一种嵌合抗原受体（制造技术

本发明专利技术提供了一种嵌合抗原受体

【技术实现步骤摘要】
一种嵌合抗原受体
（
CAR
）
以及在抗癌中的应用


：
[0001]本专利技术属于生物技术研发领域，具体提供了一种嵌合抗原受体
(CAR)
及其在抗癌中的应用
。

技术介绍

：
[0002]胰腺癌
(pancreatic cancer
，
PC)
是一种常见的消化系统肿瘤，具有死亡率高
、
转移率高
、
难治愈
、
易复发等特点
。
与前几十年风险高
、
难度大的手术方法不同，现代手术技术已提高了胰腺癌患者的生存率，但只适合
15
‑
20
％的病例
。
此外，胰腺癌术后复发率高，局部复发率超过
50
％
。
随机对照试验显示，接受肿瘤切除术的患者5年生存率约为
28
％，中位生存时间仅为
18
个月，上述数据表明手术治疗方法在治疗胰腺癌中有较大的局限性
(
参见
Neoptolemos J.P.,Kleeff J.,Michl P.,Costello E.,Greenhalf W.,Palmer D.H.Therapeutic developments in pancreatic cancer:Current and future perspectives.Nat.Rev.Gastroenterol.Hepatol.2018,15:333
–
348)。
[0003]为弥补手术疗法的不足，逐渐发展出了辅助治疗策略来提高生存率，其中化疗是不可或缺的一部分
。
在众多化疗药物中，吉西他滨
(Gemcitabine
，
GEM)
通常作为胰腺癌患者的一线治疗药物，它是一种脱氧胞苷的核苷类似物，于
1996
年获得
FDA
批准，目前广泛用于治疗各种实体瘤
(
如乳腺癌
、
卵巢癌和非小细胞肺癌等
)。
吉西他滨的细胞毒活性基于其对
DNA
合成的多种影响，由于呋喃糖环
2'
位氟取代基的结构差异，吉西他滨在细胞药理学
、
代谢和作用机制等方面较其他核苷酸类似物具有明显的治疗优势
(
参见
Mini E.,Nobili S.,Caciagli B.,Landini I.,Mazzei T.Cellular pharmacology ofgemcitabine.Ann.Oncol.2006,17((Suppl.S5)):v7
–
v12)。
然而，吉西他滨对其无活性代谢物
dFdU
具有快速脱氨基作用，并且需要一系列磷酸化步骤才能获得相关活性，使得它具有一定的局限性，特别是由于其高剂量和重复剂量的毒性以及化疗耐药性的出现
(
参见
Amrutkar M.,Gladhaug I.P.Pancreatic Cancer Chemoresistance to Gemcitabine.Cancers.2017
；
9:157)。
[0004]吉西他滨耐药性的机制尚不清楚，可能与
p53、STAT3、ABC
转运蛋白
、Bcl
‑
xl
等多种通路有关，但
CD44
却是一种主要途径
。CD44
是一种重要的细胞标记，是透明质酸
(HA)、
骨桥蛋白
、
软骨素
、
胶原蛋白
、
纤连蛋白和
serglycin/
硫酸化蛋白聚糖的膜受体，其参与细胞粘附
、
血管生成
、
细胞因子释放和肌肉修复等过程，有证据表明该蛋白可能在
PC
癌的发生发展中发挥重要作用
(
参见
Hong SP,Wen J,Bang S et al
，
CD44
‑
positive cells are responsible for gemcitabine resistance in pancreatic cancer cells.Int J Cancer.2009
，
125:2323
–
2331.)。
研究人员表示，高
CD44 PC
在治疗
12
周后对吉西他滨产生耐药性，而低
CD44 PC
病例在治疗
22
周后对吉西他滨敏感，这一事实表明
CD44+PC
细胞可能对吉西他滨具有耐药性
。
此外，
CD44
过表达的水平有可能预测化疗耐药的时间，
PC
的复发能力可以通过以下观察结果来解释，即
CD44+PC
细胞的特征更多在于其致瘤潜力，而不是具有更高吉西他滨敏感性的细胞
。
抗
CD44
疗法对复发性
PC
有效，
PC
细胞中
CD44
的敲除会导致侵
袭性降低和对吉西他滨的敏感性增加
(
参见
Zhao S,Chen C,Chang K et al
，
CD44 expression level and isoform contributes to pancreatic cancer cell plasticity,invasiveness,and response to therapy.Clin Cancer Res.2016
，
22:5592
–
5604)。
[0005]T
细胞输注作为实体瘤的治疗已被证明是有效的，基因工程的进步和对
T
细胞生物学的深入了解使我们现在能够将复杂的细胞毒性
T
细胞反应转化为可引入
T
细胞的合成分子，嵌合抗原受体
(CAR)
靶向肿瘤抗原是一种最为有效的
T
细胞修饰方式
。CAR
直接与癌细胞表面蛋白
、
碳水化合物或糖脂结合，第一代
CAR
于
1989
年开发，由附着在单链可变抗体片段上的
TCR
刺激结构域组成；随后添加的共刺激结构域
(
第二代
CAR)
通过提高
T
细胞在遇到表达抗原的靶细胞时的存活和增殖能力，大大提高了其成功率；多个研究人员利用两个共刺激结构域
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种双特异性嵌合抗原受体
CAR
，其特征在于，所述双特异性嵌合抗原受体
CAR
包括信号肽
、
第一抗原结合区
、
第二抗原结合区
、
铰链区
、
跨膜区
、
共刺激因子和
CD3
ζ
，所述第一抗原结合区靶向
CD44
，包括氨基酸序列如
SEQ ID NO.1
所示的重链可变区和氨基酸序列如
SEQ ID NO.2
所示的轻链可变区；所述第二抗原结合区靶向
MSLN
，包括氨基酸序列如
SEQ ID NO.3
所示的重链可变区和氨基酸序列如
SEQ ID NO.4
所示的轻链可变区
。2.
如权利要求1所述的双特异性嵌合抗原受体
CAR
，其特征在于，所述共刺激因子为4‑
1BB。3.
如权利要求2所述的双特异性嵌合抗原受体
CAR
，其特征在于，所述双特异性嵌合抗原受体的氨基酸序列如
SEQ ID NO.5
所示
。4.
如权利要求3所述的双特异性嵌合抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：史辛艺，王泰华，
申请(专利权)人：广东赛尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：