【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体地，本专利技术涉及一种嵌合抗原受体及其应用，更具体地，本专利技术涉及一种可同时识别两种抗原配体的嵌合抗原受体及对应核酸构建体、表达载体、转基因免疫细胞、药物组合物及其用途。
技术介绍
1、嵌合抗原受体t(chimeric antigen receptor t，car-t)细胞在血液恶性肿瘤治疗中取得了令人瞩目的效果。car分子的抗原识别区通常采用来自抗体的scfv序列，该序列通常来自鼠、兔、羊驼等种属，具有较强的免疫原性。即使对其序列进行人源化改造，仍然存在一定的免疫原性，产生抗药物抗体(ada)，削弱car-t细胞在体内的持久性。近年来，有许多新技术应用于解决该问题，例如采用天然受体蛋白序列作为感受器，以降低免疫原性。
2、nkp30受体是一种天然的nk细胞活化性受体，在nk细胞上高表达，可识别b7h6分子，进而介导细胞毒性作用。b7h6是b7家族中的一员，b7h6分子通常在多种原发肿瘤细胞上高表达，包括白血病、淋巴瘤、结直肠癌、胃癌和胰腺癌等，而在正常组织细胞上几乎不表达。目前，以nkp30胞外段作为b7h6识别的感受器，以此为基础构建的car-t细胞的功能已经在研究中得到验证。
3、nkg2d受体是另一种天然的nk细胞表面受体，主要表达于nk、cd8+t、γδt、nkt以及活化巨噬细胞表面，识别由病毒感染或细胞恶性转化而表达的应激蛋白，如mhc-i类相关蛋白、mica和micb以及巨细胞病毒ul-16结合蛋白ulbp1-5。cn109400713a专利中，将nkg2d作为胞内
4、基于以上研究和开发现状，有待于进一步研究杀伤活性高、疗效好的嵌合转换受体，以进一步提高嵌合抗原受体免疫细胞疗法的疗效。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本专利技术提供了可同时识别两种抗原配体的嵌合抗原受体及对应核酸构建体、表达载体、转基因免疫细胞、药物组合物及其用途，本专利技术的嵌合抗原受体同时靶向nkp30受体配体和nkg2d受体配体，表达本专利技术嵌合抗原受体的转基因免疫细胞，可有效识别表达nkp30受体配体和/或表达nkg2d受体配体的肿瘤细胞，即对于单一表达nkp30受体配体或nkg2d受体配体或同时表达两种受体配体的肿瘤细胞均可发挥有效的杀伤作用，尤其是可有效识别丢失nkp30或nkg2d其中一种受体配体的肿瘤细胞，防止肿瘤的免疫逃逸。由此，本专利技术的转基因免疫细胞肿瘤细胞杀伤活性高，识别谱广，体内抑瘤活性强，细胞输注剂量低，疗效好。
2、在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种嵌合抗原受体。所述嵌合抗原受体包括：
3、胞外区，所述胞外区包括第一结合片段和第二结合片段，所述第一结合片段和第二结合片段相连，所述第一结合片段为nkp30胞外段或其片段，所述第二结合片段为nkg2d胞外段或其片段；
4、跨膜区，所述跨膜区的n端与所述胞外区的c端相连；
5、胞内区，所述胞内区的n端与所述跨膜区的c端相连。
6、需要说明的是，本专利技术涉及的氨基酸序列均按照n端至c端的方式示出。
7、根据本专利技术实施例的嵌合抗原受体同时靶向nkp30受体配体和nkg2d受体配体，表达本专利技术嵌合抗原受体的转基因免疫细胞可有效识别表达nkp30受体配体和/或表达nkg2d受体配体的肿瘤细胞，即对于单一表达nkp30受体配体或nkg2d受体配体或同时表达两种受体配体的肿瘤细胞均可发挥有效的杀伤作用，尤其是可有效识别丢失nkp30或nkg2d其中一种受体配体的肿瘤细胞，防止肿瘤的免疫逃逸。由此，表达本专利技术嵌合抗原受体的转基因免疫细胞肿瘤细胞杀伤活性高，肿瘤识别谱广，体内抑瘤活性强，细胞输注剂量低，疗效好。
8、根据本专利技术的实施例，所述第一结合片段具有如seq id no：1所示的氨基酸序列或其保守修饰形式的氨基酸序列，所述第二结合片段具有如seq id no：3所示的氨基酸序列或其保守修饰形式的氨基酸序列。由此，本专利技术的嵌合抗原受体可同时靶向nkp30受体配体和nkg2d受体配体。
9、根据本专利技术的实施例，所述第一结合片段具有如seq id no：1所示的氨基酸序列，所述第二结合片段具有如seq id no：3所示的氨基酸序列。由此，本专利技术的嵌合抗原受体同时靶向nkp30受体配体和nkg2d受体配体。
10、在本文中，术语“保守修饰形式的氨基酸序列”指这样的氨基酸修饰，所述修饰不显著影响或改变包含该氨基酸序列的受体的配体结合特性，该修饰包括氨基酸置换、增加和缺失。修饰可通过例如定点诱变和pcr介导的诱变等标准技术引入本专利技术的受体中。保守氨基酸置换系其中的氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基替换的置换。在本领域中已经确定具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)，具有酸性侧链的氨基酸(如天冬氨酸、谷氨酸)，具有不带电的极性侧链的氨基酸(如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)，具有非极性侧链的氨基酸(如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)，具有β-支化侧链的氨基酸(如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)、和具有芳香侧链的氨基酸(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。
