工程化的免疫细胞及其用途制造技术

本申请提供了被工程化以表达功能性外源受体如用肿瘤归巢肽装甲的

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】工程化的免疫细胞及其用途
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求于
2021
年4月2日提交的标题为“ENGINEERED IMMUNE CELLS AND USES THEREOF[
工程化的免疫细胞及其用途
]”的国际申请号
PCT/CN2021/085325
的优先权，其内容通过援引以其全文并入本文
。
序列声明
[0002]以下以
ASCII
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的序列表
(
文件名：
761422003840SEQLIST.TXT
，记录日期：
2022
年3月
30
日，大小：
185,862
字节
)。


[0003]本披露涉及用于治疗和相关应用的遗传工程化的免疫细胞
。
特别地，本披露涉及包含功能性外源受体和外源肿瘤归巢肽的免疫效应细胞及其用途
。

技术介绍

[0004]过继细胞疗法
(
也称为细胞免疫疗法
)
是一种使用免疫系统的细胞治疗疾病
(
例如消除癌症
)
的治疗方式
。
细胞免疫疗法可以不同的方式展开，如肿瘤浸润性淋巴细胞
(TIL)
疗法
、
工程化
T
细胞受体
(TCR)
疗法
、
嵌合抗原受体
(CAR)T
细胞疗法和自然杀伤
(NK)
细胞疗法
。
[0005]嵌合抗原受体
(CAR)
是合成受体，这些合成受体识别其同源靶配体并诱导
T
细胞内在信号传导
。
尽管
CAR
‑
T
已经在血液癌中取得了显著的进展，但各种障碍仍然限制着
CAR
‑
T
在实体瘤中的应用
。
关键挑战包括肿瘤运输
、
向肿瘤的浸润
、
在肿瘤中的活化和持久性以及肿瘤异质性
。
参见，
Rafiq S,Hackett CS,Brentjens RJ.Engineering strategies to overcome the current roadblocks in CAR T cell therapy.Nat Rev Clin Oncol.2020
年3月；
17(3):147
‑
167.doi:10.1038/s41571
‑
019
‑
0297
‑
y.Epub 2019
年
12
月
17
日
PMID:31848460
；
PMCID:PMC7223338。
因此，迫切需要新的设计来应对这些关键挑战，以提高
CAR
‑
T
或其他细胞疗法在实体瘤中的临床功效
。
[0006]本文中所提及的所有出版物
、
专利和专利申请均通过援引以其全文并入，其程度如同每个单独的出版物
、
专利或专利申请被明确且单独地表明通过援引以其全文并入
。
在本申请的任何参考文献的引用或标识不应承认这样的参考文献可用作针对本披露的现有技术
。

