【技术实现步骤摘要】
(一)本专利技术属于微生物发酵，具体涉及一种利用微生物发酵辅助提取沙棘叶多糖的方法。
技术介绍
0、(二)
技术介绍
1、沙棘(hippophae rhamnoides)，又名黑刺、醋柳等，是胡颓子科落叶小乔木或灌木，广泛分布于中国、蒙古、俄罗斯和北欧等地，在我国主要分布于华北、西北和西南地区，常生长于海拔800–3600米温带地区向阳的山嵴、谷地、干涸河床地或山坡，多砾石或沙质土壤或黄土上。沙棘由于能够抵抗干旱、风和沙的侵蚀，可扎根于盐碱土中生长，因此，它被广泛应用于盐碱草地和森林的恢复、沙漠绿化，具有很高的生态重要性。
2、沙棘的各个部位，包括果实、叶以及果皮中都富含维生素、多糖、多酚、黄酮、不饱和脂肪酸和微量元素等多种活性成分，具有极高的药用和营养价值，是一种药食同源性植物，它在改善肠道菌群、保护心血管系统、抗氧化、降低血糖和血脂方面有显著作用。沙棘含有的众多活性成分中，多糖备受人们关注，其具有良好抗氧化能力，能够增强人体免疫功能，并且在免疫调节、抗炎、抗肿瘤、改善肠道菌群、保肝、降血糖、抗高脂血症等方面有非常重要的意义。所以，多糖作为一种植物来源的天然活性物质，可应用于食品、药品和保健品等多个领域。
3、目前有较多关于从沙棘果中提取多糖的研究报道，由于沙棘果可以直接药用和食用，以及开发成沙棘果干、沙棘果汁、沙棘膏等产品，所以用沙棘果为原料提取多糖成本较高。一些沙棘果加工企业，为了提高果实的利用率，会使用沙棘果渣提取多糖，原料成本相对较低。相比之下，沙棘叶资源还没有得到开发利用，近些年来的
4、目前，有不少关于沙棘叶多糖提取方法的研究报道，基本的方法都是热水提取乙醇沉淀法(简称为“水提醇沉法”)，在此基础之上，有用微波和超声波等辅助提取。不同提取方法有各自的优缺点，如常规的热水提取法操作简单，但存在提取得率低、耗时长等缺点；微波辅助提取法提取时间短、效率高，但多糖容易受到微波的破坏而活性有所下降；超声辅助提取法设备要求低，不会显著增加提取成本，但对提高提取得率的效果不够显著，这是目前最常用的方法。
5、近年来，酶解法在提取植物多糖中有较多的应用，其能够显著提高提取得率，而且条件温和，提取的多糖活性好，缺点是增加了酶的使用成本。酶解法提取常用的纤维素酶、果胶酶等都是微生物发酵产生，如果利用微生物直接发酵提取原料，微生物在生长中产生多种水解酶，就能够水解植物细胞壁中的纤维素、半纤维素、果胶等物质，从而有利于与纤维素紧密结合的可溶性多糖释放，当然，微生物也可能产酶分解多糖，但可以通过选择合适的发酵菌种，以及控制好发酵程度，达到酶解破坏细胞壁，但又尚未产酶降解可溶性多糖，从而提高多糖提取得率，而且相比于酶解辅助提取法，微生物发酵辅助提取节省了酶的成本。
6、为了能够开发利用沙棘叶，克服从沙棘叶提取多糖得率低的问题，本专利技术对沙棘叶做微生物发酵预处理，再采用热水超声提取，可使沙棘叶的多糖提取得率大幅度提高。
技术实现思路
0、(三)
技术实现思路
1、本专利技术目的是提供一种利用微生物发酵辅助提取沙棘叶多糖的方法。将微生物发酵技术应用于沙棘叶多糖的提取，沙棘叶经微生物总状毛霉(mucor racemosus)sj6-19发酵后，再经热水超声提取，多糖提取得率显著提高。
2、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：
