一种用于毛发修护的细胞外基质蛋白及其制备方法与应用技术

本申请公开了一种用于毛发修护的细胞外基质蛋白及其制备方法与应用，涉及基因工程技术领域

【技术实现步骤摘要】
一种用于毛发修护的细胞外基质蛋白及其制备方法与应用


[0001]本申请涉及基因工程
，特别涉及一种用于毛发修护的细胞外基质蛋白及其制备方法与应用
。

技术介绍

[0002]随着人们生活水平的提高，烫发和染发的人数以及频度在迅速增加
。
头发的主要成分是蛋白质，与其他蛋白质相比，毛发蛋白质的性质不太活泼
。
但毛发对沸水
、
酸
、
碱
、
氧化剂与还原剂比较敏感，在烫发和染发的过程中要使用一些氧化剂和还原剂，均为一些酸性或碱性的化学制剂，在此过程中头发还可能长时间接触水蒸气，导致在烫发和染发的过程中损伤头发，甚至伤及头皮
。
但普通化工品类化妆品或激素类药物在修护毛发时都容易产生副作用
。
而细胞外基质蛋白具有多种生物学功能，且安全可靠，不具有副作用，有望应用于毛发修护当中，但细胞外基质蛋白类型多，全基因表达可行性低，天然提取的细胞外基质蛋白免疫原性高
、
纯度低，功能单一
。

