一种哺乳动物细胞培养基及其添加剂制造技术

本发明专利技术涉及体外培养哺乳动物细胞时所使用的培养基以及用于构成该培养基的添加剂，所述培养基在培养哺乳动物的体细胞时在不使用血清的情况下可以使哺乳动物体细胞有效增殖。通过在培养基中掺混鹿茸活性多糖，即使在培养基完全不含血清的情况下也可以使哺乳动物的体细胞有效增殖。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞培养基领域，具体地涉及体外培养哺乳动物细胞时所使用的培养基以及用于构成该培养基的添加剂。
技术介绍
哺乳动物细胞是细胞治疗和再生医学领域研究的基础。其所述细胞含有包括人在内的哺乳类的具有多分化功能的细胞以及这些细胞分化出来的细胞。推进培养这些细胞，使其快速增殖，成为该领域研究性和生产性的关键。已知哺乳动物细胞离体后，通常培养在添加了10％左右的血清的培养基中培养增殖。但是作为血清，通常来自于所培养的细胞的自体血液(例如采集了要培养的体细胞的患者血液)，或牛血清等其他来源血清。但是，使用来自自体的血清时，必须较大量地使用患者的血液，因此加重了患者的负担。而使用来自其他种的血清时，存在可能混入未知的病毒或者朊病毒等感染性病原体的问题。由于任何血清的成分都尚未完全了解，根据所使用的血清的来源或者市售产品批次的不同，其所含有的成分也可能不同，因此在大量使用血清进行培养时，难以使培养所得的细胞品质一致。因此，人们希望能够在不使用血清情况下使体细胞同样能够快速稳定增殖。目前市面上共知的无血清基础培养基有：Eagle培养基等的最小必需培养基(MEM)、Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)、最小必需培养基α(MEM-α)、间叶系细胞基础培养基(MSCBM)、Ham’s F-12和F-10培养基、DMEM/F12培养基、Williams培养基E、RPMI-1640培养基、MCDB培养基、199培养基、Fisher培养基、Iscove改良Dulbecco培养基(IMDM)、McCoy改良培养基等，其中RPMI-1640培养基由于适用性强，被广泛用于哺乳动物细胞培养。但是，由于RPMI-1640培养基往往在培养动物细胞时会添加血清，进而容易造成细胞污染或病原体侵染。同时，由于RPMI-1640培养基不具有所培养细胞种类的专一性，所以针对某些特殊细胞而言，反而造成细胞增殖能力的相对下降。
技术实现思路
专利技术所需解决的问题本专利技术的课题在于提供哺乳动物细胞培养基及其添加剂，所述培养基在培养哺乳动物细胞时，在尽可能地抑制在培养基中添加血清的情况下可以有效地使哺乳动物的体细胞增殖。用于解决课题的方法本专利技术人进行了深入的研究，结果发现：通过在培养基中掺混鹿茸活性多糖成分，可以使哺乳动物的体细胞有效增殖。从而完成了本专利技术。即，本专利技术提供哺乳动物细胞用培养基，该培养基含有鹿茸活性多糖成分。本专利技术还提供哺乳动物细胞用培养基的添加剂，该添加剂含有鹿茸活性多糖。专利技术的效果 本专利技术的培养基和培养基添加剂可以在不使用血清的条件下，有效地使哺乳动物细胞增殖。因此，可以解决由于使用血清而产生的问题。即，对患者的负担、感染性病原体的混入等问题。通过本专利技术的培养方法，可以抑制血清的使用量来培养哺乳动物细胞，可以提供稳定品质的培养体细胞。因此，所得到的培养细胞是感染性病原体混入问题被抑制到最小限度的稳定品质的培养体细胞。实施专利技术的最佳方式本说明书中，“哺乳动物细胞”是指哺乳动物细胞中除了增殖细胞以外的细胞，包括为某种目的进行特化而不会成为除此以外的细胞的分化细胞，以及具有分化为具有几种不同功能细胞能力的细胞。前者的细胞是成体的功能性细胞，包括皮肤细胞、神经细胞、肌细胞、血液系细胞、成纤维细胞、肝细胞、软骨细胞、脂肪细胞等形成生物体内各器官的细胞。后者称为干细胞，是可分化转换为上述已分化的细胞中至少一种以上的分化细胞的细胞，包含胚胎干细胞和成体干细胞。“成体干细胞”是具有分化为具有几种不同功能的细胞的能力的干细胞和前体细胞中除了胚胎干细胞以外的细胞，包括诱导多功能干细胞、造血干细胞、间叶系干细胞、神经干细胞、皮肤干细胞、肝脏干细胞、胰腺干细胞等。作为在本专利技术的培养基中培养的细胞，只要是哺乳动物的体细胞即可，没有任何限定。优先的实例可例T淋巴细胞、骨髓干细胞等成体干细胞，但并不受其限定。本专利技术的培养基中含有鹿茸活性多糖作为必须成分。鹿茸活性多糖与其它多糖相比，除具有其它活性多糖的生物功能外，还有独特的生物活性，硫酸鹿茸软骨素是其主要成分之一，同时它还含有生长因子。