本发明专利技术提供了一种SLC1A5作为细胞外囊泡支架蛋白的应用、细胞外囊泡及其制备方法和应用，涉及生物技术领域。本发明专利技术提供的SLC1A5或其片段应用于细胞外囊泡的支架蛋白，过表达后不会对细胞的生长造成影响，并且在细胞外囊泡中的富集程度高于现有用于治疗的支架蛋白。本发明专利技术提供的细胞外囊泡包括支架蛋白和与所述支架蛋白结合的生物活性结构域，其中支架蛋白为SLC1A5或其片段。本发明专利技术提供了新的支架蛋白，为细胞外囊泡的载药或标记用途提供了新的丰度更高的连接基础。丰度更高的连接基础。丰度更高的连接基础。
【技术实现步骤摘要】
SLC1A5作为细胞外囊泡支架蛋白的应用、细胞外囊泡及其制备方法和应用
[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种SLC1A5作为细胞外囊泡支架蛋白的应用、细胞外囊泡及其制备方法和应用。
技术介绍
[0002]腺相关病毒（AAV）因其极低的免疫原性，被认为是目前最安全、最有前景的药物递送载体。但其载量较小（小于4.7k），限制了其在基因治疗领域的部分应用。外泌体属于纳米级颗粒，免疫原性低，适合作为一种药物载体。且外泌体体积显著大于AAV，已有文献报道，外泌体可以容纳6k的核酸，相比于AAV，具有一定的优势。在天然外泌体中，某些蛋白会显著富集，这些蛋白可作为支架蛋白，而将某种特殊的蛋白与支架蛋白融合表达后，这种特殊的蛋白也会富集，进而实现蛋白、核酸在外泌体上的装载。通过将外泌体递送给受体细胞，使装载的蛋白或核酸发挥作用，达到治疗的作用。
[0003]现有技术中常使用的一些支架蛋白，比如CD63、CD81等，在外泌体中分布不均，只有部分外泌体中含有这种蛋白。在药物递送中，上述支架蛋白存在的缺陷会影响外泌体递送效率，进而限制工程化外泌体潜在的临床应用价值。因此需要寻找新的支架蛋白以改善目前外泌体支架蛋白的现状。
[0004]有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
[0005]为了解决现有技术中存在的上述问题，本专利技术提供了SLC1A5或其片段作为细胞外囊泡支架蛋白的应用，SLC1A5或其片段作为一种细胞外囊泡的支架蛋白，过表达后不会对细胞的生长造成影响，并且在细胞外囊泡中的富集程度高于现有用于治疗的支架蛋白，同时筛选出的支架蛋白在细胞外囊泡的分布至少与常用的支架蛋白（如CD63）分布相当。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：根据本专利技术的一个方面，提供了一种SLC1A5或其片段作为细胞外囊泡支架蛋白的应用。
[0007]在一些可选的实施方式中，所述SLC1A5至少具有SEQ ID NO: 6所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO: 6具有至少85%序列同一性的氨基酸序列；或，所述SLC1A5具有SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO: 1具有至少85%序列同一性的氨基酸序列。
[0008]在一些可选的实施方式中，所述细胞外囊泡包括外泌体、微囊泡、凋亡小体、肿瘤小泡和纳米囊泡中的一种或多种；和/或，所述细胞外囊泡是定位于肝细胞的细胞外囊泡；和/或，所述SLC1A5或其片段定位于细胞外囊泡。
[0009]在一些可选的实施方式中，所述SLC1A5或其片段在产生所述细胞外囊泡的细胞中
过表达。
[0010]根据本专利技术的另一个方面，还提供了一种细胞外囊泡，所述细胞外囊泡包含支架蛋白和活性结构域；所述支架蛋白包含SLC1A5或其片段。
[0011]在一些可选的实施方式中，所述SLC1A5至少具有SEQ ID NO: 6所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO: 6具有至少85%序列同一性的氨基酸序列；或，所述SLC1A5具有SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO: 1具有至少85%序列同一性的氨基酸序列。
[0012]在一些可选的实施方式中，所述活性结构域包括多肽、多核苷酸、化合物或它们的任何组合。
[0013]在一些可选的实施方式中，所述支架蛋白直接与所述活性结构域连接或通过连接子与所述活性结构域连接。
[0014]在一些可选的实施方式中，所述活性结构域包括如下（
ⅰ
）~（
ⅵ
）中任意一种或几种的组合：（
ⅰ
）反义寡核苷酸、mRNA、siRNA、miRNA、shRNA、LncRNA、circRNA或它们的任何组合；（
ⅱ
）抗体或其抗原结合片段，包括全长抗体、scFv、（scFv）2、Fab、Fab'、F（ab'）2、F（ab1）2、Fv、dAb和Fd片段、双功能抗体、抗体相关多肽或它们的任何片段或它们的任何组合；（
ⅲ
）核苷酸结合蛋白或其片段；（
ⅳ
）核苷酸结合蛋白或其片段，且所述核苷酸结合蛋白或其片段结合多核苷酸；（
ⅴ
）荧光标记蛋白和/或标签蛋白；（
ⅵ
）靶向肽、重组肽和治疗肽中的一种或多种的组合。
[0015]在一些可选的实施方式中，所述核苷酸结合蛋白选自Ku蛋白、Sm7蛋白、MS2外壳蛋白、PP7外壳蛋白、Com RNA结合蛋白或适体配体，或它们的任何组合、功能性变体、片段或结构域。
