一种抗制造技术

本文提供抗

【技术实现步骤摘要】
一种抗DLL3嵌合抗原受体及其用途
[0001]本专利技术是申请号为
202080047990.8
的母案的分案申请，该母案的申请日为
2020
年7月
17
日，专利技术名称为“抗
DLL3
嵌合抗原受体及其用途”。


[0002]本专利技术涉及靶向
DLL3
的嵌合抗原受体
(CAR)
及对
DLL3
具有特异性的结合蛋白
。
本专利技术还涉及编码这些
CAR
或这些结合蛋白的核酸序列
、
表达这些
CAR
的经修饰的免疫细胞以及其用于治疗
DLL3
相关病症的用途
。

技术介绍

[0003]细胞免疫疗法的发展已提供一种有前景的治疗多种肿瘤的方法
。
一种这样的治疗涉及免疫细胞
、
特别是
T
细胞的基因工程化，以在细胞表面上表达嵌合抗原受体
(CAR)。
嵌合抗原受体是在通常型式下将单克隆抗体
(mAb)
的特异性与
T
细胞的效应功能相结合的蛋白质
。
一旦
CAR
在
T
细胞中表达，经
CAR
修饰的
T
细胞
(CAR
‑
T
或
CAR
‑
T
细胞
)<br/>即可获得一些特性，诸如抗原特异性识别
、
抗肿瘤反应性及增殖，因此可充当“活药物”来根除所靶向的肿瘤细胞
。
原则上，这些
CAR
‑
T
细胞可靶向任何抗原
(
例如细胞表面分子
)。CAR
‑
T
细胞疗法可克服对自体抗原的耐受性，且提供一种不依赖于患者
MHC
状态的治疗
。
近来的试验使用经工程改造以表达靶向
CD19
的嵌合抗原受体的
T
细胞，已证明在白血病及淋巴瘤患者中具有显著临床反应
。
[0004]CAR
表达为跨膜蛋白，包括抗原特异性结合位点
、
跨膜区及信号传导胞内结构域
(
例如
CD3
ζ
链
)。
抗原特异性结合位点通常为源自单克隆抗体的单链可变片段
(scFv)
，由经柔性接头接合的重链及轻链组成
。
近来
CAR
构建体已合并来自
CD28
或4‑
1BB
等共刺激分子的另外的胞内结构域以增强活体内
T
细胞存活率
。
还对
CAR
进行其他遗传修饰，例如添加细胞因子基因或避免肿瘤部位处免疫抑制机制的基因
。
[0005]已发现
DLL3(
δ
样配体
3)
蛋白在临床上与多种增生性病症相关，这些增生性病症包括展现神经内分泌特征的肿瘤，诸如小细胞肺癌
(SCLC)。
起源于神经内分泌祖细胞的
SCLC
大约占所有肺癌的
15
％，且具有最低的5年存活率之一
(
存活率为6％
)(Alvarado
‑
Luna
等人
,2016,Transl Lung Cancer Res 5:26
‑
38
；
Siegel
等人
,2017,CA Cancer J Clin 67:7
‑
30)。
这是因为其具有高度侵袭性，约三分之二的患者在诊断时患有转移性疾病，且为常规治疗
(
例如基于铂的化学疗法
)
极难医治的
。
[0006]需要改良的治疗
SCLC
及其他表达
DLL3
的癌症的治疗方法
。