3、本专利技术提供一种利用微生物发酵辅助提取沙棘叶多糖的方法，所述的方法包括以下步骤：(1)沙棘叶粉中加入总状毛霉(mucor racemosus)sj6-19的孢子液，搅拌均匀后于28–30℃发酵48–60h，获得沙棘叶发酵物；所述总状毛霉sj6-19，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号gdmcc no:64324，保藏日期2024年3月1日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编510070；(2)沙棘叶发酵物中加入去离子水，搅拌均匀后于35–40℃保温2.0–2.5h，经超声水提后过滤，滤液浓缩，获得沙棘叶水提浓缩液；(3)沙棘叶水提浓缩液，加入乙醇使多糖沉淀，沉淀物经乙醇洗涤，真空干燥后，获得沙棘叶多糖。
4、进一步，所述步骤(1)中的沙棘叶是植物沙棘(hippophae rhamnoides)的绿色叶片，采摘后自然晾干；沙棘叶粉是沙棘叶经85℃烘干后，粉碎过40目筛的细粉。
5、进一步，所述步骤(1)中的总状毛霉sj6-19孢子液的制备方法为：低温保存的总状毛霉sj6-19孢子接种于马铃薯葡萄糖琼脂(pda)平板培养基上，于28℃培养56–72h，加无菌蔗糖水溶液于培养物中，用接种环搅动使孢子悬浮，获得孢子液；优选将孢子液用无菌蔗糖水溶液调整孢子浓度为5×106–10×106个/ml。所述的无菌蔗糖水溶液中蔗糖的浓度为15–20g/l，高压蒸汽115℃灭菌15min。所述的pda平板培养基是成品马铃薯葡萄糖琼脂培养基(青岛海博生物技术有限公司)，用自来水按46g/l的浓度配制，ph自然，高压蒸汽121℃灭菌15min。
6、进一步，所述步骤(1)中的总状毛霉sj6-19的孢子液体积用量以沙棘叶粉质量计为2–3ml/g。
7、进一步，所述步骤(2)沙棘叶水提浓缩液的制备方法为：沙棘叶发酵物中加入去离子水，搅拌均匀后于35–40℃保温2.0–2.5h，然后转入水温85–90℃的超声波清洗机中，100–150w超声提取60–90min，超声水提结束后，趁热布氏漏斗抽滤，将滤液于60℃、–0.1mpa条件下减压浓缩至原体积的1/10–1/25，获得沙棘叶水提浓缩液，所述的去离子水体积加入量以原料沙棘叶粉质量计为25–30ml/g。
8、进一步，所述步骤(3)中的沙棘叶多糖的制备方法为：向沙棘叶水提浓缩液中加入3–4倍体积的无水乙醇，使体系的乙醇体积分数达到75％–80％，4℃条件下静置16–20h后，8000r/min离心5–10min，收集沉淀物，沉淀物用原料沙棘叶粉质量计1.5–2.0ml/g的无水乙醇洗涤一次，再次离心后沉淀物于70℃、–0.1mpa条件下真空干燥至恒重，得沙棘叶多糖。
9、与现有技术相比，本专利技术的有益效果主要体现在：本专利技术在热水超声提取沙棘叶多糖前，增加了微生物发酵预处理，所用的微生物发酵菌株总状毛霉sj6-19，是针对能够水解沙棘叶细胞壁而有目的分离和筛选，并经过诱变获得。总状毛霉sj6-19在添加蔗糖的沙棘叶粉中适度生长，产生多种水解酶，之后，将发酵的沙棘叶粉加水保温，细胞壁中的纤维素、半纤维素和果胶等物质被水解，有助于结合态的多糖在超声水提时溶出，从而能够显著提高多糖提取得率。较不采用发酵预处理的直接提取相比，沙棘叶的多糖提取得率可以提高86.8％。
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1.一种利用微生物发酵辅助提取沙棘叶多糖的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：(1)沙棘叶粉中加入总状毛霉(Mucor racemosus)SJ6-19的孢子液，搅拌均匀后于28-30℃发酵48-60h，获得沙棘叶发酵物；所述总状毛霉SJ6-19保藏编号GDMCCNo:64324；(2)沙棘叶发酵物中加入去离子水，搅拌均匀后于35-40℃保温2.0-2.5h，经超声水提后过滤，滤液浓缩，获得沙棘叶水提浓缩液；(3)沙棘叶水提浓缩液，加入乙醇使多糖沉淀，沉淀物经乙醇洗涤，真空干燥后，获得沙棘叶多糖。