[0016]根据本专利技术的另一个方面，还提供了一种表达系统，所述表达系统包括：第一表达元件，其编码支架蛋白，其中所述支架蛋白为SLC1A5或其片段；和第二表达元件，其编码活性结构域。
[0017]根据本专利技术的另一个方面，还提供了一种细胞，该细胞包含上述的表达系统。
[0018]根据本专利技术的另一个方面，还提供了一种细胞外囊泡的制备方法，包括在细胞中过表达含有SLC1A5或其片段的多肽，然后从细胞或含有细胞的培养体系中分离或制造细胞外囊泡。
[0019]根据本专利技术的另一个方面，还提供了上述细胞外囊泡，或上述表达系统，或上述细胞，或上述细胞外囊泡的制备方法在制备用于预防或治疗疾病中的药物中的用途；所述疾病包括癌症、炎症性病症、神经变性病症、中枢神经疾病或代谢疾病。
[0020]根据本专利技术的另一个方面，还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含上述细胞外囊泡或上述细胞外囊泡的制备方法制备得到的细胞外囊泡；和药学上可接受的载体。
[0021]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
本专利技术提供的SLC1A5或其片段作为细胞外囊泡支架蛋白的应用，为细胞外囊泡的载药或标记用途提供了新的丰度更高的连接基础。SLC1A5或其片段作为支架蛋白在细胞外囊泡的分布至少可达到常用的支架蛋白（如CD63）水平。SLC1A5或其片段能够富集在外泌体上，可以作为外泌体支架蛋白来运载外源的蛋白或者核酸，以实现预期的效果。本专利技术提供的细胞外囊泡包含SLC1A5或其片段，通过SLC1A5作为蛋白支架装载其他活性结构域，例如多肽和多核苷酸等，丰富了外泌体的功能，可作为药物载体以及具有示踪和靶向功能，进而可用于制备药物，以提高药物的治疗效果和靶向能力。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0023]图1为实施例2中过表达不同支架蛋白的外泌体的TEM结果；图2为实施例2中过表达不同支架蛋白的外泌体的标志物免疫印记检测结果，其中泳道1为293细胞裂解物，泳道2为293Evs，泳道3为SLC1A5
‑
293Evs，泳道4为CD63
‑...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.SLC1A5或其片段作为细胞外囊泡支架蛋白的应用。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述SLC1A5至少具有SEQ ID NO: 6所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO: 6具有至少85%序列同一性的氨基酸序列；或，所述SLC1A5具有SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO: 1具有至少85%序列同一性的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述细胞外囊泡包括外泌体、微囊泡、凋亡小体、肿瘤小泡和纳米囊泡中的一种或多种；和/或，所述细胞外囊泡是定位于肝细胞的细胞外囊泡；和/或，所述SLC1A5或其片段定位于细胞外囊泡。4.根据权利要求1~3任一项所述的应用，其特征在于，所述SLC1A5或其片段在产生所述细胞外囊泡的细胞中过表达。5.一种细胞外囊泡，其特征在于，所述细胞外囊泡包含支架蛋白和活性结构域；所述支架蛋白包含SLC1A5或其片段。6. 根据权利要求5所述的细胞外囊泡，其特征在于，所述SLC1A5至少具有SEQ ID NO: 6所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO: 6具有至少85%序列同一性的氨基酸序列；或，所述SLC1A5具有SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO: 1具有至少85%序列同一性的氨基酸序列。7.根据权利要求5或6所述的细胞外囊泡，其特征在于，所述活性结构域包括多肽、多核苷酸、化合物或它们的任何组合。8.根据权利要求7所述的细胞外囊泡，其特征在于，所述支架蛋白直接与所述活性结构域连接或通过连接子与所述活性结构域连接。9.根据权利要求7所述的细胞外囊泡，其特征在于，所述活性结构域包括如下（
ⅰ
）~（
ⅵ
）中任意一种或几种的组合：（
ⅰ
）反义寡核苷酸、mRNA、siRNA、miRNA、shRNA、LncRNA、circRNA或它们的任何组合；（
ⅱ
）抗体或其抗原结合片段，包括全长抗体、scFv、（scFv）2、Fab、Fab'、F（ab'）2、F（ab1）2...
【专利技术属性】
技术研发人员：葛啸虎，董凤伟，陆路，陈宁，尹建新，郭小飞，王淼，韩春乐，
申请(专利权)人：天津外泌体科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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