一种具有快速吸收功效的胶原蛋白及其制备方法与应用技术

本申请公开了一种具有快速吸收功效的胶原蛋白及其制备方法与应用，涉及基因工程技术领域。一种具有快速吸收功效的胶原蛋白，包括具有如Seq ID NO.1所示的氨基酸序列的胶原蛋白，编码所述胶原蛋白的核苷酸序列如Seq ID NO.2所示。经过体外细胞验证和透皮吸收实验，本申请所制备的具有快速吸收功效的胶原蛋白具有明显的促细胞增殖和促细胞粘附活性，并具有较好的透皮吸收性能，可以被快速吸收，相比普通化工品类化妆品和激素类药物具有无副作用的巨大优势。用的巨大优势。用的巨大优势。

【技术实现步骤摘要】
一种具有快速吸收功效的胶原蛋白及其制备方法与应用


[0001]本申请涉及基因工程
，特别涉及一种具有快速吸收功效的胶原蛋白及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]胶原蛋白（Collagen，COL）是细胞外基质的主要组成成分，是体内含量最多、分布最广的蛋白质之一。已至少发现了30余种胶原蛋白链的编码基因，可以形成16种以上的胶原蛋白分子。蛋白质分子中一级结构关键部位氨基酸的改变，会直接影响其功能，这个关键部位就是蛋白质分子的活性中心，胶原蛋白一级结构的特征是含有甘氨酸的三联体（Gly
‑
X
‑
Y）重复排列，通常由3条相互独立的胶原蛋白肽链依靠甘氨酸之间形成的氢键维系三股螺旋相互缠绕的结构。按照被发现的先后顺序，胶原蛋白被命名为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型等，每种类型组成的3条肽链均存在区别。Ⅰ型胶原蛋白用于支撑皮肤硬度，使皮肤坚固，可以刺激重建胶原蛋白支架，有效改善皮肤凹陷、松弛、下垂；Ⅱ型胶原蛋白与皮肤损伤修复过程和修复质量紧密相关；III型胶原蛋白较细小，用于支撑皮肤柔嫩度，使皮肤细腻和富有弹性；修复纤维组织，改善皮肤粗糙、暗沉缺损等皮肤衰老问题。目前市场上的胶原蛋白主要分为天然提取和重组两大类，天然提取主要采用水解胶原蛋白法、酶解法等，但动物源天然提取的胶原蛋白变性温度是一般在39.5℃，在高于这个温度的情况下性能呈指数级下降，受到温度和酸碱变化而马上降解为明胶，失去生物学功效，且成分复杂，提纯较难，并且由于大部分天然提取物是由动物源制备，存在较高免疫原性，易致敏。重组胶原蛋白相对天然提取来说免疫原性低，变性温度高，纯度高，但现有原核表达系统存在容易形成包涵体、单一类型胶原蛋白功能单一、不利于快速吸收等缺陷。

