【技术实现步骤摘要】
一种具有抗衰活性的重组弹性蛋白及其制备方法与应用
[0001]本专利技术涉及基因工程
,特别涉及一种具有抗衰活性的重组弹性蛋白及其制备方法与应用。
技术介绍
[0002]弹性蛋白(elastin)属于细胞外基质蛋白(extracellular matrix,ECM),主要分布于血管、皮肤、韧带和肺等组织器官。弹性蛋白能够提供足够的弹性和恢复力,为组织提供拉伸和恢复其原始形状的能力。弹性蛋白的可溶性前体称为原弹性蛋白(tropoelastin),原弹性蛋白经过自凝聚,交联成不可溶的渔网状结构,称为弹性蛋白。这使得从动物组织中提取弹性蛋白非常困难,这需要分解弹性蛋白分子进行释放,每个原弹性蛋白分子具有36个随机排列的结构域,具有交替的疏水性和亲水性结构域,且异源提取的天然弹性蛋白对人体有一定的排斥反应,同时具有潜在的携带病原体危害人体的风险。而重组弹性蛋白是原弹性蛋白的疏水结构域衍生来的循环重复氨基酸序列,是一种经过人工改造的、具有弹性且随温度变化会发生相变的基因工程多肽,在结构上主要由Val
‑
Pro
‑
Gly
‑
Xaa
‑
Gly五肽段单元串连重复组成,Xaa可以是除脯氨酸之外的任何氨基酸。现有的研究已发现此多肽序列像原弹性蛋白一样具有生物学活性。且不经过任何修饰的类人弹性蛋白可以作为细胞培养表面的修饰物以促进细胞粘附特性和增殖能力,有希望成为新型的生物医学材料。因此,本申请通过获取一种新型重组弹性蛋白,促进其促细胞增殖和促细胞粘附活性,使其 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种具有抗衰活性的重组弹性蛋白,其特征在于,所述重组弹性蛋白的氨基酸序列如Seq ID NO.5所示,编码所述重组弹性蛋白的核苷酸序列如Seq ID NO.6所示。2.根据权利要求1所述的具有抗衰活性的重组弹性蛋白,其特征在于,所述重组弹性蛋白是经毕赤酵母表达的人弹性蛋白与人胶原蛋白的融合蛋白。3.根据权利要求1所述的具有抗衰活性的重组弹性蛋白,其特征在于,所述重组弹性蛋白的氨基酸序列是由连接肽片段串联表达人源化
Ⅰ×Ⅱ×Ⅲ
型胶原蛋白三螺旋区重复片段和类弹性蛋白六肽重复片段所得。4.根据权利要求3所述的具有抗衰活性的重组弹性蛋白,其特征在于,所述连接肽片段为弹性蛋白亲水区结构域片段。5.根据权利要求3所述的具有抗衰活性的重组弹性蛋白,其特征在于,所述人源化
Ⅰ×Ⅱ×Ⅲ
型胶原蛋白三螺旋区重复片段为将如Seq ID NO.1所示的人源Ⅰ型胶原蛋白肽片段、如Seq ID NO.2所示的人源Ⅱ型胶原蛋白肽片段和如Seq ID NO.3所示的人源Ⅲ型胶原蛋白肽片段依次首尾相连所构成的胶原蛋白融合肽,所述胶原蛋白融合肽的氨基酸序列如Seq ID NO.4所示。6.根据权利要求3所述的具有抗衰活性的重组弹性蛋白,其特征在于,所述类弹性蛋白六肽重复片段为类弹性蛋白六肽氨基酸序列串联重复5次所得。7.一种如权利要求1
‑
6任一项所述的具有抗衰活性的重组弹性蛋白的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:依据如Seq ID NO.6所示的核苷酸序列,构建pPIC9K
‑
Col
‑
ELPs重组质粒;制备GS115感受态细胞,并将所述pPIC9K
‑
Col
‑
ELPs重组质粒电转化至所述GS115感受态细胞,经过培养和阳性转化子筛选,获得重组酵母工程菌;将所述重组酵母工程菌进行放大培养,并经诱导表达后,收集诱导上清;将所述诱导上清纯化后,获得重组弹性蛋白。8.根据权利要求7所述的具有抗衰活性的重组弹性蛋白的制备方法,其特征在于,所述依据如Seq ID NO.6所示的核苷酸序列,构建pPIC9K
‑
Col
‑
ELPs重组质粒的步骤,包括:依据如Seq ID NO.6所示的核苷酸序列进行基因片段合成,并将合成的基...
【专利技术属性】
技术研发人员:赵俊,许高涛,李增,赵轩,王蓉,何志远,夏兵兵,许智勇,周炜,
申请(专利权)人:英特菲尔成都生物制品有限责任公司,
类型:发明
国别省市:
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。