技术实现思路

[0007]在一些方面，本申请提供了免疫效应细胞，其表达：
(a)
功能性外源受体，和
(b)
外源肿瘤归巢肽
(THP)。
[0008]在免疫效应细胞的一些实施例中，功能性外源受体选自由嵌合抗原受体
(CAR)、
工程化
T
细胞受体
(TCR)、
嵌合
TCR(cTCR)、T
细胞抗原偶联物
(TAC)、TAC
样嵌合受体及它们的组
CAR
包含
SEQ ID NO:44
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:44
的氨基酸序列具有至少
75
％
、80
％
、90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％或
99
％同一性的氨基酸序列
。
[0014]在免疫效应细胞的一些实施例中，
CAR
是多特异性的
。
[0015]在免疫效应细胞的一些实施例中，
THP
选自由基于精氨酸
‑
甘氨酸
‑
天冬氨酸
(RGD)
的肽
、
基于天冬酰胺
‑
甘氨酸
‑
精氨酸
(NGR)
的肽及它们的组合组成的组
。
在一些实施例中，
THP
包含具有
SEQ ID NO:2
的氨基酸序列的
RGD
‑
4C
肽
。
在一些实施例中，
THP
包含具有
SEQ ID NO:38
的氨基酸序列的
NGR
肽
。
[0016]在免疫效应细胞的一些实施例中，
THP
与跨膜结构域和
/
或铰链结构域融合
。
在一些实施例中，跨膜结构域和
/
或铰链结构域来自
CD8、CD8
α
、CD7、CD80、CD28、TR2
或
FasL。
在一些实施例中，跨膜结构域和
/
或铰链结构域来自
CD7。
在一些实施例中，跨膜结构域包含
SEQ ID NO:14
的氨基酸序列，并且铰链结构域包含
SEQ ID NO:13
的氨基酸序列
。
在一些实施例中，跨膜结构域和
/
或铰链结构域来自
TR2。
[0017]在免疫效应细胞的一些实施例中，
THP
与
TGF
‑
β
显性负受体
(TGF
‑
β
DNR)
融合
。
在一些实施例中，免疫效应细胞包含多肽，该多肽包含：
i)SEQ ID NO:55
的氨基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种免疫效应细胞，其表达：
(a)
功能性外源受体，以及
(b)
外源肿瘤归巢肽
(THP)。2.
如权利要求1所述的免疫效应细胞，其中所述功能性外源受体选自由嵌合抗原受体
(CAR)、
工程化
T
细胞受体
(TCR)、
嵌合
TCR(cTCR)、T
细胞抗原偶联物
(TAC)、TAC
样嵌合受体及它们的组合组成的组
。3.
如权利要求2所述的免疫效应细胞，其中所述功能性外源受体是
CAR
，并且其中所述
CAR
包含：
(i)
胞外抗原结合结构域
、(ii)
跨膜结构域
、
和
(iii)
胞内信号传导结构域，任选地，所述
CAR
进一步包含铰链结构域
。4.
如权利要求3所述的免疫效应细胞，其中所述胞内信号传导结构域包含免疫效应细胞的初级胞内信号传导结构域
。5.
如权利要求4所述的免疫效应细胞，其中所述初级胞内信号传导结构域来自
CD3
ζ
。6.
如权利要求3至5中任一项所述的免疫效应细胞，其中所述胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导结构域
。7.
如权利要求3至6中任一项所述的免疫效应细胞，其进一步包含信号肽，其中所述信号肽来自
CD8
或
CD28。8.
如权利要求1至7中任一项所述的免疫效应细胞，其中所述免疫效应细胞选自由
T
细胞
、
自然杀伤
(NK)
细胞
、B
细胞
、
嗜中性粒细胞
、
嗜酸性粒细胞
、
单核细胞
、
巨噬细胞
、
树突细胞
、
外周血单个核细胞
(PBMC)、
可以分化出淋巴样细胞的干细胞及它们的组合组成的组
。9.
如权利要求8所述的免疫效应细胞，其中所述免疫效应细胞是
T
细胞
。10.
如权利要求3至9中任一项所述的免疫效应细胞，其中所述
CAR
是抗
DLL3CAR。11.
如权利要求
10
所述的免疫效应细胞，其中所述抗
DLL3 CAR
包含第一
V
H
H
抗体部分和第二
V
H
H
抗体部分，所述第一
V
H
H
抗体部分包含：
CDR1
，所述
CDR1
包含
SEQ ID NO:29
的氨基酸序列或其包含多达大约3个氨基酸取代的变体；
CDR2
，所述
CDR2
包含
SEQ ID NO:30
的氨基酸序列或其包含多达大约3个氨基酸取代的变体；和
CDR3
，所述
CDR3
包含
SEQ ID NO:31
的氨基酸序列或其包含多达大约3个氨基酸取代的变体；所述第二
V
H
H
抗体部分包含：
CDR1
，所述
CDR1
包含
SEQ ID NO:32
的氨基酸序列或其包含多达大约3个氨基酸取代的变体；
CDR2
，所述
CDR2
包含
SEQ ID NO:33
的氨基酸序列或其包含多达大约3个氨基酸取代的变体；和
CDR3
，所述
CDR3
包含
SEQ ID NO:34
的氨基酸序列或其包含多达大约3个氨基酸取代的变体
。12.
如权利要求
10
或权利要求
11
所述的免疫效应细胞，其中所述抗
DLL3 CAR
包含第一
V
H
H
抗体部分和第二
V
H
H
抗体部分，所述第一
V
H
H
抗体部分包含
SEQ ID NO:27
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:27
的氨基酸序列具有至少
75
％
、80
％
、90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％或
99
％同一性的氨基酸序列，所述第二
V
H
H
抗体部分包含
SEQ ID NO:28
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:28
的氨基酸序列具有至少
75
％
、80
％
、90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％或
99
％同一性的氨基酸序列
。13.
如权利要求
10
所述的免疫效应细胞，其中所述抗
DLL3 CAR
包含
SEQ ID NO:8
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:8
的氨基酸序列具有至少
75
％
、80
％
、90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％或
99
％同一性的氨基酸序列
。14.
如权利要求3至9中任一项所述的免疫效应细胞，其中所述
CAR
是抗
MSLN CAR。
15.
如权利要求
14
所述的免疫效应细胞，其中所述抗
MSLN CAR
包含
SEQ ID NO:41
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:41
的氨基酸序列具有至少
75
％
、80
％
、90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％或