技术实现思路

[0003]本申请的主要目的是提供一种具有快速吸收功效的胶原蛋白及其制备方法与应用，旨在解决现有的胶原蛋白透皮吸收性不佳的技术问题。
[0004]为实现上述目的，本申请提出了一种具有快速吸收功效的胶原蛋白，包括具有如Seq ID NO.1所示的氨基酸序列的胶原蛋白，编码所述胶原蛋白的核苷酸序列如Seq ID NO.2所示。
[0005]可选地，所述胶原蛋白的核苷酸序列是由Ⅰ型胶原蛋白的α1链三螺旋结构区域的核苷酸序列、Ⅱ型胶原蛋白的α1链三螺旋结构区域的核苷酸序列和Ⅲ型胶原蛋白的α1链三螺旋结构区域的核苷酸序列串联表达后进行人工设计所得。
[0006]可选地，所述具有快速吸收功效的胶原蛋白还包括对所述胶原蛋白进行修饰的脂质体。
[0007]可选地，所述胶原蛋白是经酿酒酵母表达系统异源表达所得。
[0008]可选地，所述胶原蛋白的核苷酸序列包括Not I酶切位点、Xba I酶切位点、起始密码子、终止密码子及6
×
His标签序列。
[0009]本申请还提出了一种具有快速吸收功效的胶原蛋白的制备方法，包括以下步骤：依据如Seq ID NO.2所示的核苷酸序列和酿酒酵母表达质粒pYES2/CT
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MFα，构建重组质粒pYES2/CT
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MFα
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rhCOL；将所述重组质粒pYES2/CT
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MFα
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rhCOL转化入酿酒酵母INVSc1感受态细胞，通过培养、PCR扩增、筛选，获得重组酵母工程菌INVSc1/pYES2/CT
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MFα
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rhCOL；对所述重组酵母工程菌进行诱导表达，并收集诱导产物；将所述诱导产物纯化后，获得rhCOL蛋白原液；对所述rhCOL蛋白原液进行脂质体修饰，获得具有快速吸收功效的胶原蛋白LIPO
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rhCOL。
[0010]可选地，所述依据如Seq ID NO.2所示的核苷酸序列和酿酒酵母表达质粒pYES2/CT
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MFα，构建重组质粒pYES2/CT
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MFα
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rhCOL的步骤，包括：依据如Seq ID NO.2所示的核苷酸序列进行基因片段合成，并将合成的基因片段插入酿酒酵母表达质粒pYES2/CT
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MFα上的酶切位点Not I和Xba I之间，获得重组质粒pYES2/CT
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MFα
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rhCOL。
[0011]可选地，所述将所述重组质粒pYES2/CT
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MFα
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rhCOL转化入酿酒酵母INVSc1感受态细胞，通过培养、PCR扩增、筛选，获得重组酵母工程菌INVSc1/pYES2/CT
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MFα
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rhCOL的步骤，包括：将重组质粒pYES2/CT
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MFα
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rhCOL加入酿酒酵母INVScl感受态细胞中，吹吸使其混合均匀，进行电击转化，再加入山梨醇溶液，混匀后，孵育，离心后弃去上清，涂布在SC
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U固体平板，经30℃恒温倒置培养，直至长出单克隆；经菌液PCR筛选阳性克隆，获得重组酵母工程菌INVSc1/pYES2/CT
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MFα
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rhCOL。
[0012]可选地，所述对所述重组酵母工程菌进行诱导表达，并收集诱导产物的步骤，包括：挑取所述重组酵母工程菌单菌落接种于SC
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U选择培养基中，在30
º
C、220rpm的条件下振荡培养，测定OD
600nm
吸光值，再转接于SC
‑
U诱导培养基中，使初始OD
600nm
吸光值达到0.4；在30
º
C、220rpm的条件下诱导20h后，离心收集诱导上清；将所述诱导上清经0.22μm滤膜过滤，得到诱导产物。
[0013]可选地，所述将所述诱导产物纯化后，获得rhCOL蛋白原液的步骤，包括：将所述诱导产物经过镍离子螯合亲和层析柱纯化，洗脱并收集洗脱峰所对应的蛋白，即获得rhCOL蛋白原液。
[0014]可选地，所述对所述rhCOL蛋白原液进行脂质体修饰，获得具有快速吸收功效的胶原蛋白LIPO
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rhCOL的步骤，包括：将所述rhCOL蛋白原液、卵磷脂、胆固醇和丙二醇加热溶解，得有机相；将水加热，得水相；将有机相搅拌注入水相中，混匀，再进行均质乳化，得到混悬胶原蛋白脂质体；再将所述混悬胶原蛋白脂质体经0.22μm滤膜过滤，获得具有快速吸收功效的胶原蛋白LIPO
‑
rhCOL。
[0015]本申请还提出了一种具有快速吸收功效的胶原蛋白在护肤品中的应用，采用上述
具有快速吸收功效的胶原蛋白作为护肤品中的活性成分。
[0016]本专利技术的有益效果为：本专利技术通过基因重组及生物工程技术直接生产出结构稳定、具有生物学功能的重组胶原蛋白，不仅解决了天然蛋白分子量过大，难以从动物组织中提取，加工性较差的缺点，而且能够减少排异反应，规避感染疾病的风险，同时本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有快速吸收功效的胶原蛋白，其特征在于，包括具有如Seq ID NO.1所示的氨基酸序列的胶原蛋白，编码所述胶原蛋白的核苷酸序列如Seq ID NO.2所示。2.根据权利要求1所述的具有快速吸收功效的胶原蛋白，其特征在于，所述胶原蛋白的核苷酸序列是由Ⅰ型胶原蛋白的α1链三螺旋结构区域的核苷酸序列、Ⅱ型胶原蛋白的α1链三螺旋结构区域的核苷酸序列和Ⅲ型胶原蛋白的α1链三螺旋结构区域的核苷酸序列串联表达后进行人工设计所得。3.根据权利要求2所述的具有快速吸收功效的胶原蛋白，其特征在于，所述具有快速吸收功效的胶原蛋白还包括对所述胶原蛋白进行修饰的脂质体。4.根据权利要求1所述的具有快速吸收功效的胶原蛋白，其特征在于，所述胶原蛋白是经酿酒酵母表达系统异源表达所得。5.根据权利要求1所述的具有快速吸收功效的胶原蛋白，其特征在于，所述胶原蛋白的核苷酸序列包括Not I酶切位点、Xba I酶切位点、起始密码子、终止密码子及6
×
His标签序列。6.一种如权利要求3
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5任一项所述的具有快速吸收功效的胶原蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：依据如Seq ID NO.2所示的核苷酸序列和酿酒酵母表达质粒pYES2/CT
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MFα，构建重组质粒pYES2/CT
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MFα
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rhCOL；将所述重组质粒pYES2/CT
‑
MFα
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rhCOL转化入酿酒酵母INVSc1感受态细胞，通过培养、PCR扩增、筛选，获得重组酵母工程菌INVSc1/pYES2/CT
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MFα
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rhCOL；对所述重组酵母工程菌进行诱导表达，并收集诱导产物；将所述诱导产物纯化后，获得rhCOL蛋白原液；对所述rhCOL蛋白原液进行脂质体修饰，获得具有快速吸收功效的胶原蛋白LIPO
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rhCOL。7.根据权利要求6所述的具有快速吸收功效的胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述依据如Seq ID NO.2所示的核苷酸序列和酿酒酵母表达质粒pYES2/CT
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MFα，构建重组质粒pYES2/CT
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MFα
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rhCOL的步骤，包括：依据如Seq ID NO.2所示的核苷酸序列进行基因片段合成，并将合成的基因片段插入酿酒酵母表达质粒pYES2/CT
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MFα上的酶切位点Not I和Xba I之间，获得重组质粒pYES2/CT
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MFα
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rhCOL。8.根据权利要求6所述的具有...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵俊，周炜，李增，朱何龙，何志远，吴博，蒋敏之，张勇，
申请(专利权)人：英特菲尔成都生物制品有限责任公司，
类型：发明
国别省市：