本发明专利技术提供用于提高白介素-15(IL-15)在哺乳动物细胞中表达的核酸。本发明专利技术还提供在哺乳动物细胞中表达IL-15的方法，通过用包括密码子优化的IL-15序列的核酸序列转染细胞。本发明专利技术还提供表达载体，以及IL-15和IL-15受体α组合(核酸和蛋白)，所述组合增加IL-15稳定性以及体外和体内的效力。本方法用于在对个体(例如哺乳动物、人)的DNA、RNA或者蛋白给药后增强IL-15的生物利用率和生物学功效。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】用于在哺乳动物细胞中表达的密码子优化的IL-15和 IL-15Ra基因 相关专利申请的交叉引用 本申请要求享有2006年6月9日提交的美国临时专利申请60/812, 566和2006 年1月13日提交的美国临时专利申请60/758,819的权益，为所有目的其全部内容在此W 参考的方式并入本文。 专利
本专利技术设及哺乳动物细胞中提高的细胞因子表达，通过优化细胞因子基因表达的 所有步骤。 专利技术背景 白介素-15 (IL-15)是一种多效细胞因子，对先天性和获得性免疫系统非常重要 值1油，等人，切如地6阿97(2005)7:23-35)。比-15促进中性粒细胞和巨隧细胞的活化，是 树突状细胞值C)、天然杀伤（NK)细胞、NKT细胞和CD8+T细胞（Id.)的发育和功能必不可 少的。比-15在淋己和非淋己隔室作用于细胞（VanBelle和Grooten,ArchImmunol化er Exp(2005)53:115)〇 基于其多种功能和动物模型中的相对安全性，发现了IL-15给药在治疗免疫缺陷 中的用途，用于T细胞和NK细胞的体外扩增，和作为疫苗的佐剂，包括抗HIV疫苗值i油， 等人，上述；Ahmad,等人，Qi;r;rHIVRes(2005)3:261;Alpdoganandvanden&rink,Trends Immunol(2005)26:56)。例如，已经发现外源IL-15给药显著增强感染人类免疫缺陷性 病毒化IV)的获得性免疫缺陷综合征（AID巧患者的免疫细胞功能（Ahmad,等人，上述； 还可参见，Pett和Kellehe;r,Expe;rtRevAntiInfectThe;r(2003)l:83;和Ansari,等 人，ImmunolRes(2004) 29:1)。比-15给药对淋己组织生成的作用和免疫缺陷病症的治疗 也在研究中（AlpdoganandvandenE5;rink,上述）。 来自数个研究者的结果已经表明IL-15受体α的天然可溶形式是IL-15的括 抗剂（参见，Mo;rtie;r,等人，（2004)J.Immunol. 173, 1681-1688 ;Ruchatz,等人，（1998) J.Immunol. 160, 5654-566 ;和Smith,等人，（2000)J.Immunol. 165, :3444-3450)。相反，当通 过柔性氨基酸连接区融合到IL-15时，比-15受体α的sushi结构域已经被认为是IL-15 功能的体外激动剂（JBiolChem. 2006Jan20;281(3):1612-9)。可溶性白介素-15受 体α(IL-15Ra)-sushi是通过IL-15R0 / 丫的IL-15作用的选择性和有效的激动剂（参 见，ModierE,等人，JBiolChem. 2006281:1612)。 为了提供用于作为编码核酸或者蛋白给药的治疗性的单独的IL-15、或者与完整 比-15受体α或者可溶性IL-15受体α组合的IL-15,非常重要的是发展用于该细胞因子 的有效表达载体和有效表达编码核酸序列。本专利技术设及运种需要。[000引专利技术简述 本专利技术提供用于单独的白介素-15(IL-15)W及与完整IL-15受体α(IL15Ra) 或者IL15Ra的可溶形式（IL15sRa)组合的白介素-15(比-15)的高水平表达的核酸序列、 表达载体和哺乳动物细胞。本专利技术还提供用于单独的白介素-15W及与完整IL-15受体α(IL15Ra)或者IL15Ra的可溶形式（IL15sRa)组合的白介素-15在哺乳动物细胞中高水 平表达的方法。 