【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学材料领域，具体涉及一种多功能纳米免疫调节制剂及其制备方法与免疫系统重塑的抗肿瘤应用。
技术介绍
1、癌症免疫疗法通过对患者自身免疫系统进行重塑来根除癌细胞，已在临床上被证明是一种具有重要应用前景的治疗策略。当前，癌症免疫疗法主要有免疫检查点阻断(icb)疗法、细胞因子疗法、癌症疫苗和嵌合抗原受体(car)t细胞疗法等，然而，这些疗法通常只通过缓解肿瘤免疫抑制微环境或激活细胞免疫反应的单一途径，以抑制肿瘤生长、转移和复发。这种单一免疫治疗效果有限，往往只在一小部分患者中具有治疗效果。
2、多通路靶向联合治疗，有望弥补单一免疫治疗的缺陷，如基于低剂量化疗可诱导肿瘤免疫原性细胞死亡(icd)的作用，可开发化疗与免疫协同的治疗方法。然而，该方式会产生过激的免疫反应，导致淋巴耗竭，或增强肿瘤的免疫抑制反应。可见，通过多种途径，一味增强抗肿瘤免疫反应，亦不能达到安全有效的抗肿瘤治疗效果。
3、免疫检查点抑制剂(ici)可阻断肿瘤的免疫抑制作用，使免疫系统得以识别并杀伤肿瘤，当前，亦有诸如pd-1,pdl-1,ido-1,cd47等靶点靶向的免疫检查点抑制剂，被开发用于临床研究。然而，仅阻断肿瘤的免疫抑制作用，亦不能使免疫系统充分发挥其抗肿瘤作用，且随之而来还会产生耐药、自身免疫相关副作用及器官毒性等。
4、为弥补激活抗肿瘤免疫反应与抑制肿瘤免疫抑制作用这两种治疗方式的缺陷，可开发在激活免疫反应的同时，阻断肿瘤免疫抑制的双重抗肿瘤免疫治疗策略。在该治疗策略中，免疫激活剂(如低剂量的化疗
5、纳米制剂因其纳米尺寸效应，具有诸如靶向输送药物到目标作用靶点、延长体内循环时间、缓控式释放药物、提高药物的稳定性和疗效、降低药物毒副作用、提高药物溶解程度和速度、利于储存和运输、可改变给药途径等特性，在多种药物的靶向递送中具有重要应用前景。金属有机框架材料(mof)是一类由金属结点与有机配体的配位作用连接而成的新型材料，其中，沸石咪唑酯骨架-8(zif-8)因其巨大的孔隙率、结构可调、易修饰、ph响应降解和良好的生物相容性，有望在药物的靶向可控递送中发挥重要作用。与载体材料相比，zif-8具有以下特点：1)zif-8由2-甲基咪唑和zn2+组成，锌是生物体内第二丰富的过渡金属，而咪唑基团是组氨酸的组成部分，生物相容性高；2)zif-8具有特殊的化学和热稳定性，在中性条件下稳定存在，而在酸性条件下容易分解，有利于ph控制载荷药物的释放；3)zif-8的合成是一种温和的仿生矿化过程，可用于包埋酶、dna和蛋白质等多种生物大分子，且不影响其生物活性。此外，zif-8载体自身具有其特殊的生物活性(如诱发自噬等)，其生物活性可与所装载的药物产生协同作用，从而发挥更强的疾病治疗作用。然而，裸露的zif-8纳米颗粒在体内仍不稳定，亦被巨噬吞噬系统清除。
6、细胞膜“隐身技术”通过在纳米颗粒表面包覆细胞膜，可使纳米颗粒模拟源细胞的表面性质，从而提高其稳定性、靶向性、长循环等性能，如基于巨噬细胞膜包被的zif-8纳米颗粒，可被用于多种药物的肿瘤或炎症靶向递送中。然而，当前未有基于巨噬细胞膜仿生化zif-8纳米载体用于抗肿瘤免疫激活及阻断免疫抑制药物的靶向共递送中，其递送过程及抗肿瘤免疫应用仍鲜有报道。
技术实现思路
1、针对上述问题，本专利技术提供了一种基于细胞膜仿生化zif-8的多功能纳米免疫调节剂系统。通过沸石咪唑啉酸盐骨架-8(zif-8)包裹化疗药物dox，负载靶向ido-1的sirna，并且给予该纳米颗粒巨噬细胞膜(raw 264.7)涂层，最终构建了mrdz仿生化多功能纳米免疫调节制剂，实现了基于icd，ido1和自噬的三通路靶向协同抗肿瘤。
2、本专利技术mrdz的多途径激活，可提高杀伤性免疫细胞在肿瘤微环境、肿瘤引流淋巴结、脾脏中的浸润及数量，同时降低抑制性免疫细胞的数量，相应细胞因子也表现出与免疫细胞相似的变化趋势，更重要的是，激活的抗肿瘤免疫响应表现出显著的免疫记忆性。这种肿瘤组织局部与全身性的免疫系统重塑，使得mrdz可有效抑制肿瘤生长，并阻碍二次接种的肿瘤生长。
3、本专利技术的技术方案如下：
4、一种多功能纳米免疫调节制剂，由金属有机框架材料包裹化疗药物并负载免疫抑制阻断剂之后，再经巨噬细胞膜包膜而得；