11、根据本专利技术的实施例，所述第一结合片段的c端与第二结合片段的n端相连接，或者所述第一结合片段的n端与第二结合片段的c端相连接。
12、根据本专利技术的实施例，所述胞外区进一步包括第一连接肽，所述第一结合片段和第二结合片段通过所述第一连接肽相连。由此，进一步提高本专利技术嵌合抗原受体与nkp30受体配体和nkg2d受体配体的结合能力。
13、根据本专利技术的实施例，所述第一结合片段的c端与所述第一连接肽的n端相连接，所述第一连接肽的c端与所述第二结合片段的n端相连接；或所述第二结合片段的c端与所述第一连接肽的n端相连接，所述第一连接肽的c端与所述第一结合片段的n端相连接。由此，得到的本专利技术嵌合抗原受体同时靶向nkp30受体配体和nkg2d受体配体。
14、根据本专利技术的实施例，所述第一连接肽选自(g4s)n或氨基酸序列如seq id no：5、34～39所示的连接肽的至少之一，n为不为零的整数。
15、根据本专利技术的实施例，所述第一连接肽为(g4s)n，n为2～6之间的任意整数。
16、根据本专利技术的实施例，所述第一连接肽是(g4s)3。由此，得到与nkp30受体配体和nkg2d受体配体结合能力较佳的本专利技术嵌合抗原受体。
17、根据本专利技术的实施例，所述胞外区进一步包括铰链区。由此，进一步提高本专利技术嵌合抗原受体与nkp30受体配体和nkg2d受体配体的结合能力。
18、根本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种嵌合抗原受体，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述第一结合片段具有如SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列或其保守修饰形式的氨基酸序列，所述第二结合片段具有如SEQ IDNO：3所示的氨基酸序列或其保守修饰形式的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述第一结合片段的C端与第二结合片段的N端相连接，或者所述第一结合片段的N端与第二结合片段的C端相连接；
4.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述跨膜区包括CD8a分子跨膜段或其片段；
5.一种核酸构建体，其特征在于，包括第一核酸分子，所述第一核酸分子编码权利要求1～4任一所述的嵌合抗原受体；
6.根据权利要求5所述的核酸构建体，其特征在于，进一步包括第二核酸分子，所述第二核酸分子和第一核酸分子相连，所述第二核酸分子编码第一融合蛋白或第二融合蛋白，所述第一融合蛋白包括IL-15、CD8a分子铰链区和CD8a分子跨膜区；所述第二融合蛋白包括IL-15Rα和IL-15；
7.根据权利要
8.根据权利要求7所述的核酸构建体，所述核酸构建体具有如SEQ ID NO：32或33所示的核苷酸序列。
9.一种表达载体，其特征在于，携带权利要求5～8任一项所述的核酸构建体；
10.一种转基因免疫细胞，其特征在于，所述转基因免疫细胞包括：
11.一种药物组合物，其特征在于，包括：
12.权利要求1～4任一所述的嵌合抗原受体、权要求5～7任一项所述的核酸构建体、权利要求9所述的表达载体、权利要求10所述的转基因免疫细胞或权利要求11所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗肿瘤或癌症；
...【技术特征摘要】
1.一种嵌合抗原受体，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述第一结合片段具有如seq idno：1所示的氨基酸序列或其保守修饰形式的氨基酸序列，所述第二结合片段具有如seq idno：3所示的氨基酸序列或其保守修饰形式的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述第一结合片段的c端与第二结合片段的n端相连接，或者所述第一结合片段的n端与第二结合片段的c端相连接；
4.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述跨膜区包括cd8a分子跨膜段或其片段；
5.一种核酸构建体，其特征在于，包括第一核酸分子，所述第一核酸分子编码权利要求1～4任一所述的嵌合抗原受体；
6.根据权利要求5所述的核酸构建体，其特征在于，进一步包括第二核酸分子，所述第二核酸分子和第一核酸分子相连，所述第二核酸分子编码第一融合蛋白或第二融合蛋白，所述第一融...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡渊，张彩，王烃，陈敏华，周英利，谢思奇，
申请(专利权)人：上海恩凯细胞技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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