99
％同一性的氨基酸序列
。16.
如权利要求3至9中任一项所述的免疫效应细胞，其中所述
CAR
是抗
GPC2CAR。17.
如权利要求
16
所述的免疫效应细胞，其中所述抗
GPC2 CAR
包含
SEQ ID NO:44
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:44
的氨基酸序列具有至少
75
％
、80
％
、90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％或
99
％同一性的氨基酸序列
。18.
如权利要求1至
17
中任一项所述的免疫效应细胞，其中所述
THP
选自由基于精氨酸
‑
甘氨酸
‑
天冬氨酸
(RGD)
的肽
、
基于天冬酰胺
‑
甘氨酸
‑
精氨酸
(NGR)
的肽及它们的组合组成的组
。19.
如权利要求1至
18
中任一项所述的免疫效应细胞，其中所述
THP
包含具有
SEQ ID NO:2
的氨基酸序列的
RGD
‑
4C
肽
。20.
如权利要求1至
18
中任一项所述的免疫效应细胞，其中所述
THP
包含具有
SEQ ID NO:38
的氨基酸序列的
NGR
肽
。21.
如权利要求3至
20
中任一项所述的免疫效应细胞，其中所述
THP
与跨膜结构域和
/
或铰链结构域融合
。22.
如权利要求
21
所述的免疫效应细胞，其中所述跨膜结构域和
/
或所述铰链结构域来自
CD7
或
TR2。23.
如权利要求
22
所述的免疫效应细胞，其中所述跨膜结构域包含
SEQ ID NO:14
的氨基酸序列，并且所述铰链结构域包含
SEQ ID NO:13
的氨基酸序列
。24.
如权利要求1至
23
中任一项所述的免疫效应细胞，其中所述
THP
与
TGF
‑
β
显性负受体
(TGF
‑
β
DNR)
融合
。25.
如权利要求
24
所述的免疫效应细胞，所述免疫效应细胞包含多肽，所述多肽包含：
i)SEQ ID NO:55
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:55
的氨基酸序列具有至少
75
％
、80
％
、90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％或
99
％同一性的氨基酸序列；
ii)SEQ ID NO:57
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:57
的氨基酸序列具有至少
75
％
、80
％
、90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％或
99
％同一性的氨基酸序列；
iii)SEQ ID NO:54
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:54
的氨基酸序列具有至少
75
％
、80
％
、90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％或
99
％同一性的氨基酸序列；
iv)SEQ ID NO:56
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:56
的氨基酸序列具有至少
75
％
、80
％
、90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％或
99
％同一性的氨基酸序列；
v)SEQ ID NO:58
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:58
的氨基酸序列具有至少
75
％
、80
％
、90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％或
99
％同一性的氨基酸序列；
vi)SEQ ID NO:53
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:53
的氨基酸序列具有至少
75
％
、80
％
、90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％或
99
％同一性的氨基酸序列；或
vii)SEQ ID NO:52
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:52
的氨基酸序列具有至少
75
％
、80
％
、90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％或
99
％同一性的氨基酸序列
。26.
如权利要求1至
25
中任一项所述的免疫效应细胞，其中所述
THP
与
GPI
融合
。27.
如权利要求1或2所述的免疫效应细胞，其中所述功能性外源受体是
cTCR。
28.
如权利要求
27
所述的免疫效应细胞，其中所述
cTCR
是抗
DLL3 cTCR。29.
如权利要求
28
所述的免疫效应细胞，其中所述抗
DLL3 cTCR
包含
SEQ ID NO:35
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:35
的氨基酸序列具有至少
75
％
、80
％
、90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％或
99
％同一性的氨基酸序列
。30.
如权利要求1‑
29
中任一项所述的免疫效应细胞，其包含
(i)
具有
SEQ ID NO:10、11、19、21
‑
26、36、37、39
‑
40、42、43、45、46、49、50
和
52
‑
58
中任一个所示的氨基酸序列的多肽；或
(ii)
与
SEQ ID NO:10、11、19、21
‑
26、36、37、39
‑
40、42、43、45、46、49、50
和
52
‑
58
中任一个具有至少
75
％
、80
％
、90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％或
99
％同一性的多肽
。31.
一种多肽，其包含：
(a)
功能性外源受体，以及
(b)
外源
THP。32.
如权利要求
31
所述的多肽，其中所述功能性外源受体选自由
CAR、
工程化
TCR、cTCR、TAC、TAC
样嵌合受体及它们的组合组成的组
。33.
如权利要求
32
所述的多肽，其中所述功能性外源受体是
CAR
，并且其中所述
CAR
包含：
(i)
胞外抗原结合结构域
、(ii)
跨膜结构域
、
和
(iii)
胞内信号传导结构域，任选地，所述
CAR...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐飞，郝瑞栋，张望，武术，
申请(专利权)人：南京传奇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：