它们能促进骨生长、伤口愈合和治疗肿瘤。此外，通过我们的实验研究发现，鹿茸活性多糖可以促进细胞增殖，并且效果显著。鹿茸活性多糖成分的获取途径和方法也较为简单。主要经过鹿茸水浸、细胞破碎、胶体磨研磨、多次冻融、加酶水解、反复沉降等操作后，可以得到纯化的鹿茸多糖。附图说明图1是表示人血液中单个核细胞的群体倍增数量的变化(鹿茸活性多糖的浓度为0.01mM)图2是表示人血液中单个核细胞的群体倍增数量的变化(鹿茸活性多糖的浓度为0.1mM)图3是表示人血液中单个核细胞的群体倍增数量的变化(鹿茸活性多糖的浓度为5mM)图4是表示人血液中单个核细胞的群体倍增数量的变化(鹿茸活性多糖的浓度为10mM)图5是表示人血液中单个核细胞的群体倍增数量的变化(鹿茸活性多糖的浓度为100mM)图6是表示人脂肪组织源性干细胞的群体倍增数量的变化(鹿茸活性多糖的浓度为0.01mM)图7是表示人脂肪组织源性干细胞的群体倍增数量的变化(鹿茸活性多糖的浓度为0.1mM)图8是表示人脂肪组织源性干细胞的群体倍增数量的变化(鹿茸活性多糖的浓度为5mM)图9是表示人脂肪组织源性干细胞的群体倍增数量的变化(鹿茸活性多糖的浓度为10mM)图10是表示人脂肪组织源性干细胞的群体倍增数量的变化(鹿茸活性多糖的浓度为100mM)图11是表示人骨髓干细胞的群体倍增数量的变化(鹿茸活性多糖的浓度为0.01mM)图12是表示人骨髓干细胞的群体倍增数量的变化(鹿茸活性多糖的浓度为0.1mM)图13是表示人骨髓干细胞的群体倍增数量的变化(鹿茸活性多糖的浓度为5mM)图14是表示人骨髓干细胞的群体倍增数量的变化(鹿茸活性多糖的浓度为10mM)图15是表示人骨髓干细胞的群体倍增数量的变化(鹿茸活性多糖的浓度为100mM)具体实施方式为使本专利技术更加容易理解，下面结合具体实例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。需要说明的是，在下列实例中，如未进行特殊说明，以下术语和培养基的组分如下所述：基础培养基：为人工制备的含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素、脂质等细胞生长所需营养物质的培养品。本专利技术所述的基础培养基为高糖DMEM基础培养基。血清替代物：为一类商品化代替血清的培养物添加剂，成分一般确定。本专利技术所用的血清替代物是N2(一种商业化的血清替代添加剂，成分为胰岛素、转铁蛋白、孕酮、腐胺、亚硒酸钠)。鹿茸活性多糖：为本培养基的添加剂，主要是从鹿茸干细胞中提取纯化的多糖类物质。成分较为复杂。主要含有香菇多糖、虫草多糖、硫酸鹿茸软骨素以及一些生长因子等。其中，以往的实验研究表明，硫酸鹿茸软骨素是鹿茸活性多糖的最主要成分，具有促进骨质细胞生长、伤口愈合及治疗肿瘤的功效。其用于细胞培养基的组成成分报道未曾出现。培养基中的鹿茸多糖成分的浓度(含有多种时，为其总浓度)通常是0.01-100mM左右，进一步优选0.1-10mM。其中，硫酸鹿茸软骨素在培养基中的浓度优选0.1-100mM，进一步优选0.25-20mM。香菇多糖在培养基中的浓度优选为0.25-10mM，进一步优选0.5-5mM。虫草多糖在培养基中的浓度优选本文档来自技高网...

【技术保护点】
哺乳动物细胞培养基，该培养基含有鹿茸活性多糖。

【技术特征摘要】
1.哺乳动物细胞培养基，该培养基含有鹿茸活性多糖。2.权利要求1所述的培养基，该培养基为无血清培养基。3.权利要求2中所述的无血清培养基，该培养基含有血清替代物。4.权利要求2或3中任一项所述的无血清培养基，其中，血清替代物包括KSR(一种商业化的带血清培养添加剂)、N2(一种商业化的血清替代添加剂，成分为胰岛素、转铁蛋白、孕酮、腐胺、亚硒酸钠)和B27(一种用于培养神经细胞的无血清培养添加剂)等代血清培养添加剂，但不限于这几种。5.权利要求3或4中任一项所述的血清替代物，该培养基采用N2(一种商业化的血清替代添加剂，成分为胰岛素、转铁蛋白、孕酮、腐胺、亚硒酸钠)作为血清替代物。6.权利要求1或2所述的培养基，其中，鹿茸活性多糖包括：香菇多糖、虫草多糖及硫酸鹿茸软骨素。7.权利要求1-6中任一项所述的培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：翟红利，李晓宇，张红梅，张淑敏，杨小平，
申请(专利权)人：烟台赛泽生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37