技术实现思路

[0003]本申请的主要目的是提供一种用于毛发修护的细胞外基质蛋白及其制备方法与应用，旨在解决现有的蛋白产品难以用于修护毛发和皮肤的技术问题
。
[0004]为实现上述目的，本申请提出了一种用于毛发修护的细胞外基质蛋白，包括具有如
Seq ID NO.1
所示的氨基酸序列的细胞外基质蛋白，编码所述细胞外基质蛋白的核苷酸序列如
Seq ID NO.2
所示
。
[0005]可选地，所述用于毛发修护的细胞外基质蛋白还包括对所述细胞外基质蛋白进行修饰的脂质体
。
[0006]可选地，所述细胞外基质蛋白是经酿酒酵母表达的纤连蛋白
、Ⅲ型胶原蛋白
、
弹性蛋白与胰岛素样生长因子的融合蛋白
。
[0007]可选地，所述细胞外基质蛋白的氨基酸序列是将纤连蛋白功能域片段
、Ⅲ型胶原蛋白功能域片段
、
弹性蛋白功能域片段与胰岛素样生长因子功能域片段通过连接肽片段依次串联连接后所得
。
[0008]可选地，所述纤连蛋白功能域片段的氨基酸序列如
Seq ID NO.3
所示
。
[0009]可选地，所述Ⅲ型胶原蛋白功能域片段的氨基酸序列如
Seq ID NO.4
所示
。
[0010]可选地，所述弹性蛋白功能域片段的氨基酸序列如
Seq ID NO.5
所示
。
[0011]可选地，所述胰岛素样生长因子功能域片段的氨基酸序列如
Seq ID NO.6
所示
。
[0012]本申请还提出了一种用于毛发修护的细胞外基质蛋白的制备方法，包括以下步骤：依据如
Seq ID NO.2
所示的核苷酸序列和酿酒酵母表达质粒
pYES2/CT
‑
MF
α
，构建重组质粒
pYES2/CT
‑
MF
α
‑
FN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF
；将所述重组质粒
pYES2/CT
‑
MF
α
‑
FN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF
转化入酿酒酵母
INVSc1
感受态细
胞，通过培养
、PCR
扩增
、
筛选，获得重组酵母工程菌
INVSc1/pYES2/CT
‑
MF
α
‑
rhFN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF
；对所述重组酵母工程菌
INVSc1/pYES2/CT
‑
MF
α
‑
rhFN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF
进行诱导表达，并收集诱导产物；将所述诱导产物纯化后，获得
rhFN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF
蛋白原液；对所述
rhFN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF
蛋白原液进行脂质体修饰，获得用于毛发修护的细胞外基质蛋白
。
[0013]可选地，所述依据如
Seq ID NO.2
所示的核苷酸序列和酿酒酵母表达质粒
pYES2/CT
‑
MF
α
，构建重组质粒
pYES2/CT
‑
MF
α
‑
FN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF
的步骤，包括：依据如
Seq ID NO.2
所示的核苷酸序列进行基因片段合成，并将合成的基因片段插入酿酒酵母表达质粒
pYES2/CT
‑
MF
α
上的酶切位点
Not I
和
Xba I
之间，获得重组质粒
pYES2/CT
‑
MF
α
‑
FN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF。
[0014]可选地，所述将所述重组质粒
pYES2/CT
‑
MF
α
‑
FN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF
转化入酿酒酵母
INVSc1
感受态细胞，通过培养
、PCR
扩增
、
筛选，获得重组酵母工程菌
INVSc1/pYES2/CT
‑
MF
α
‑
rhFN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF
的步骤，包括：将重组质粒
pYES2/CT
‑
MF
α
‑
FN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF
加入酿酒酵母
INVScl
感受态细胞中，吹吸使其混合均匀，进行电击转化，再加入山梨醇溶液，混匀后，孵育，离心后弃去上清，涂布在
SC
‑
U
固体平板，经
30℃
恒温倒置培养，直至长出单克隆菌落；经菌液
PCR
筛选阳性克隆子<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于毛发修护的细胞外基质蛋白，其特征在于，包括具有如
Seq ID NO.1
所示的氨基酸序列的细胞外基质蛋白，编码所述细胞外基质蛋白的核苷酸序列如
Seq ID NO.2
所示
。2.
根据权利要求1所述的用于毛发修护的细胞外基质蛋白，其特征在于，所述用于毛发修护的细胞外基质蛋白还包括对所述细胞外基质蛋白进行修饰的脂质体
。3.
根据权利要求1所述的用于毛发修护的细胞外基质蛋白，其特征在于，所述细胞外基质蛋白是经酿酒酵母表达的纤连蛋白
、Ⅲ型胶原蛋白
、
弹性蛋白与胰岛素样生长因子的融合蛋白
。4.
根据权利要求1所述的用于毛发修护的细胞外基质蛋白，其特征在于，所述细胞外基质蛋白的氨基酸序列是将纤连蛋白功能域片段
、Ⅲ型胶原蛋白功能域片段
、
弹性蛋白功能域片段与胰岛素样生长因子功能域片段通过连接肽片段依次串联连接后所得
。5.
根据权利要求4所述的用于毛发修护的细胞外基质蛋白，其特征在于，所述纤连蛋白功能域片段的氨基酸序列如
Seq ID NO.3
所示
。6.
根据权利要求4所述的用于毛发修护的细胞外基质蛋白，其特征在于，所述Ⅲ型胶原蛋白功能域片段的氨基酸序列如
Seq ID NO.4
所示
。7.
根据权利要求4所述的用于毛发修护的细胞外基质蛋白，其特征在于，所述弹性蛋白功能域片段的氨基酸序列如
Seq ID NO.5
所示
。8.
根据权利要求4所述的用于毛发修护的细胞外基质蛋白，其特征在于，所述胰岛素样生长因子功能域片段的氨基酸序列如
Seq ID NO.6
所示
。9.
一种如权利要求2‑8任一项所述的用于毛发修护的细胞外基质蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：依据如
Seq ID NO.2
所示的核苷酸序列和酿酒酵母表达质粒
pYES2/CT
‑
MF
α
，构建重组质粒
pYES2/CT
‑
MF
α
‑
FN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF
；将所述重组质粒
pYES2/CT
‑
MF
α
‑
FN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF
转化入酿酒酵母
INVSc1
感受态细胞，通过培养
、PCR
扩增
、
筛选，获得重组酵母工程菌
INVSc1/pYES2/CT
‑
MF
α
‑
rhFN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF
；对所述重组酵母工程菌
INVSc1/pYES2/CT
‑
MF
α
‑
rhFN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF
进行诱导表达，并收集诱导产物；将所述诱导产物纯化后，获得
rhFN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF
蛋白原液；对所述
rhFN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF
蛋白原液进行脂质体修饰，获得用于毛发修护的细胞外基质蛋白
。10.
根据权利要求9所述的用于毛发修护的细胞外基质蛋白的制备方法，其特征在于，所述依据如
Seq ID NO.2
所示的核苷酸序列和酿酒酵母表达质粒
pYES2/CT
‑
MF
α
，构建重组质粒
pYES2/CT
‑
MF
α
‑
FN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF
的步骤，包括：依据如
Seq ID NO.2
所示的核苷酸序列进行基因片段合成，并将合成的基因片段插入酿酒酵母表达质粒
pYES2/CT
‑
MF
α
上的酶切位点
Not I
和
Xba I
之间，获得重组质粒
pYES2/CT
‑
MF
α
‑
FN
‑
Col
‑
ELA
‑
IGF...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵俊，周炜，李增，朱何龙，许高涛，吴博，凡玉芳，张勇，
申请(专利权)人：英特菲尔成都生物制品有限责任公司，
类型：发明
国别省市：