在一个相关方面，本专利技术提供用于完整比-15受体α(IL15Ra)或者IL15Ra可溶 形式（IL15sRa)高水平表达的核酸序列、表达载体和哺乳动物细胞。本专利技术还提供用于完 整比-15受体α(IL15Ra)或者IL15Ra可溶形式（IL15sRa)高水平表达的方法。 一方面，本专利技术提供核酸序列，所述核酸序列编码与天然哺乳动物IL-15蛋白 具有至少 90%、91 %、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 序列同一性的白介 素-15 (IL-15)蛋白，其中该核酸序列与编码天然哺乳动物IL-15的核酸序列在图8所标识 的改变的核巧酸位置具有至少50%的差异。在一些实施方式中，核酸序列与编码天然哺乳 动物IL-15的核酸序列在图4和/或图6所标识的改变的密码子位置具有至少50%的差 异。在一些实施方式中，改变的核巧酸和密码子位于成熟IL-15序列。天然哺乳动物IL-15 可W是任何哺乳动物IL-15,包括人IL-15、灵长类动物IL-15、猪IL-15、小鼠IL-15,等等。 在一些实施方式中，编码IL-15的核酸序列与编码天然IL-15的核酸序列在图8 所标识的115个改变的核巧酸位置（阴影）具有至少大约55% (例如，59个核巧酸）、60% (例如，64个核巧酸）、65 % (例如，70个核巧酸）、70 % (例如，75个核巧酸）、75 % (例如， 81个核巧酸）、80% (例如，86个核巧酸）、85% (例如，91个核巧酸）、90% (例如，97个核 巧酸）、95% (例如，109个核巧酸）的差异。在一些实施方式中，编码IL-15的核酸序列与 编码天然IL-15的核酸序列在图4所标识的121个改变的密码子位置（阴影，加框或者下 划线）具有至少大约55% (例如，66个密码子）、60% (例如，73个密码子）、65% (例如， 78个密码子）、70% (例如，85个密码子）、75% (例如，91个密码子）、80% (例如，97个密 码子）、85% (例如，103个密码子）、90% (例如，109个密码子）、95% (例如，115个密码 子）的差异。 在一些实施方式中，改变的核巧酸和密码子位于成熟IL-15序列。例如，编码改进 的IL-15的核酸序列与编码天然IL-15的核酸序列在图8所标识的成熟IL-15的78个改变 的核巧酸位置（阴影）具有至少大约65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%的差异。在另 一个实施方式中，编码改进的IL-15的核酸序列与编码天然IL-15的核酸序列在图4所标 识的成熟IL-15的84个改变的密码子位置（阴影，加框或者下划线）具有至少大约65%、 70%、75%、80%、85%、90%、95% 的差异。 在一些实施方式中，核酸序列与编码天然IL-15的核酸序列在下列核巧酸位置不 同：6、9、15、18、21、22、27、30、33、49、54、55、57、60、63、69、72、75、78、81、84、87、90、93、96、 105、106、114、120、123、129、132、135、138、141、156、159、162、165、168、169、174、177、180、 183、186、189、192、195、198、204、207、210、213、216、217、219、222、228、231、237、246、252、 255、258、261、277、283、285、291、294、297、300、306、309、312、315、3本文档来自技高网...
【技术保护点】
编码白介素‑15(IL‑15)蛋白的核酸序列，所述IL‑15蛋白与天然哺乳动物的IL‑15蛋白具有至少90％的序列同一性，其中所述核酸序列与编码天然哺乳动物IL‑15的核酸序列在图8所标识的核苷酸位置具有至少50％的差异。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：芭芭拉·K·费尔博尔，乔治·N·巴甫拉吉斯，
申请(专利权)人：美国政府健康及人类服务部国立卫生研究院，
类型：发明
国别省市：美国;US
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