5、其中，
6、金属有机框架材料为zif-8；
7、化疗药物为dox(阿霉素)；
8、免疫抑制阻断剂为sirna；
9、巨噬细胞膜为raw264.7细胞中提取的细胞膜。
10、本专利技术所述的多功能纳米免疫调节制剂的制备方法，包括如下步骤：
11、(1)将六水合硝酸锌溶液和dox溶液混合，搅拌下加入2-甲基咪唑溶液，继续搅拌0.5～2h，离心，收集沉淀，得到dz载药纳米颗粒；
12、优选六水合硝酸锌溶液的浓度为2mg/ml，溶剂为纯水；
13、优选dox溶液的浓度为1mg/ml，溶剂为纯水；
14、优选2-甲基咪唑溶液的浓度为40mg/ml，溶剂为纯水；
15、优选六水合硝酸锌溶液、dox溶液、2-甲基咪唑溶液的体积比为4：1：4；
16、该步中，由于金属离子和有机配体的自组装配位反应，迅速形成中空网状晶体结构，此时dox被包封在中空网状晶体结构内部，得到包裹药物的dz纳米颗粒；
17、(2)将步骤(1)所得dz载药纳米颗粒与sirna混合，室温静置，通过静电吸附作用sirna被吸附到dz载药纳米颗粒表面，形成rdz纳米颗粒；
18、优选dz载药纳米颗粒包封的dox与sirna的质量比为25：1；
19、优选室温静置的时间为30min；
20、(3)从raw264.7细胞中提取细胞膜，将步骤(2)所得rdz纳米颗粒与提取所得细胞膜混合进行冰浴超声包膜，之后离心，收集得到mrdz纳米颗粒(即所述的多功能纳米免疫调节制剂)；
21、从raw264.7细胞中提取细胞膜后，用bca试剂盒定量，提取效率约为每100万细胞提取1mg膜蛋白量；优选rdz纳米颗粒与巨噬细胞膜膜蛋白量的质量比为10：1；
22、优选超声的时间为30min。
23、本专利技术所述的多本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种多功能纳米免疫调节制剂，其特征在于，所述的多功能纳米免疫调节制剂由金属有机框架材料包裹化疗药物并负载免疫抑制阻断剂之后，再经巨噬细胞膜包膜而得。
2.如权利要求1所述的多功能纳米免疫调节制剂，其特征在于，金属有机框架材料为ZIF-8。
3.如权利要求1所述的多功能纳米免疫调节制剂，其特征在于，化疗药物为DOX。
4.如权利要求1所述的多功能纳米免疫调节制剂，其特征在于，免疫抑制阻断剂为siRNA。
5.如权利要求1所述的多功能纳米免疫调节制剂，其特征在于，巨噬细胞膜为RAW264.7细胞中提取的细胞膜。
6.一种如权利要求1所述的多功能纳米免疫调节制剂的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，六水合硝酸锌溶液的浓度为2mg/mL，溶剂为纯水；DOX溶液的浓度为1mg/mL，溶剂为纯水；2-甲基咪唑溶液的浓度为40mg/mL，溶剂为纯水；六水合硝酸锌溶液、DOX溶液、2-甲基咪唑溶液的体积比为4：1：4。
8.如权利要求6
9.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，从RAW264.7细胞中提取细胞膜后，用BCA试剂盒定量，RDZ纳米颗粒与巨噬细胞膜膜蛋白量的质量比为10：1。
10.如权利要求1所述的多功能纳米免疫调节制剂在制备免疫系统重塑的抗肿瘤药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种多功能纳米免疫调节制剂，其特征在于，所述的多功能纳米免疫调节制剂由金属有机框架材料包裹化疗药物并负载免疫抑制阻断剂之后，再经巨噬细胞膜包膜而得。
2.如权利要求1所述的多功能纳米免疫调节制剂，其特征在于，金属有机框架材料为zif-8。
3.如权利要求1所述的多功能纳米免疫调节制剂，其特征在于，化疗药物为dox。
4.如权利要求1所述的多功能纳米免疫调节制剂，其特征在于，免疫抑制阻断剂为sirna。
5.如权利要求1所述的多功能纳米免疫调节制剂，其特征在于，巨噬细胞膜为raw264.7细胞中提取的细胞膜。
6.一种如权利要求1所述的多功能纳米免疫调节制剂的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：
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