技术实现思路

[0007]在一方面，本披露提供一种嵌合抗原受体
(CAR)
，该嵌合抗原受体靶向
DLL3(
抗
DLL3 CAR)。
抗
DLL3 CAR
包含
DLL3
结合域，其中该
DLL3
结合域包含或源自单域抗体
(sdAb)
或单链可变片段
(scFv)。
[0008]在一些实施例中，
sdAb
包含多肽，该多肽包含：包含
SEQ ID NO:1
‑
81
中的任一者的
氨基酸序列的
CDR1
或其在该
CDR1
中包含至多约3个氨基酸取代的变体；包含
SEQ ID NO:82
‑
162
中的任一者的氨基酸序列的
CDR2
或其在该
CDR2
中包含至多约3个氨基酸取代的变体；以及包含
SEQ ID NO:163
‑
243
中的任一者的氨基酸序列的
CDR3
或其在该
CDR3
中包含至多约3个氨基酸取代的变体
。
[0009]在一些实施例中，
sdAb
包含多肽，该多肽包含：包含
SEQ ID NO:1
‑
81
中的任一者的氨基酸序列的
CDR1
；包含
SEQ ID NO:82
‑
162
中的任一者的氨基酸序列的
CDR2
；以及包含
SEQ ID NO:163
‑
243
中的任一者的氨基酸序列的
CDR3
，或在
CDR1、CDR2
及
CDR3
中包含至多约3个氨基酸取代的多肽变体
。
[0010]在一些实施例中，
sdAb
包含多肽，该多肽包含以下中的任一种：
[0011](1)
包含
SEQ ID NO:6
的氨基酸序列的
CDR1
，或其包含至多约3个氨基酸取代的变体；包含
SEQ ID NO:87
的氨基酸序列的
CDR2
，或其包含至多约3个氨基酸取代的变体；以及包含
SEQ ID NO:168
的氨基酸序列的
CDR3
，或其包含至多约3个氨基酸取代的变体；
[0012](2)
包含
SEQ ID NO:21
的氨基酸序列的
CDR1
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种嵌合抗原受体，该嵌合抗原受体包含
DLL3
结合域，其中该
DLL3
结合域包含或源自单域抗体；该单域抗体包含多肽，该多肽包含：
SEQ ID NO:6
所示氨基酸序列的
CDR1
；
SEQ ID NO:87
所示氨基酸序列的
CDR2
；以及
SEQ ID NO:168
所示氨基酸序列的
CDR3。2.
如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中该单域抗体为针对人类
DLL3
或恒河猴
DLL3
产生的骆驼单域抗体
。3.
如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中该单域抗体包含
SEQ ID NO:279
所示的氨基酸序列
。4.
如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中该单域抗体通过
CDR
移植进行人源化
。5.
如权利要求4所述的嵌合抗原受体，其中该人源化单域抗体包含与
SEQ ID NO:365
‑
367
中的任一者所示的氨基酸序列
。6.
如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中该
DLL3
为人类
DLL3
或恒河猴
DLL3。7.
如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其自
N
末端至
C
末端包含：信号肽
、
该
DLL3
结合域
、
铰链域
、
跨膜域及细胞内信号传导域
。8.
如权利要求7所述的嵌合抗原受体，其中该细胞内信号传导域源自
CD3
ζ
、FcR
γ
、FcR
β
、CD3
γ
、CD3
δ
、CD3
ε
、CD5、CD22、CD79a、CD79b
或
CD66d。9.
如权利要求7所述的嵌合抗原受体，其中该细胞内信号传导域进一步包含细胞内共刺激序列
。10.
如权利要求9所述的嵌合抗原受体，其中该细胞内共刺激序列源自选自以下共刺激分子：
CD27、CD28、4
‑
1BB、OX40、CD40、PD
‑
1、LFA
‑
1、ICOS、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7
‑
H3、TNFRSF9、TNFRSF4、TNFRSF8、CD40LG、ITGB2、KLRC2、TNFRSF18、TNFRSF14、HAVCR1、LGALS9、DAP10、DAP12、CD83、CD83
配体及其组合
。11.
