透明质酸酶(Hyaluronidase) ,0. 02-0. 2% (重量)中性蛋白酶(Neutral Protease)、 0. 0015-0. 015% (重量)脱氧核糖核酸酶 I (Deoxyribonuclease I)、1-lOU/ml 木瓜蛋白酶 (Papain)、0· 015-0. 15% (重量)链霉蛋白酶(Pronase)、5_50U/ml 弹性蛋白酶(Elastase) 和0.01-0. (重量)分离酶(Dispase)中的几种。例如，每毫升上述的正常人和哺乳动物不同组织源性原代细胞分离的多酶体系包 括0. 0125-0. 125 克胰蛋白酶(Trypsin)、0· 02-0· 2 克胶原蛋白酶 I-IV(CollagenaseI-IV)、 0. 0015-0. 015 克透明质酸酶(Hyaluronidase)、0· 02-0. 2 克中性蛋白酶(Neutral Protease)、0· 0015-0. 015 克脱氧核糖核酸酶 I (Deoxyribonuclease I)、1-10U 木瓜蛋 白酶(Papain)、0. 015-0. 15 克链霉蛋白酶(Pronase)、5_50U 弹性蛋白酶(Elastase)和 0. 01-0. 1 克分离酶(Dispase)。上述多酶体系可用于分离正常人和哺乳动物不同组织源性原代细胞。其中，多酶 体系至少包括上述酶的两种及以上。哺乳动物包括小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、猪、牛、猴等。胶 原蛋白酶I-IV中可以只是其中一种，也可以是其中的多种乃至全部。较佳地，多酶体系包括0.0125-0. 125% (重量)胰蛋白酶、0. 0015-0. 015% (重 量)脱氧核糖核酸酶I、l-10U/ml木瓜蛋白酶、0.015-0. 15% (重量)链霉蛋白酶、5-50U/ ml弹性蛋白酶和0.01-0. (重量)分离酶。上述多酶体系可用于正常人和哺乳动物(如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、猪、牛、猴) 不同组织源性内皮细胞、上皮细胞、肝细胞、肾细胞、角膜上皮细胞的分离。较佳地，多酶体系包括0.02-0. 2% (重量)胶原蛋白酶I-IV、0. 0015-0. 015% (重 量)脱氧核糖核酸酶I、l-10U/ml木瓜蛋白酶、0.015-0. 15% (重量)链霉蛋白酶、5-50U/ ml弹性蛋白酶和0. 01-0. 1% (重量)分离酶。上述多酶体系可用于正常人和哺乳动物(如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、猪、牛、猴) 肺组织细胞、胃肠组织细胞、腮腺、甲状腺、前列腺、乳腺、肾上腺、垂体、胰腺、羊膜细胞分罔。较佳地，多酶体系包括0.0125-0. 125% (重量)胰蛋白酶、0. 02-0. 2 % (重量) 胶原蛋白酶I-IV、0. 0015-0. 015% (重量)脱氧核糖核酸酶I、l_10U/ml木瓜蛋白酶、 0.015-0. 15% (重量)链霉蛋白酶、5-50U/ml弹性蛋白酶和0.01-0. (重量)分离酶。上述多酶体系可用于正常人和哺乳动物(如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、猪、牛、猴) 不同组织源性皮肤细胞、骨细胞、软骨组织细胞、骨骼肌细胞、平滑肌细胞、心肌细胞、脑和 神经细胞的分离。在本专利技术的第二方面，提供了上述的正常人和哺乳动物不同组织源性原代细胞分 离的多酶体系在分离正常人和哺乳动物不同组织源性原代细胞中的应用。在本专利技术的第三方面，提供了上述的正常人和哺乳动物不同组织源性原代细胞分 离的多酶体系在分离正常人和哺乳动物内皮细胞、上皮细胞、肝细胞、肾细胞或角膜上皮细 胞中的应用。在本专利技术的第四方面，提供了上述的正常人和哺乳动物不同组织源性原代细胞分4离的多酶体系在分离正常人和哺乳动物肺组织细胞、胃肠组织细胞、腮腺、甲状腺、前列腺、 乳腺、肾上腺、垂体、胰腺、羊膜细胞中的应用。在本专利技术的第五方面，提供了上述的正常人和哺乳动物不同组织源性原代细胞分 离的多酶体系在分离正常人和哺乳动物皮肤细胞、骨细胞、软骨组织细胞、骨骼肌细胞、平 滑肌细胞、心肌细胞、脑和神经细胞中的应用。在本专利技术的第六方面，提供了一种正常人和哺乳动物不同组织源性原代细胞分离 试剂盒，其特点是，包括装有上述的正常人和哺乳动物不同组织源性原代细胞分离的多酶 体系的试剂容器。本专利技术的有益效果在于1、本专利技术提供了一种正常人和哺乳动物不同组织源性原代细胞分离的多酶体系， 包括胰蛋白酶、胶原蛋白酶I-IV、透明质酸酶、中性蛋白酶、脱氧核糖核酸酶I本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种正常人和哺乳动物不同组织源性原代细胞分离的多酶体系，其特征在于，包括０．０１２５－０．１２５％（重量）胰蛋白酶、０．０２－０．２％（重量）胶原蛋白酶Ⅰ－Ⅳ、０．００１５－０．０１５％（重量）透明质酸酶、０．０２－０．２％（重量）中性蛋白酶、０．００１５－０．０１５％（重量）脱氧核糖核酸酶Ⅰ、１－１０Ｕ／ｍｌ木瓜蛋白酶、０．０１５－０．１５％（重量）链霉蛋白酶、５－５０Ｕ／ｍｌ弹性蛋白酶和０．０１－０．１％（重量）分离酶中的几种。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘东旭，
申请(专利权)人：刘东旭，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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