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中的沙棘叶是植物沙棘(Hippophaerhamnoides)的绿色叶片，采摘后自然晾干；沙棘叶粉是沙棘叶经85℃烘干后，粉碎过40目筛的细粉。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中的总状毛霉SJ6-19孢子液的制备方法为：低温保存的总状毛霉SJ6-19孢子接种于PDA平板培养基上，于28℃培养56-72h，加无菌蔗糖水溶液于培养物中，用接种环搅动使孢子悬浮，获得孢子液。
4.如
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中的总状毛霉SJ6-19的孢子液体积用量以沙棘叶粉质量计为2-3mL/g。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)沙棘叶水提浓缩液的制备方法为：沙棘叶发酵物中加入去离子水，搅拌均匀后于35-40℃保温2.0-2.5h，然后转入水温85-90℃的超声波清洗机中，100-150W超声提取60-90min，超声水提结束后，趁热布氏漏斗抽滤，将滤液于60℃、-0.1Mpa条件下减压浓缩至原体积的1/10-1/25，获得沙棘叶水提浓缩液。
7.如权利要求1或6所述的方法，其特征在于，所述的去离子水体积加入量以原料沙棘叶粉质量计为25-30mL/g。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中的沙棘叶多糖的制备方法为：向沙棘叶水提浓缩液中加入3-4倍体积的无水乙醇，使体系的乙醇体积分数达到75％-80％，4℃条件下静置16-20h后，8000r/min离心5-10min，收集沉淀物，沉淀物用原料沙棘叶粉质量计1.5-2.0mL/g的无水乙醇洗涤一次，再次离心后沉淀物于70℃、-0.1Mpa条件下真空干燥至恒重，得沙棘叶多糖。
...【技术特征摘要】
1.一种利用微生物发酵辅助提取沙棘叶多糖的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：(1)沙棘叶粉中加入总状毛霉(mucor racemosus)sj6-19的孢子液，搅拌均匀后于28-30℃发酵48-60h，获得沙棘叶发酵物；所述总状毛霉sj6-19保藏编号gdmccno:64324；(2)沙棘叶发酵物中加入去离子水，搅拌均匀后于35-40℃保温2.0-2.5h，经超声水提后过滤，滤液浓缩，获得沙棘叶水提浓缩液；(3)沙棘叶水提浓缩液，加入乙醇使多糖沉淀，沉淀物经乙醇洗涤，真空干燥后，获得沙棘叶多糖。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中的沙棘叶是植物沙棘(hippophaerhamnoides)的绿色叶片，采摘后自然晾干；沙棘叶粉是沙棘叶经85℃烘干后，粉碎过40目筛的细粉。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中的总状毛霉sj6-19孢子液的制备方法为：低温保存的总状毛霉sj6-19孢子接种于pda平板培养基上，于28℃培养56-72h，加无菌蔗糖水溶液于培养物中，用接种环搅动使孢子悬浮，获得孢子液。
4.如权利要求1或3所述的方法，其特征在于，将孢子液用无菌蔗糖水溶液调整孢子浓度为5×106-10×106个/ml...
【专利技术属性】
技术研发人员：梅建凤，徐鹿驰，徐天辰，邱幸炜，王旭东，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：
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