如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其包含
SEQ ID NO:476、SEQ ID NO:492、SEQ ID NO:493、
或
SEQ ID NO:494
所示的氨基酸序列
。12.
如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中该
DLL3
结合域包含彼此连接的两个单域抗体
。13.
如权利要求
12
所述的嵌合抗原受体，其中这些单域抗体中的每一者独立地包含
SEQ ID NO:366
所示的氨基酸序列
。14.
如权利要求
12
所述的嵌合抗原受体，其包含第一单域抗体和第二单域抗体，其中：所述第一单域抗体包含
SEQ ID NO:6
所示氨基酸序列的
CDR1
，
SEQ ID NO:87
所示氨基酸序列的
CDR2
，以及
SEQ ID NO:168
所示氨基酸序列的
CDR3
；所述第二单域抗体包含
SEQ ID NO:21
所示氨基酸序列的
CDR1
，
SEQ ID NO:102
所示氨基酸序列的
CDR2
，以及
SEQ ID NO:183
所示氨基酸序列的
CDR3。15.
如权利要求
14
所述的嵌合抗原受体，其中：所述第一单域抗体包含
SEQ ID NO:366
所示的氨基酸序列，和所述第二单域抗体包含
SEQ ID NO:356
所示的氨基酸序列
。16.
如权利要求
13
所述的嵌合抗原受体，其包含
SEQ ID NO:518
或
SEQ ID NO:520
所示的氨基酸序列
。
17.
一种
DLL3
结合蛋白，该
DLL3
结合蛋白包含特异性地结合于
DLL3
的单域抗体部分，其中该单域抗体部分包含多肽，该多肽包含：
SEQ ID NO:6
所示氨基酸序列的
CDR1
；
SEQ ID NO:87
所示氨基酸序列的
CDR2
；以及
SEQ ID NO:168
所示氨基酸序列的
CDR3。18.
如权利要求
17
所述的
DLL3
结合蛋白，其中该单域抗体部分为针对人类
DLL3
或恒河猴
DLL3
产生的骆驼单域抗体
。19.
如权利要求
17
所述的
DLL3
结合蛋白，其中该单域抗体部分包含
SEQ ID NO:279
所示的氨基酸序列
。20.
如权利要求
17
所述的
DLL3
结合蛋白，其中该单域抗体部分通过
CDR
移植进行人源化
。21.
如权利要求
20
所述的
DLL3
结合蛋白，其中该人源化单域抗体包含
SEQ ID NO:365
‑
367
中的任一者所示的氨基酸序列
。22.
如权利要求
17
至
21
中任一项所述的
DLL3
结合蛋白，其中该
DLL3
为人类
DLL3
或恒河猴
DLL3。23.
一种经分离的核酸分子，该经分离的核酸分子编码如权利要求1至
16
中任一项所述的嵌合抗原受体或如权利要求
17
至
22
中任一项所述的
DLL3
结合蛋白
。24.
如权利要求
23
所述的经分离的核酸分子，其中该经分离的核酸分子包含
SEQ ID NO:373
所示的多核苷酸序列，该多核苷酸序列编码骆驼单域抗体
。25.
如权利要求
23
所述的经分离的核酸分子，其中该经分离的核酸分子包含选自
SEQ ID NO:459
‑
461
中的多核苷酸序列，该多核苷酸序列编码人源化骆驼单域抗体
。26.
如权利要求
23
所述的经分离的核酸分子，其中该核酸分子进一步包含编码嵌合转换受体或显性负性受体的多核苷酸序列
。27.
如权利要求
23
所述的经分离的核酸分子，其中该核酸分子进一步包含编码
PD
‑1显性负性受体
、PD
‑1嵌合转换受体或
TGF
‑
β
显性负性受体的多核苷酸序列
。28.
如权利要求
27
所述的经分离的核酸分子，其中该
PD
‑1显性负性受体包含
SEQ ID NO:523
所示的氨基酸序列；该
PD
‑1嵌合转换受体包含
SEQ ID NO:524
所示的氨基酸序列
。29.
如权利要求
27
所述的经分离的核酸分子，其中该
TGF
‑
β
显性负性受体包含
SEQ ID NO:529
所示的氨基酸序列
。30.
如权利要求
27
所述的经分离的核酸分子，其中编码该
PD
‑1显性负性受体
、
该
PD
‑1嵌合转换受体或该
TGF
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵涛，彭园园，唐安，王素娟，杨帅，张望，武术，郝瑞栋，
申请(专利权)人：南京传奇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：